血小板反應(yīng)蛋白-1和I型纖溶酶原激活物抑制因子在系膜增生性腎小球腎炎患者中的表達及臨床意義

王勤超，仇 琳

(寶雞市中心醫(yī)院，陜西 寶雞 721008)

系膜增生性腎小球腎炎的主要特征是腎小球彌漫性系膜細胞增生和(或)系膜基質(zhì)增多[1]，是我國常見的腎小球疾病病理類型。近年來，有大量研究表明Ⅰ型纖溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)可影響腎小球內(nèi)細胞外基質(zhì)(ECM)合成及降解平衡，促使腎小球硬化[2-4]，血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)具有致纖維化作用[5-6]，兩者對本病的發(fā)生具有一定的作用。為此，本研究選取了我院腎內(nèi)科2013年5月～2018年5月收治的46例系膜增生性腎小球腎炎患者腎組織，探討血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)和I型纖溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)在系膜增生性腎小球腎炎患者中的表達及臨床意義。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：研究對象選取2013年5月～2018年5月本院腎內(nèi)科收治的系膜增生性腎小球腎炎患者46例，行腎穿刺活檢取標本固定、石蠟包埋，所有患者均經(jīng)腎活檢組織病理檢查確診。其中男28例，女18例，年齡19～56歲，平均(34.75±6.24)歲，病程1個月～9年，平均(14.5±6.31)個月；其中有16例患者表現(xiàn)為腎病綜合征，25例為慢性腎小球腎炎，5例為隱匿性腎炎；伴有血尿8例，伴血壓升高20例，伴水腫37例，伴納呆6例，伴腰酸乏力16例；發(fā)病前無誘因16例，有上呼吸道感染26例，尿路感染4例。

對照組選取2013年5月～2018年5月意外身亡的尸檢腎組織標本8例，本組研究對象均無腎組織病變及損害、腎功能正常，且符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。其中男5例，女3例，年齡23～59歲，平均(36.00±5.96)歲。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2研究方法

1.2.1主要試劑：兔抗TSP-1一抗、鼠抗人PAI-1一抗及免疫組化染色試劑盒(即用型)均購自武漢博士德公司。

1.2.2方法：對46例系膜增生性腎小球腎炎患者腎穿取活檢標本行TSP-1、PAI-1免疫組織化學(xué)染色，采用SABC染色法[7]。組織切片常規(guī)脫蠟、沖洗，加3%甲醇過氧化氫靜置20 min。將相同病例標本行TSP-1免疫組織化學(xué)染色與PAI-1免疫組化染色，嚴格按照試劑盒說明書操作。分別以已知系膜增生性腎小球腎炎TSP-1、PAI-1陽性結(jié)果作為陽性參考，以PBS液代替一抗、二抗的結(jié)果作為陰性參考。

1.3病理評分標準：參照1982年WHO關(guān)于腎小球病理學(xué)分類標準[8]。腎小球病理評分標準：從系膜細胞增殖、基質(zhì)增寬、硬化改變?nèi)齻€方面評估，按正常、輕度、中度、重度分別記為0～3分。其中，系膜細胞輕度增殖、毛細血管袢無明顯影響、<30%的腎小球硬化為輕度；系膜細胞中度增殖、50%以下毛細血管袢狹窄閉鎖、30%～60%腎小球硬化為中度；系膜細胞重度增殖、50%以上毛細血管袢狹窄閉鎖、>60%腎小球硬化為重度。腎小管間質(zhì)病理評分標準：從腎小管變性、萎縮、間質(zhì)炎性細胞浸潤、間質(zhì)纖維化四個方面評估，其中腎小管輕度受損及小灶狀腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細胞浸潤、間質(zhì)纖維化為輕度；腎小管中度受損及片灶狀腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細胞浸潤、間質(zhì)纖維化為中度；腎小管重度受損及彌漫性腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細胞浸潤、間質(zhì)纖維化為重度。按正常、輕度、中度、重度分別記為0～3分。腎小球病理按總評分1～4分為輕度、5～8分中度、9～12分重度，腎間質(zhì)病理損傷程度按總評分1～4分為輕度損傷、5～8分中度、9～12分重度。

2 結(jié)果

2.1系膜組織增生程度與臨床指標的關(guān)系：重度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇水平均明顯高于輕度、中度系膜組織增生患者，血清白蛋白低于后兩者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。中度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量高于輕度系膜組織增生患者、白蛋白水平低于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。三酰甘油、總膽固醇比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，三組患者肌酐清除率(Ccr)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 系膜組織增生程度與臨床指標的關(guān)系

2.2腎間質(zhì)病變與腎功能關(guān)系：有腎間質(zhì)病變的患者24 h尿蛋白定量、尿a-1微球蛋白水平均高于無腎間質(zhì)病變者、Ccr水平低于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 腎間質(zhì)病變與腎功能關(guān)系

2.3系膜增生性腎小球腎炎患者腎組織標本與正常腎組織標本TSP-1的表達情況比較：TSP-1在對照組標本腎小球和腎小管中均無陽性表達，在不同程度系膜增生、不同腎小管損傷程度中的表達水平為輕度<中度<重度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。①腎小球：對照組8例，TSP-1表達水平0；輕度系膜增生23例，TSP-1表達水平0.38±0.08；中度系膜增生13例，TSP-1表達水平0.49±0.10；重度系膜增生10例，TSP-1表達水平0.97±0.14[F(后三組)=121.48，P(后三組)<0.001]。②腎小管：對照組8例，TSP-1表達水平0；輕度損傷10例，TSP-1表達水平0.76±0.18；中度損傷5例，TSP-1表達水平1.05±0.19；重度損傷6例，TSP-1表達水平2.10±0.25[F(后三組)=83.03，P(后三組)<0.001]。

2.4系膜增生性腎小球腎炎患者腎組織標本和正常腎組織標本PAI-1的表達情況比較：PAI-1在對照組標本腎小球和腎小管中均無陽性表達，在不同程度系膜增生、不同腎小管損傷程度中的表達水平為輕度<中度<重度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。①腎小球：對照組8例，PAI-1表達水平0；輕度系膜增生23例，PAI-1表達水平0.15±0.10；中度系膜增生13例，PAI-1表達水平0.23±0.12；重度系膜增生10例，PAI-1表達水平0.41±0.09[F(后三組)=21.75，P(后三組)<0.001]。②腎小管：對照組8例，PAI-1表達水平0；輕度損傷10例，PAI-1表達水平0.70±0.18；中度損傷5例，PAI-1表達水平0.94±0.20；重度損傷6例，PAI-1表達水平1.42±0.24[F(后三組)=23.70，P(后三組)<0.001]。

3 討論

系膜增生性腎小球腎炎是腎小球腎炎的病理類型之一，在我國與澳大利亞較常見[9]，多發(fā)生于青少年，多數(shù)患者預(yù)后良好，部分患者可出現(xiàn)腎功能衰退，甚至進展為終末期腎功能衰竭[10]。本病多由上呼吸道感染誘發(fā)，臨床表現(xiàn)多樣，多表現(xiàn)為原發(fā)性腎病綜合征[11]、無癥狀性血尿、蛋白尿等癥狀，無特異性，臨床診斷及預(yù)后判斷較為困難。目前本病的病因、病理及發(fā)病機制尚不明確，為此，醫(yī)學(xué)工作者致力于尋求敏感、特異的蛋白分子作為本病病理改變程度的標志，以指導(dǎo)臨床診療。多數(shù)研究表明腎小球毛細血管內(nèi)皮損傷、凝血功能障礙是本病發(fā)生的重要因素[12-14]，其致腎小球內(nèi)彌漫性血栓形成，造成腎小球硬化，其中纖溶酶系統(tǒng)失衡造成ECM沉積是腎小球硬化的關(guān)鍵因素[15-16]。PAI-1是調(diào)節(jié)纖溶酶原激活物(PA)的重要分子，與u-PA[17]等結(jié)合可抑制PA活性，從而促使ECM合成、降解紊亂。TSP-1是一種內(nèi)源性血管新生抑制物，可抑制內(nèi)皮細胞增生、誘導(dǎo)系膜細胞的增生和遷移、激活TGF-β[18-19]，促進腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。既往研究表明本病腎小球系膜區(qū)、腎小管間質(zhì)可發(fā)現(xiàn)高表達的PAI-1和TSP-1[20]，提示兩者與系膜增生性腎小球腎炎發(fā)病密切相關(guān)。

本組研究表明，重度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇水平均明顯高于輕度、中度系膜組織增生患者，血清白蛋白低于后兩者；中度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量高于輕度系膜組織增生患者、白蛋白水平低于后者，三酰甘油、總膽固醇比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；三組患者Ccr差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。有腎間質(zhì)病變的患者24 h尿蛋白定量、尿a-1微球蛋白水平均高于無腎間質(zhì)病變者、Ccr水平低于后者。由此可見，患者腎小球病理改變越嚴重，24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇、血清白蛋白等臨床實驗室指標與正常范圍相差越大，出現(xiàn)腎間質(zhì)病變患者甚至可出現(xiàn)腎功能損害，提示病理改變程度可反映患者病情程度，因此，臨床上對于腎小球、腎間質(zhì)病理改變程度的判斷具有重要意義。TSP-1、PAI-1在正常腎組織標本中均無陽性表達，在不同程度系膜增生、不同腎小管損傷程度中的表達水平為輕度<中度<重度。由此可見，TSP-1、PAI-1與腎小球系膜增生、腎小管間質(zhì)損傷等病理改變密不可分，可促進系膜增生性腎小球腎炎的發(fā)病，兩者水平高低間接反映了本病病情進展。

綜上所述，系膜增生性腎小球腎炎的病理改變與臨床指標24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇水平、尿a-1微球蛋白、Ccr水平等有一定關(guān)系，TSP-1、PAI-1在其腎小球和腎小管間質(zhì)中的表達顯著升高，隨病情嚴重程度增加而升高，提示TSP-1、PAI-1在系膜增生性腎小球腎炎發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。