Galectin3、CD56和Mc在術中冰凍診斷困難的甲狀腺乳頭狀癌中的表達和意義

田 琨，張瑞明

（1.北京市海淀區婦幼保健院乳腺病防治中心，北京100080；2內蒙古醫科大學附屬醫院甲乳外科）

1 引言

THCA是頭頸部發生率較高的一類內分泌系統惡性腫瘤，全球此病發病率在全身惡性腫瘤中為1%～2%左右的占比，近些年THCA發病率不斷攀升[1]。在甲狀腺惡性腫瘤中，PTC的發生率最高，且發病人數最多，但其可實現較好預后，就病發生率而言，男性低于女性，在青少年與兒童所含的甲狀腺惡性腫瘤中通常為PTC[2，3]。關于PTC的含義，腫瘤國際組織學分類的解釋為：甲狀腺存在確切濾泡細胞分化表現，具典型的濾泡與乳頭構造，特征性胞核異常的一類上皮惡性腫瘤；在臨床診治過程中經常會遇到病理無典型性、不易診斷的患者，極大提高了病理診斷難度，發現對PTC確診有所幫助，且在特異性、敏感性方面有著良好表現的分子標志物非常關鍵。

Galectin（半乳糖凝集素）是一類可與半乳糖相結合的可溶性凝集素，當前發現的類型已有15種[4]。研究證實，Galectin-3低表達或不表達于甲狀腺良性病變中，但在PTC中幾乎均為陽性表達。

CD56是一種可以識別神經細胞黏附分子的糖蛋白[5]。有研究表明CD56過表達的腫瘤與惡性腫瘤轉移的潛能和預后較少呈正相關[6，7]。它在診斷PTC時可以作為協助的一個陰性指標。

Mc是一種單克隆抗體，研究表明Mc在甲狀腺乳頭狀癌的陽性率為100%。故近年來其大多用于甲狀腺惡性腫瘤的鑒別診斷[8]。

本實驗對144例甲狀腺乳頭狀癌、36例結節性甲狀腺腫進行Galectin-3、CD56、Mc蛋白的免疫組織化學檢測，探討這些抗體標志物在臨床中甲狀腺乳頭狀癌診斷和鑒別診斷的作用。

2 材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1 材料來源選取內蒙古醫科大學附屬醫院經術中冰凍診斷難以確診、經術后病理證實為PTC的病例144例，NG36例，對它們的免疫組化的表達結果進行統計學分析。其中，16例為男性患者，164例為女性患者，年齡范圍為29~68歲，中位數年齡為46歲。取腫瘤周邊合并結節性甲狀腺腫的石蠟標本。所有材料均為4%甲醛固定、石包埋的組織。

2.2 實驗方法

2.2.1 檢測指標為CD56、Galectin-3、Mc蛋白 根據檢驗科標準，免疫組化采用Eli VisionTM Plus二步法。

2.2.2 修整后的蠟塊 在石蠟切片機（德國Leica）上連續切片。

2.2.3 H-E染色

2.2.4 免疫組化染色

（1）65℃烤箱內，行烤片處理。

（2）脫蠟與水化。

（3）PBS液漂洗。

（4）加入試劑1（相應生物素化的二抗），移至恒溫箱內，在37℃條件下行20min孵育處理。

（5）加入試劑2（相應生物素化的二抗）。

2.2.5 結果判定 每一張病理切片均分別由兩名病理科醫師單盲法評估。Galectin-3和Mc可見表達于細胞質，CD56則在包膜與胞質上表達。結果判定：顯示黃色顆粒分布，同時相較背景明顯偏高的著色，屬于陽性，有些細胞核著色Galectin-3，各切片皆選出5個400×高倍鏡視野，對各視野內陽性細胞量在總細胞量中的占比進行逐一統計。接著將這5個視野內陽性細胞占比的均數當做此例陽性細胞的占比終值。在劃分等級方面，＋代表陽性細胞10%～25%占比；2＋代表陽性細胞25%～50%占比；3＋代表陽性細胞50%～75%占比；4＋為75%～100%陽性細胞；其中＋和2＋為弱陽性，3＋和4＋為強陽性；而陰性病例（－）為無或<10%陽性細胞。

2.3 統計結果

數據處理的工具為SPSS 26.0軟件包。將“＋”與以上病例歸入免疫組化（IHC）陽性組，在對比多組數據陽性率方面，實施χ2檢驗，對等級數值實施秩和檢驗，若條件不具備，實施精確概率法檢驗，差異具顯著水平的檢驗水準為“P<0.05”，在關聯性分析方面，采取Spearman秩相關分析法。差異缺乏統計價值的條件為“P>0.05”。

3 結果

3.1 鏡下觀察甲狀腺乳頭狀癌細胞的病理形態

甲狀腺乳頭狀癌的典型病理結構：

I.結構:乳頭狀

II.細胞核特點:

1.核增大

2.核擁擠或重疊

3.染色質透亮

4.核形不規則

5.核內假包涵體

6.核溝

III.沙礫體砂粒體形態：（i）同心圓排列的鈣鹽沉積；（ii）圓形或橢圓形；（iii）位置與腫瘤細胞相關，位于腫瘤間質或淋巴管，不能位于濾泡腔內

IV.纖維化

但上述一些病變的情況有時不是同時具備，鑒定困難就需要做免疫組化（見圖1～3）。部分鏡下觀察甲狀腺乳頭狀癌細胞的病理形態。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌的細胞核溝

圖2 甲狀腺乳頭狀癌的細胞核內包涵體

圖3 甲狀腺乳頭狀癌的細胞核形不規則

3.2 Galectin-3的免疫組化染色結果

Galectin-3陽性染色顆粒的分布以細胞質為主，小部分在細胞核內出現。其顯示棕褐色、黃色顆粒分布，同時相較背景著色明顯偏高，屬于陽性。在PTC 144人中，124人為陽性表達，達86%陽性率，其中8人為強陽性表達，100人為弱陽性表達，另36人為陰性表達。在36例NG中，16人為陽性表達，達44%陽性率，0人強陽性表達，16人弱陽性表達，另20人為陰性表達。在表達方面，對比兩組發現有顯著不同（P<0.05）（見表1）。

表1 NG和PTC組織中Galectin-3的表達

PTC的Galectin-3表達與腫瘤大小、性別、淋巴結遷移狀況、年齡、病灶皆缺乏明顯聯系（見表2）。

表2 PTC的Galectin-3表達與性別、病灶、年齡、淋巴結轉移情況、腫瘤大小相關性分析

3.3 CD56的免疫組化染色結果

CD56的表達以細胞膜為主，胞質內低表達或未表達。其顯示棕褐色、黃色顆粒分布，且相較背景著色明顯偏高，屬于陽性。在144例PTC病人中，陽性表達的有60人，達41%陽性率，但皆屬于弱表達；在36例NG病人中，28人為陽性表達。存在顯著區別（P<0.05）（見表3）。

表3 NG和PTC中CD56的表達

PTC的CD56陽性表達人數偏少，和腫瘤大小、性別、淋巴結遷移狀況、年齡、病灶不存在明顯聯系（見表4）。

表4 PTC的CD56表達與性別、病灶、年齡、淋巴結轉移情況、腫瘤大小相關性分析

3.4 Mc的免疫組化染色結果

Mc陽性表達場所以細胞質為主。其顯示棕褐色、黃色顆粒分布，且相較背景著色明顯偏高，屬于陽性。在144例PTC病人中，陽性表達者為128人，達88.9%陽性率，皆屬于弱表達；在36例NG病人中，12人顯示陽性表達。存在顯著區別（P<0.05）（見表5），具統計價值。

表5 NG和PTC中Mc的表達

PTC的Mc陽性表達人數偏少，和腫瘤大小、性別、淋巴結遷移狀況、年齡、病灶不存在明顯聯系（見表6）。

表6 PTC的Mc表達與性別、病灶、年齡、淋巴結轉移情況、腫瘤大小相關性分析

在分別分析了三項指標的陽性表達情況后，為了解Galectin-3、CD56、Mc三項指標間的相關性，又分別對144例甲狀腺乳頭狀癌患者三者的表達情況進行了相關性分析，對三者的陽性表達率進行了多重比較。結果發現，Galectin-3、Mc兩項指標間差異不顯著；Galectin-3、Mc與CD56間差異顯著（P<0.05）。Galectin-3與Mc呈正相關，Galectin-3、Mc分別與CD56呈負相關。

4 討論

甲狀腺腫瘤分為惡性和良性兩部分腫瘤。臨床上難以確定性質的甲狀腺結節，尋找能幫助診斷和鑒別診斷PTC的特異性標志物極其重要。我們檢測了Galectin-3、CD56、Mc蛋白在PTC和結節性甲狀腺腫疾病中的表達情況，為鑒別甲狀腺結節和PTC早期發現提供理論基礎。

表7 Galectin-3、CD56、Mc三項指標間的相關關系

4.1 Galectin-3的表達及其意義

GL-3僅表達于惡性病變內，尤其在PTC內基本皆是陽性表達，多數是強陽性，但在正常甲狀腺組織與良性甲狀腺結節無表達，或為小部分弱陽性表達，所以，在對甲狀腺良惡性病變進行鑒別診斷方面，GL-3指標具備應用價值[9]。

此項研究發現，GL-3于PTC中的表達量大幅上調，兩組之間表達存在差異性（P<0.05），有統計學意義。表明GL-3對甲狀腺乳頭狀癌診斷的準確性較高，故可以作為甲狀腺良惡性疾病相鑒別的重要標志物。本課題還進一步研究了GL-3的表達與甲狀腺乳頭狀癌的性別、年齡、腫瘤大小的關系，其結果提示以上幾項因素與GL-3的表達均無明顯的相關性（P>0.05）。

4.2 CD56的表達及其意義

研究發現，CD56在良性甲狀腺病變及PTC的病灶旁良性的甲狀腺組織中均表現為細胞膜陽性表達。有研究發現，CD56在任一PTC內皆呈陰性表達，但在任一甲狀腺良性病變的上皮內顯示為持續性陽性表達[10]。此項研究有2例陽性顯示為散點狀表達，表達場所皆為甲狀腺周邊正常組織相交腫瘤組織區域，此發現相符于全球研究人員的研究結果，P<0.05，具顯著差異性。CD56在PTC內呈現出較低的陽性率，同時此項研究發現，CD56和PTC的性別、腫瘤轉移、腫瘤大小、年齡皆缺乏明顯聯系（P>0.05）。

4.3 Mc的表達及其意義

Mc此單抗是以間皮細胞為抗原進行制備的，研究表明，其于PTC內呈100%陽性率。Mc陽性于PTC內的表達具顯著差異性（P<0.05），有統計學意義。與文獻報道的結果相符。

5 結論

本研究選取內蒙古醫科大學附屬醫院經術中冰凍診斷難以確診、經術后病理證實為PTC的病例若干，對其免疫組化的表達結果進行統計學分析。探討Galectin3、CD56和Mc在中冰凍不易診斷的PTC中的表達，為診斷的PTC提供有效的輔助診斷依據。結果表明：

1.在鑒別診斷PTC與諸如NG等甲狀腺良性病變方面，對于PTC，Galectin-3具備較高靈敏度，然特異度表現不佳，若此蛋白于甲狀腺病變內的表達水平為中度以上，那么存在極大PTC可能性。

2.在鑒別診斷PTC與良性甲狀腺病變方面，也可將CD56陰性對照當做參考指標。

3.在鑒別診斷PTC與良性甲狀腺病變方面，Mc具備非常高的敏感度，特別在診斷與鑒別診斷甲狀腺微小乳頭狀癌（PTMC）方面發揮著十分關鍵的作用。

4.在鑒別診斷良、惡性甲狀腺疾病方面，Galectin-3表達負向相關于CD56表達；Galectin-3表達正向相關于Mc表達；Mc表達負向相關于CD56表達。

5.PTC中Galectin-3、CD56及Mc蛋白的免疫表達情況，和病人腫瘤大小、年齡、淋巴結轉移狀況、病灶、性別等臨床病理信息皆不存在聯系。