一株豬鏈球菌的分離鑒定及其防治

王隆柏 鄭麗英 陳秋勇 吳學敏 陳如敬 車勇良 周倫江

摘 要：從福建某發病規模豬場保育豬的肺臟中分離到1株細菌，根據分離細菌的形態觀察、生化試驗、培養特性、PCR鑒定和動物攻毒試驗，結合發病豬的臨床癥狀和病理變化，表明該分離菌為偏向厭氧型鏈球菌，具有在血平板上培養良好且能致小白鼠發病死亡等特性。藥敏試驗表明：分離鏈球菌對萬古霉素、亞胺培南、利奈唑胺和菌必治高度敏感，對阿莫西林、氟苯尼考、頭孢噻肟、呋喃妥因和替加環素中度敏感，對卡多西環素、多粘菌素、青霉素、鏈霉素、恩諾沙星等藥物不敏感。豬場根據藥敏結果，采取緊急防治措施，疫情5 d后得到有效控制。

關鍵詞：豬鏈球菌;分離鑒定;防治

中圖分類號：S 852.61 ??文獻標志碼：A ??文章編號：0253-2301（2021）07-0026-04

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2021.07.004

Isolation， Identification and Prevention of a Strain of ?Streptococcus Suis

WANG Longbai1， ZHENG Liying2， CHEN Qiuyong1， WU Xuemin1，CHEN Rujing1， CHE Yongliang1， ZHOU Lunjiang1*

（1. Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Fujian Academy of Agricultural

Sciences， Fuzhou， Fujian 350013， China; 2. Yanping District Center of Animal

Disease Prevention and Control， Nanping， Fujian 353000， China）

Abstract： A bacterial strain was isolated from the lungs of weaned pigs in the infected intensive pig farm in Fujian Province. According to the morphological observation， biochemical test， cultural characteristics， PCR identification and animal challenge test of the isolated bacteria， and combined with the clinical symptoms and pathological changes of the infected pigs， it was indicated that the isolated bacteria was partial to anaerobic ?Streptococcus， ?which had the characteristics of good culture on blood plate and could cause the disease and death of mice. The drug sensitivity test showed that the isolated ?Streptococcus ?was highly sensitive to vancomycin， imipenem， linezolid and rocephin， and was moderately sensitive to amoxicillin， florfenicol， cefotaxime， macrodantin and tigecycline， while was not sensitive to the drugs such as cardoxycycline， polymyxin， penicillin， streptomycin， and enrofloxacin. According to the results of drug sensitivity， the pig farm should take emergency prevention and control measures， and the epidemic could be effectively controlled 5 days later.

Key words： ?Streptococcus ?suis; Isolation and identification; Prevention and treatment

自2018年我國首次報道發生非洲豬瘟以來，各規模養殖場都強化了生物安全防控措施和疫病綜合防控舉措，豬場發生病毒性傳染病（如豬流行性腹瀉、圓環病毒病等）的情況有所減少。但由于如今在飼料中全面禁抗和對細菌性疾病防控的疏忽[1]，導致發生豬細菌性的疾病有所增加，比如脹氣梭菌和豬鏈菌病等。豬鏈球菌病（Strep tococcosis swine ）是由不同群的鏈球菌引起的不同臨床癥狀傳染病的總稱[2]。該病病原主要為C群的獸疫鏈球菌及類馬鏈球菌、D群的豬鏈球菌、以及E、L、S、R等群[3]，一年四季均可發生，但在悶熱潮濕的天氣更多發。根究豬群感染鏈球菌的臨床表現，可分為腦膜炎型、敗血型、化膿性關節炎型及淋巴結炎型等[4]。

2020年8月，福建某存欄約600頭母豬的規模豬場，保育豬出現發病和死亡，發病率達30%，死亡率達12%，臨床癥狀主要表現為食欲減退、體溫升高、呼吸困難和個別頭往后仰等神經癥狀;經實驗室對病料進行細菌分離鑒定，及對分離菌的形態學觀察、生化和PCR鑒定、動物攻毒和藥敏試驗，證實分離到1株豬鏈球菌。豬場根據診治結果，采取緊急防控措施，疫情最終獲得有效控制。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2頭疑似發病保育豬的肺臟來源于福建某發病規模豬場;普通瓊脂板、綿羊血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板由福建省農業科學院畜牧獸醫研究所自制;革蘭氏染色試劑和生化試劑購自廣東環凱微生物科技有限公司;藥敏試紙購自北京天壇藥物生物技術開發有限公司;昆明小白鼠購自閩侯縣吳氏實驗動物貿易有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 細菌分離培養 在超凈臺內用細菌接種針在病死豬肺臟劃線接種于血瓊脂平板，然后放置在37℃的培養箱中培養24 h，觀察細菌生長情況。選取單個菌落進行革蘭氏染色后觀察細菌的形態特點。

1.2.2 細菌培養特征 將分離菌接種于血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板和普通瓊脂平板各2組，分別放置于有氧和厭氧環境下培養，觀察細菌的生長情況。

1.2.3 細菌生化鑒定 按生化試劑盒說明書進行細菌生化鑒定。將細菌分別接種于葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、果糖、山梨醇、甘露醇、乳糖、肌醇、木糖、鼠李糖、棉仔糖、硫化氫、靛基質等生化鑒定管中，培養18～24 h觀察生化鑒定結果。

1.2.4 細菌PCR鑒定 按參考文獻[5]進行。根據豬鏈球菌16S rRNA設計引物，擴增片段長度為688 bp。

1.2.5 動物攻毒試驗 將8只昆明小白鼠，分成2組，分別為試驗組和對照組各4頭。試驗組通過腹腔接種分離菌液（1×107 CFU·mL-1）0.2 mL·只

-1，對照組每只分別注射等劑量的生理鹽水。兩組分別隔離飼養觀察。

1.2.6 藥敏試驗 采用藥敏紙片擴散法對分離菌株進行藥敏試驗，取100 μL細菌液（1×107 CFU·mL-1）涂布于血平板培養基，在培養基面貼上不同藥敏紙片，置于37℃培養24 h后，按說明判定標準對結果進行分析。

2 結果與分析

2.1 發病豬臨床癥狀和病理變化

發病豬只的臨床癥狀主要表現為食欲不振或廢絕，精神沉郁（圖1），體溫為40～42℃，鼻腔有漿性鼻汁流出，腹式呼吸，個別出現運動失調，四肢劃水，頭往后仰等神經癥狀，瀕死體溫下降;病理變化主要表現為肺臟出血、肉變（圖2）和腦膜充血，淋巴結腫大、出血，腎臟有出血點。

2.2 細菌形態學觀察

從病料的肺臟中分離到1株細菌，該細菌在鮮血瓊脂平板上培養18～24 h后，長出半透明、圓形、光滑、邊緣整齊的溶血性菌落（圖3）;革蘭氏染色陽性，菌體呈圓形，短鏈，主要以5～18個菌體鏈狀排列，可見單個長達20個以上菌體相連的長鏈狀（圖4）。

2.3 細菌培養特征

經不同培養基和不同環境下培養發現，該菌在麥康凱瓊脂平板無論是在厭氧還是在有氧條件下都不能生長，在普通瓊脂平板可生長、鮮血平板培養在厭氧比有氧條件下生長更好。

2.4 細菌生化鑒定

培養18 h后觀察生化鑒定結果，發現該菌可發酵蔗糖、果糖、肌醇、葡萄糖和乳糖;不能發酵甘露醇、山梨醇、鼠李糖、麥芽糖、木糖、硫化氫、棉仔糖和靛基質;以上生化鑒定符合鏈球菌生化特性。

2.5 細菌PCR鑒定

分離菌經PCR反應，獲得大約688 bp大小的目的條帶，與預期大小一致（圖5）。

2.6 動物攻毒試驗

分離細菌接種小白鼠12 h后，開始出現活動減少、精神沉郁、被毛蓬松等臨床癥狀，2只小白鼠在接種細菌48 h內死亡。對照組小白鼠正常。

2.7 藥敏試驗及防治

分離鏈球菌對萬古霉素、亞胺培南、利奈唑胺和菌必治高度敏感，對阿莫西林、氟苯尼考、頭孢噻肟、呋喃妥因和替加環素中度敏感，對卡多西環素、多粘菌素、青霉素、鏈霉素、恩諾沙星等藥物不敏感。

該豬場根據藥敏結果，選用中敏的氟苯尼考對全場豬群通過飲水進行治療，對發病豬群注射阿莫西林每天1次，連續2 d，同時加強飼養管理、環境消殺，5 d后疫情得了有效控制。

3 結論與討論

3.1 本研究對病料進行了豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒等病毒性疾病檢測，結果都為陰性，從病料的肺臟中分離到1株細菌，通過對分離細菌的形態觀察、培養特性、生化試驗和PCR鑒定，該細菌為偏向厭氧的革蘭氏陽性球菌，在鮮血瓊脂平板上培養良好，在麥康凱瓊脂平板上不生長，與劉玉濤等[6]于2014年分離報道的細菌具有類似特性。根據細菌分離鑒定結果，結合豬場的發病情況、臨床癥狀、剖檢變化和治療效果，確診該豬場發生疫病的病原主要為鏈球菌病。究其發病原因，主要是在飼料中全面禁止使用抗生素后，雖然規模豬場加強了生物安全防控措施，通過除臭改善了飼養環境，但在細菌病防控的思想上出現了松懈，導致在豬場出現細菌性疾病的概率有所增加。

3.2 根據小白鼠攻毒試驗表明，該分離菌株對小白鼠具有較強的致病性，48 h內可導致小白鼠死亡，說明該分離菌有較強毒力。在一定的條件下，豬場如飼養管理條件較差，豬群免疫功能較低和氣候變化等應激因素較大的情況下，可能導致保育豬的急性發病和死亡。鑒此，各規模養殖場應該加強細菌性疾病防控措施，做好環境消殺工作，加強臭管理，改善飼養環境，提高豬群免疫力[7]，確保豬群健康養殖。

3.3 在非洲豬瘟背景下，豬群疫病防控策略有所改進，在生豬養殖生物安全防控措施方面得到很大加強，這有利于減少病原傳播，防堵疫情暴發。豬鏈球菌病在我國于20世紀50年代開始報道，雖然現已有商品的疫苗，但由于豬鏈球菌的血清型眾多和抗生素可以防治的特點，導致豬場使用疫苗的頻率較少。因此，建議各規模豬場在建立并執行嚴格的生物安全措施情況下，也要重視并做好各種疫苗的免疫和保健工作，提高豬群免疫功能;另外，規模豬場對于細菌性疾病的防控，在選用防治藥物的環節方面，最好采用科學的藥敏試驗結果，根據藥敏藥物做到有針對性的防治，這在豬場取得良好防控效果的同時，有利于減少細菌耐藥和確保豬肉食品安全，有利于促進生豬產業健康高效發展。

參考文獻：

[1]王文，范方程，鄧瑞德，等.湖南湘潭某豬場保育豬鏈球菌分離鑒定及耐藥性試驗[J].養豬，2021（3）：101-103.

[2]梁學勇.動物傳染病[M].重慶：重慶大學出版社，2007.

[3]耿艷紅，徐軍，王兆山，等.豬鏈球菌病[J].動物醫學進展，2005，26（9）：101-104.

[4]郭長明，陳懷君，朱善元，等.廣西某豬場豬鏈球菌分離鑒定及其生物學特性研究[J].中國畜牧獸醫，2021，48（2）：736-746.

[5]幸文定，曾文斌，劉悅欣，等.一起豬鏈球菌病的臨床分離鑒定及診治[J].養豬，2015（1）：92.

[6]劉玉濤，吳秋玉，王隆柏，等.一株豬鏈球菌的分離與鑒定[J].福建畜牧獸醫，2014，36（4）：20-21.

[7]胡換儀，林敏，劉小蘭，等.一例豬鏈球菌病的診斷及其病原分離鑒定[J].江西畜牧獸醫雜志，2021（1）：9-12.

（責任編輯：柯文輝）