淋巴細(xì)胞、血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞檢測在鑒別再生障礙性貧血與低增生性骨髓增生異常綜合征中應(yīng)用價(jià)值

魯恒珍， 張 煌， 周帥躍， 鄭華理， 朱愛萍

安慶市第一人民醫(yī)院 血液腫瘤科，安徽 安慶 246004

再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)是血液系統(tǒng)常見疾病，常以骨髓造血功能低下和全血細(xì)胞減少為特征[1]，而這些特征也表現(xiàn)在低增生性骨髓增生異常綜合征(hypoplastic myelodysplastic syndrome，hypo-MDS)中[2]。AA與hypo-MDS的治療方法、預(yù)后等差異均很大，前者中期生存期可以超過174個(gè)月，而后者通常在22～33個(gè)月內(nèi)。因此，對兩者進(jìn)行鑒別診斷具有重要意義[3]。本研究旨在探討淋巴細(xì)胞、血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞檢測在鑒別AA與hypo-MDS中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 將安慶市第一人民醫(yī)院自2014年1月至2019年12月收治的45例AA患者[4]納入AA組、48例hypo-MDS患者[5]納入hypo-MDS組，另將25例健康體檢志愿者納入健康組。AA組中，男性30例，女性15例，中位年齡36歲；hypo-MDS組中，男性29例，女性19例，中位年齡43歲；健康組中，男性15例，女性10例，中位年齡38歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在感染和其他自身免疫性疾病；應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑。3組研究對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。研究對象均簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 收集3組研究對象3～5 ml外周血，收集AA組和hypo-MDS組患者2～3 ml骨髓血。采用FACSC alibur流式細(xì)胞儀(Becton Dickinson，美國)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群，Sysmex XE-2100血細(xì)胞分析儀(Sysmex，日本)檢測血細(xì)胞計(jì)數(shù)，Cytomics FC500流式細(xì)胞儀(Beckman Coulter，美國)檢測骨髓細(xì)胞。采用全血/溶血紅細(xì)胞法制備標(biāo)本，單克隆抗體標(biāo)記細(xì)胞，四色免疫熒光檢測外周血和骨髓血(外周血：FITC/PE/Percp/APC；骨髓血：FITC/PE/PC5/PC7)。

2 結(jié)果

2.1 3組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較 3組CD3+比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。hypo-MDS組、AA組CD3+CD8+高于健康組，CD3+CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較

2.2 hypo-MDS組和AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細(xì)胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細(xì)胞、CD19+B淋巴細(xì)胞比較 AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細(xì)胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細(xì)胞低于hypo-MDS組，CD19+B淋巴細(xì)胞高于hypo-MDS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 hypo-MDS組和AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細(xì)胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細(xì)胞、CD19+B淋巴細(xì)胞比較

2.3 hypo-MDS組和AA組白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)及網(wǎng)織紅細(xì)胞比較 hypo-MDS組、AA組白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。AA組網(wǎng)織紅細(xì)胞低于hypo-MDS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 hypo-MDS組和AA組白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)及網(wǎng)織紅細(xì)胞比較

2.4 hypo-MDS組和AA組骨髓原始細(xì)胞比率比較 AA組骨髓原始細(xì)胞比率為(0.52%±0.19%)，低于hypo-MDS組的(1.10%±0.35%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

AA和hypo-MDS均為骨髓造血功能衰竭疾病，在臨床特征上顯示出多種相似性[6]，但兩者的治療和預(yù)后存在顯著差異，與AA相比，hypo-MDS的白血病轉(zhuǎn)化率更高[7]，存活期更短。T淋巴細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞群，其亞群之間的相互作用可維持人體的正常免疫功能，當(dāng)不同亞群的數(shù)量和功能異常時(shí)，可能引起免疫功能障礙，誘發(fā)一系列病理變化。在血液系統(tǒng)中，T淋巴細(xì)胞亞群異常可能表現(xiàn)為AA、骨髓增生異常綜合征、血小板減少性紫癜等。有研究表明，AA與T細(xì)胞功能亢進(jìn)引起的造血組織損傷密切相關(guān)[8]，AA患者的CD4+/CD8+降低[9-10]。同時(shí)，免疫機(jī)制異常在骨髓增生異常綜合征中也發(fā)揮重要作用[11-13]，骨髓增生異常綜合征患者外周血和骨髓中T淋巴細(xì)胞亞群比例異于常人[14-15]。Maciejewski等研究發(fā)現(xiàn)，CD8+淋巴細(xì)胞與AA發(fā)病有關(guān)[16]。Viale等[17]研究顯示，重癥AA患者的骨髓和外周血CD8+細(xì)胞集落明顯高于正常人。Smith等[18]研究報(bào)道，骨髓增生異常綜合征患者存在T抑制因子。Molldrem等[19]研究證明，異常T細(xì)胞克隆可以抑制粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞集落形成。因此，觀察患者的免疫狀態(tài)對于了解和治療疾病意義重大，而T淋巴細(xì)胞亞群的檢測是評估患者免疫狀態(tài)的優(yōu)質(zhì)指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示：hypo-MDS組、AA組CD3+CD8+高于健康組，CD3+CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示T淋巴細(xì)胞亞群比例失衡可能與hypo-MDS、AA的發(fā)病有關(guān)。呂遠(yuǎn)飛等[20]根據(jù)CD4+/CD8+將hypo-MDS和AA患者分入正常比例組(1.02～1.95)、倒置比例組(比例<1.02)、高比例組(比例>1.95)3個(gè)亞組，結(jié)果顯示，淋巴細(xì)胞亞群的變化可作為AA與hypo-MDS鑒別診斷的參考指標(biāo)，根據(jù)淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+將患者分為亞組進(jìn)行比較更有利于鑒別的準(zhǔn)確性。但本研究中，hypo-MDS組與AA組CD4+/CD8+差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與上述研究[20]結(jié)果不同。因此，是否可以基于CD4+/CD8+來區(qū)分AA與hypo-MDS還有待進(jìn)一步研究。

自然殺傷細(xì)胞作為自然免疫中一種重要的大顆粒淋巴細(xì)胞，與腫瘤細(xì)胞的早期免疫監(jiān)測和殺傷密切相關(guān)。自然殺傷細(xì)胞可通過直接殺傷或分泌γ干擾素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子抑制骨髓增生異常綜合征和AA的骨髓造血細(xì)胞[21]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AA組CD3-CD16/CD56+自然殺傷細(xì)胞、CD3+CD57+T-大顆粒淋巴細(xì)胞低于hypo-MDS組，CD19+B淋巴細(xì)胞高于hypo-MDS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。造血干細(xì)胞損傷引起的全血細(xì)胞減少可能是導(dǎo)致兩組患者大顆粒淋巴細(xì)胞比例低于正常參考值的主要原因。

骨髓造血細(xì)胞受到損傷后，淋巴細(xì)胞和其他非造血細(xì)胞會相對增加。骨髓原始細(xì)胞及成熟淋巴細(xì)胞可作為區(qū)分hypo-MDS與AA的重要指標(biāo)[22]。本研究中，AA組骨髓原始細(xì)胞比率低于hypo-MDS，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這表明，骨髓細(xì)胞可能被免疫細(xì)胞的異常功能所破壞。

綜上所述，外周血T淋巴細(xì)胞亞群、大顆粒淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞綜合檢測可提高AA與hypo-MDS鑒別診斷的準(zhǔn)確性。