中藥復方合劑對脫毛小鼠毛發生長的影響

麥五久代·吐爾遜，曹少宇，朱嬌嬌，陳沙沙，王璽涵，呂蕊花，賀太平，史琳娜

(陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712046)

0 引言

脫發為皮膚科常見病，現代醫學認為脫發與遺傳、免疫、病源微生物感染、內分泌紊亂、營養不良、血管機能障礙等因素有關[1]。現有治療藥物存在不同程度的副作用，如非那雄胺和米諾地爾是美國FDA批準的治療用藥，臨床療效顯著，但易造成性功能受損及皮膚過敏癥狀等不良反應[2]。我國中草藥資源豐富，許多中藥材具有養發、生發的作用，且有安全高、無毒副作用等優點[3-4]。本實驗選用維吾爾族民間傳統的養眉、生眉草藥烏斯瑪草，配伍何首烏、生姜、側柏葉和女貞子，組合成中藥復方合劑，通過實驗觀察其對小鼠毛發生長的影響，為進一步研發生發藥劑提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗用品

(1)藥品：烏斯瑪草，購自新疆·伊犁州烏斯瑪草種植園。中藥材何首烏、生姜、側柏葉和女貞子，均購自陜西中醫藥大學附屬醫院。(2)實驗動物：昆明小鼠20只，雄性，6～8周齡，體重(20±10)g，由成都達碩實驗動物有限公司提供。(3)試劑與儀器：石蠟、甲醛、無水乙醇、二甲苯、伊紅染液、蘇木精染液均購自博泰化玻儀器公司，薇婷絲滑泌香脫毛膏(利潔時家化有限公司)。Leica RM 2235切片機(德國徠卡公司)，ZEISS顯微鏡(德國蔡司公司)，數顯游標卡尺(霍特電子有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 中草藥有效成分提取及配比

水提法分別制備側伯葉、女貞子、何首烏水提物。生姜和烏斯瑪草搗成汁液，將過濾后的汁液與側伯葉、女貞子、何首烏水提物混合制備成中藥復方合劑，每毫升混合液含側柏葉0.4mg、女貞子0.2mg、何首烏0.4mg、生姜1mg、烏斯瑪草6mg，4℃保存備用。

1.2.2 小鼠脫毛模型構建

昆明小鼠20只，背部先用剃毛刀剃除毛發，去毛面積約2cm×2cm，再用脫毛膏去除殘留毛發，確保局部皮膚毛發完全脫掉而呈粉紅色。

1.2.3 分組及給藥

脫毛次日，選取脫毛區光滑且無損傷的小鼠隨機分為對照組和中藥組，每組10只。中藥組小鼠以棉簽直接蘸取中藥復方合劑涂抹脫毛區，每天1次，每次1 mL，連續28d。對照組涂抹蒸餾水。

1.2.4 小鼠毛發生長情況觀察

分別于造模后第7、14、21、28d，對小鼠背部脫毛區進行拍照，并從小鼠原脫毛部位用鑷子拔取5根毛發，用數顯游標卡尺測量毛發長度，用光學顯微鏡測微尺測量毛發粗細。

1.2.5 小鼠皮膚組織形態學觀察

涂藥第28d時，頸椎脫臼法處死小鼠后切取小鼠原脫毛區皮膚組織，采用10%甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋后切片，HE染色，纖維鏡下觀察小鼠皮膚組織形態學變化。觀察指標包括：①一般組織學檢查：觀察皮膚完整性，有無充血、水腫、炎細胞浸潤等；②皮膚毛囊計數。

1.2.6 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用(±s)表示，比較采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 實驗結果

2.1 小鼠脫毛區毛發生長情況肉眼觀察結果

由圖1可見，與對照組相比，中藥組小鼠脫毛區毛發生長速度顯著增快。涂藥第14d，中藥組小鼠脫毛區皮膚已基本被毛發覆蓋，而對照組小鼠脫毛區皮膚尚可觀察到粉紅色皮膚底層。涂藥第21d，中藥組小鼠脫毛區已全部長滿毛發，對照組小鼠脫毛區毛發才開始覆蓋粉紅色皮膚底層。

圖1 不同時間點小鼠脫毛區毛發生長情況觀察

2.2 小鼠脫毛區新生毛發長度和粗度測定

中藥復方合劑可顯著促進小鼠脫毛區新生毛發長度的增長，用藥第7、14、21、28d，中藥組小鼠毛發長度均顯著大于對照組(見表1)。此外，中藥復方合劑也可顯著促進小鼠脫毛區新生毛發粗度的增長，用藥第7和28d，中藥組小鼠毛發粗度顯著大于對照組，尤其在毛發生長速度最快的前7天，促生長效果最顯著(見表2)。

表1 小鼠脫毛區毛發長度測量結果(±s，mm)

表1 小鼠脫毛區毛發長度測量結果(±s，mm)

注：*P＜0.05表示有顯著性；**P＜0.01表示有極顯著性。

用藥天數 毛發長度對照組 中藥組7d 3.917±0.371 4.291±0.750*14d 4.776±0.295 5.639±0.165**21d 5.110±0.392 6.536±0.207**28d 5.536±0.207 6.700±0.231**

表2 小鼠脫毛區毛發粗細測量結果(±s，μm)

表2 小鼠脫毛區毛發粗細測量結果(±s，μm)

注：*P＜0.05表有顯著性；**P＜0.01表示有極顯著性。

用藥天數 毛發粗細對照組 中藥組7d 3.715±0.928 4.686±0.236**14d 4.609±0.155 4.729±0.306 21d 4.771±0.426 4.971±0.271 28d 5.143±0.237 5.383±0.176*

2.3 小鼠脫毛區皮膚組織形態學觀察結果

脫毛區皮膚組織形態學觀察結果顯示，兩組小鼠皮膚結構均完整，真皮內無血管擴張充血和炎細胞浸潤。中藥組小鼠毛囊分布稠密、毛乳頭較大、毛根鞘較厚，對照組小鼠毛囊分布稀疏、毛乳頭較小、毛根鞘較薄(圖2)。毛囊計數結果顯示，中藥組小鼠皮膚組織內毛囊數顯著大于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)(見表3)。

圖2 小鼠脫毛區皮膚組織HE染色結果(HE10×10)

表3 小鼠脫毛區皮膚毛囊計數結果

3 討論

中醫認為毛發與五臟皆有關系，發為腎精之外候，脾主運化充養皮毛，肺主宣發同時助心行血，肝主疏泄，血生氣，氣生精，氣血充沛則毛發生長旺盛[5]。側柏葉性味苦、澀，寒，歸肺、肝、脾經，涼血止血，生發烏發。現代研究證實側柏葉具有促進毛發生長、止血、抗菌、抗氧化、抗腫瘤等作用[6]。側柏葉的揮發油可誘導了小鼠毛囊細胞中的β-catenin蛋白的表達，進而促進了毛囊的再生[7]。何首烏具有補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨、化濁降脂之功效[8]。實驗證實何首烏提取物能誘導C57BL/6J小鼠毛發由休止期進入生長期，從而促進毛發生長[9]。中醫認為女貞子性味甘、苦、涼，歸肝、腎經，具有滋補肝腎，明目烏發之功效。研究發現女貞子提取物可促進人黑素細胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成[10]。生姜味辛，具有解表發散、行氣活血作用，外涂有助于舒張血管，改善受損皮膚的局部血液循環，促使毛發更生，對治療肝腎不足型斑禿有顯著效果[11]。烏斯瑪草為中國新疆特有的一種菘藍，是維吾爾族民間傳統的養眉、生眉藥草。現代研究證實烏斯瑪草可顯著促進雄激素性脫發模型小鼠毛發的生長[12]。本實驗以烏斯瑪草配伍4味具有生發功效中草藥制備成中藥復方合劑，觀察其對小鼠毛發生長的影響，實驗結果顯示中藥組小鼠毛發生長速度、長度、粗度、皮膚毛囊數目均顯著大于對照組，表明中藥復方合劑具有顯著促進毛發生長和毛囊再生的作用，具有臨床應用價值，也可進一步開發為生發養發保健產品。