注射用嗎利福肽臨床試驗(yàn)研究及產(chǎn)業(yè)化

唐世錠 韋飛雪 文藝 陳珊 鄧鵬

【關(guān)鍵詞】注射用嗎利福肽;腦卒中;缺血性;臨床試驗(yàn)

【中圖分類號】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1674-0688（2021）08-0045-03

1 概述

腦卒中（俗稱腦中風(fēng)）是僅次于惡性腫瘤的死亡原因，全球每年大約有2 200萬人發(fā)生腦卒中，主要包括三大類，即缺血性（87%）、出血性（10%）、蛛網(wǎng)膜下腔出血（3%）[1]。當(dāng)前，指南推薦臨床對于缺血性腦血管疾病的臨床治療主要是采用動/靜脈溶栓、抗凝、擴(kuò)容、擴(kuò)血管及血管內(nèi)干預(yù)等方面的治療途徑，然而目前尚未發(fā)現(xiàn)一種有效治療急性缺血性腦卒中的神經(jīng)保護(hù)類藥物[2]。

臨床研究證實(shí)，腦組織缺血后可引起急性和慢性的炎癥反應(yīng)，局部腦缺血后，許多致炎介質(zhì)釋放或激活，如炎性細(xì)胞因子（特別是TNF-α、IL-1）、趨化因子及內(nèi)皮細(xì)胞-白細(xì)胞黏附分子水平上調(diào)，使白細(xì)胞浸潤到腦實(shí)質(zhì)，并激活腦小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞，腦缺血再灌注引起的炎癥反應(yīng)能夠引起腦微循環(huán)障礙和鄰近腦組織的損傷。炎癥反應(yīng)的程度、腦組織損傷的程度跟腦卒中病人的長期預(yù)后有較大關(guān)聯(lián)，抗炎治療已成為腦缺血防治的一個重要研究方向，炎癥誘導(dǎo)的損傷機(jī)制在防治缺血性腦卒中疾病時對挽救缺血性半暗帶、保護(hù)血腦屏障起重要作用，可擴(kuò)大治療時間窗，有著巨大的臨床價值。

嗎利福肽（Monocyte Locomotion Inhibitory Factor，MLIF）作為一種治療缺血性腦卒中的新藥，是八加一藥業(yè)股份有限公司研究團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)十?dāng)?shù)載的基礎(chǔ)研究和臨床前研究的重大研究成果。注射用嗎利福肽的研究先后獲得國家科技重大專項(xiàng)“防治缺血性腦卒中活性肽候選新藥研究”（合同號2009ZX0913-120，已結(jié)題）、“防治缺血性腦卒中活性肽臨床前研究”（合同號2013ZX09102011，已結(jié)題）和廣東省科技重大專項(xiàng)“防治缺血性腦卒中活性肽臨床前研究”（合同號2013A022100006，已結(jié)題）的支持。獲得了包括“多肽小分子在制備防治缺血性腦血管病藥物中的應(yīng)用”[3]在內(nèi)的6件授權(quán)發(fā)明專利及“Method for Treating Myocardial Ischemia”（US8343921B2）等2件PCT授權(quán)專利。研究論文在國際著名雜志“STROKE”發(fā)表。

臨床前研究表明：注射用嗎利福肽是人工合成的小分子多肽，與熱穩(wěn)定的具有抗炎活性寡肽[從溶組織阿米巴（Entamoeba Histolytica）培養(yǎng)的上清液中分離得到]具有同樣的氨基酸序列，有較強(qiáng)的抗炎活性，能明顯逆轉(zhuǎn)慢性腦缺血所致的神經(jīng)細(xì)胞的損傷，對急性腦缺血有較好的保護(hù)作用，機(jī)制較新，靶點(diǎn)明確，為生物內(nèi)源性物質(zhì)，安全性好，有望成為治療缺血性腦卒中的新藥。此外，注射用嗎利福肽可以通過血腦屏障，對腦血管病具有良好的預(yù)防與治療作用[4]。

2 臨床試驗(yàn)擬解決的關(guān)鍵問題

2015年2月由八加一藥業(yè)股份有限公司主導(dǎo)，下屬全資子公司廣東八加一醫(yī)藥有限公司研發(fā)的原料藥嗎利福肽和注射用嗎利福肽獲得1.1類新藥藥物臨床試驗(yàn)批件（批件號分別為2015L00348、2015L00349），重點(diǎn)開展3期臨床試驗(yàn)。目前，注射用嗎利福肽的臨床試驗(yàn)工作已全面啟動，其中Ⅰ期臨床試驗(yàn)已在北京協(xié)和醫(yī)院和江蘇省人民醫(yī)院完成，試驗(yàn)結(jié)果表明：注射用嗎利福肽作用于人體安全，耐受性好。

2.1 特異性生物標(biāo)志物判定方法

缺血性腦卒中神經(jīng)功能保護(hù)類新藥（嗎利福肽屬于其一）的臨床終點(diǎn)是困擾此類藥物臨床試驗(yàn)療效判斷的共性難題，目前尚無明確的客觀的療效指標(biāo)和檢測手段對其進(jìn)行判斷，找到臨床終點(diǎn)判斷的代表物質(zhì)和檢測方法事關(guān)臨床試驗(yàn)的成敗。

本課題組經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，注射用嗎利福肽治療缺血性腦卒中特異性生物標(biāo)志物（BIO-MARK），特征性炎癥因子水平的變化與臨床預(yù)后密切相關(guān)，Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)將通過檢測受試者體內(nèi)的特異性生物標(biāo)志物水平評價注射用嗎利福肽的療效，該方法專屬性強(qiáng)，檢測靈敏度高，可為抗炎機(jī)理的缺血性腦卒中神經(jīng)功能保護(hù)類新藥臨床研究提供一個全新的檢測方法。

將研究發(fā)現(xiàn)的特異性生物標(biāo)志物判定作為注射用嗎利福肽應(yīng)用于缺血性腦卒中患者的臨床終點(diǎn)判斷。

2.2 客觀、有效的評價方法

根據(jù)CFDA（國家食品藥品監(jiān)督管理總局）最新頒布的《急性缺血性腦卒中治療藥物臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，缺血性腦卒中嚴(yán)重程度通常采用NIHSS（美國國立衛(wèi)生研究院腦卒中量表）評分界定，NIHSS評分過程完全依靠醫(yī)務(wù)人員主觀判斷，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性差，對腦卒中受試藥物的評價結(jié)果人為因素干擾較大。

注射用嗎利福肽Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)采用步態(tài)分析系統(tǒng)對受試者進(jìn)行評價，在整個評價過程通過計(jì)算機(jī)采集一系列數(shù)據(jù)完成，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，將試驗(yàn)過程人為因素導(dǎo)致結(jié)果偏差降到最低。

注射用嗎利福肽Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)采用磁共振成像等醫(yī)學(xué)影像學(xué)手段，全程監(jiān)測臨床試驗(yàn)受試者入組、治療、出組等階段腦組織炎癥浸潤和水腫變化情況，檢測方法直觀、嚴(yán)謹(jǐn)，為臨床試驗(yàn)藥物的療效判斷提供科學(xué)依據(jù)。

注射用嗎利福肽Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)采用神經(jīng)內(nèi)科與急診科聯(lián)動的工作機(jī)制，將受試者篩查前移至急診科，實(shí)現(xiàn)受試者快速診斷、快速入組、盡快給藥，確保受試者在有效的治療時間窗用上試驗(yàn)藥物，對注射用嗎利福肽的臨床試驗(yàn)結(jié)果評價更加客觀、準(zhǔn)確。

3 項(xiàng)目技術(shù)路線

3.1 技術(shù)路線

3.1.1 Ⅱ期臨床試驗(yàn)

在Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上分兩個階段進(jìn)行，第一階段為Ⅱa期臨床試驗(yàn)，以小樣本多次給藥、劑量遞增的方式開展試驗(yàn)，研究給藥方式、劑量及時間對治療效果的影響，其間開展多次給藥藥代動力學(xué)研究及藥物相互作用研究;第二階段為Ⅱb期臨床試驗(yàn)，以Ⅱa期臨床試驗(yàn)研究結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇2或3個給藥方案進(jìn)行中樣本的臨床試驗(yàn)研究，初步確定給藥方案。

3.1.2 動物生殖毒性試驗(yàn)

完成注射用嗎利福肽的大鼠Ⅲ段和家兔Ⅱ段生殖毒性試驗(yàn)，評價其對哺乳動物生殖功能和發(fā)育過程的影響。

3.1.3 Ⅲ期臨床試驗(yàn)

在Ⅱ期臨床試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，根據(jù)初步確定的給藥方案進(jìn)行驗(yàn)證性試驗(yàn)研究，評價藥物的總體療效和安全性。

3.1.4 新藥申請

匯總各期臨床試驗(yàn)結(jié)果，形成本項(xiàng)目的臨床試驗(yàn)報告，申請新藥注冊。

3.1.5 項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化

按GMP要求建設(shè)原料藥合成生產(chǎn)線及凍干粉針制劑生產(chǎn)線，開展中試放大試驗(yàn)，完成工藝優(yōu)化、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證、生產(chǎn)現(xiàn)場核查和藥品生產(chǎn)GMP符合性檢查，獲得新藥證書及藥品生產(chǎn)批文，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品上市銷售。

3.2 項(xiàng)目技術(shù)路線圖

項(xiàng)目技術(shù)路線圖如圖1所示。

4 項(xiàng)目關(guān)鍵技術(shù)

4.1 采用特異性生物標(biāo)志物判斷注射用嗎利福肽臨床終點(diǎn)的檢測技術(shù)

通過檢測腦卒中受試者體內(nèi)的特異性生物標(biāo)志物水平評價注射用嗎利福肽的臨床試驗(yàn)終點(diǎn)。

4.2 對注射用嗎利福肽受試者療效采用客觀、有效的觀察手段和評價方法

采用步態(tài)分析系統(tǒng)對受試者進(jìn)行評價;采用磁共振成像等醫(yī)學(xué)影像學(xué)手段，全程監(jiān)測臨床試驗(yàn)受試者;采用神經(jīng)內(nèi)科與急診科聯(lián)動的工作機(jī)制，實(shí)現(xiàn)受試者快速診斷、快速入組、盡快給藥，確保受試者在有效的治療時間窗用上試驗(yàn)藥物;通過上述一系列措施，使注射用嗎利福肽對缺血性腦卒中的療效結(jié)果真實(shí)可靠，減少人為因素導(dǎo)致結(jié)果偏差。

采用特異性生物標(biāo)志物判斷注射用嗎利福肽臨床終點(diǎn)的檢測技術(shù)及對注射用嗎利福肽受試者療效采用客觀、有效的觀察手段和評價方法，進(jìn)一步評價注射用嗎利福肽對治療缺血性腦卒中的有效性和安全性，為注射用嗎利福肽申請新藥證書提供充分的依據(jù)。

4.3 項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化

對原料藥的固相合成法的反應(yīng)條件（包括溫度、純化試劑與中間產(chǎn)品的比例等）進(jìn)行優(yōu)化，形成一套既適合工業(yè)化生產(chǎn)又高效節(jié)能的生產(chǎn)工藝，在新建生產(chǎn)線連續(xù)進(jìn)行3批生產(chǎn)，驗(yàn)證工藝的可行性。通過對原料藥工藝優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)原料藥生產(chǎn)成本降低20%、成品收率提高10%、溶媒用量減少30%以上的目標(biāo)。

5 項(xiàng)目技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)

本項(xiàng)目的技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)如下。

5.1 檢測方法

通過檢測注射用嗎利福肽在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)腦卒中抗炎機(jī)理藥物的特異性生物標(biāo)志物（BIO-MARK），通過檢測其特異性生物標(biāo)志物判斷臨床終點(diǎn)，為抗炎機(jī)理的缺血性腦卒中神經(jīng)功能保護(hù)類新藥的臨床研究提供最新檢測標(biāo)準(zhǔn)。該檢驗(yàn)方法專屬性強(qiáng)，可解決缺血性腦卒中神經(jīng)功能保護(hù)類新藥的臨床終點(diǎn)判斷難題。

5.2 評價方法

注射用嗎利福肽的Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗(yàn)引入步態(tài)評分系統(tǒng)，可客觀評價受試者用藥后的臨床癥狀和行為學(xué)評分的改善情況，與傳統(tǒng)的NIHSS（美國國立衛(wèi)生研究院腦卒中量表）評分系統(tǒng)相比，能有效地減少評分偏差，提高試驗(yàn)藥物療效評價的準(zhǔn)確性;采用磁共振成像等醫(yī)學(xué)影像學(xué)手段，監(jiān)測臨床試驗(yàn)受試者入組、治療、出組等階段腦組織炎癥浸潤和水腫變化情況，檢測方法直觀、嚴(yán)謹(jǐn)，為試驗(yàn)藥物的療效判斷提供科學(xué)依據(jù);試驗(yàn)方案確立神經(jīng)內(nèi)科與急診科聯(lián)合實(shí)施的工作機(jī)制，實(shí)現(xiàn)快速診斷、快速入組、盡快給藥，確保受試者在有效的治療時間窗用上試驗(yàn)藥物。

6 結(jié)語

本項(xiàng)目完成后將作為國家1.1類化藥新藥上市，獲得國家新藥證書及2項(xiàng)國家藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)，建成廣西第一條肽類原料藥合成生產(chǎn)線。

臨床試驗(yàn)過程中通過檢測特異性生物標(biāo)志物判斷藥物的臨床終點(diǎn)，將為國內(nèi)治療腦卒中的神經(jīng)保護(hù)類新藥臨床試驗(yàn)提供一種全新的檢測方法。

我國缺血性腦卒中發(fā)病率呈上升趨勢，據(jù)統(tǒng)計(jì)我國每年有750萬的腦卒中病例（其中缺血性腦卒中患者約占80%）。注射用嗎利福肽作為治療缺血性腦卒中新藥，將給國內(nèi)廣大腦卒中患者提供一種全新的安全有效的治療藥物，解決臨床急需。根據(jù)國家有關(guān)規(guī)定，原創(chuàng)新藥納入國家醫(yī)保目錄，減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時將為世界治療缺血性腦卒中藥物樹立典范，社會意義重大。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]申青仙，張賽，涂悅.急性缺血性腦卒中的臨床治療研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥，2020，15（4）：633-636.

[2]賈喆.小劑量阿替普酶在靜脈溶栓治療急性缺血性腦卒中的神經(jīng)保護(hù)作用[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2019，44（7）：920-922，926.

[3]楊鵬遠(yuǎn)，芮耀誠，章越凡.多肽小分子在制備防治缺血性腦血管病藥物中的應(yīng)用[P].中國專利：2008102006

10.0，2009-02-11.

[4]程浩，芮耀誠，章越凡，等.生物活性肽-單核細(xì)胞遷移抑制因子研究進(jìn)展[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2015，33（1）：17-19，27.