厚樸破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對(duì)胃腸動(dòng)力的藥理作用比較

姚亞峰

厚樸屬木蘭科植物(MagnoliaofficinalisRehd et Wils.)或?yàn)榘既~厚樸(MagnoliaofficinalisRehd et Wils.var.biloba Rehd et Wils)的根皮、干燥皮和枝皮。為芳香化濕類傳統(tǒng)中藥，臨床常用中藥材，具有下氣除滿和燥濕消痰之效[1]，多用于脘痞吐瀉、濕滯傷中、腹脹便秘、食積氣滯、脘腹脹滿疼痛、痰飲咳喘等癥，是消除脹滿之主藥。生厚樸味辛峻烈，刺激咽喉，故多以姜制后內(nèi)服，以消除咽喉刺激性和強(qiáng)化寬中和胃之效。厚樸主要成分是生物堿類、揮發(fā)油和木脂素類，《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)記載厚樸的主要成分是厚樸酚[2]。厚樸破壁飲片是指利用現(xiàn)代粉碎技術(shù)將中藥厚樸加工到D90300目)的分體，利用不同濃度的乙醇或水粘合成型，將原飲片的所有成分制成30～100目的顆粒狀飲片[3]。破壁飲片具有服用方便節(jié)省藥材的優(yōu)點(diǎn)。中藥破壁飲片研究中，破壁飲片是否補(bǔ)充傳統(tǒng)中藥飲片和兩者間的量效關(guān)系已成為研究熱點(diǎn)。本研究以厚樸破壁飲片為研究對(duì)象，探討其對(duì)胃腸動(dòng)力的藥理作用，以期為厚樸破壁飲片應(yīng)用研究提供參考。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物昆明SPF級(jí)小鼠，18～22 g，雌雄各半。SD大鼠，體質(zhì)量190～210 g，雌雄皆可。所用小鼠、大鼠均由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物及試劑厚樸飲片由北京本草方源藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供，經(jīng)襄城縣人民醫(yī)院中醫(yī)專家鑒定為厚樸的干燥根皮。厚樸破壁飲片由云南瑞藥金方現(xiàn)代中藥有限公司提供，經(jīng)中藥師鑒定為植物厚樸(MagnoliaofficinalisRehd et Wils)的含木脂素的木質(zhì)粉末。多潘立酮(國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H20033864；規(guī)格：10 mg×30 s；江西捷眾制藥有限公司)；左旋精氨酸(成都德斯特生物，產(chǎn)品自編號(hào)：DJ0079;CAS登錄號(hào)：74-79-3；規(guī)格：200 mg/支)；西沙比利(準(zhǔn)字號(hào)：H20020345；規(guī)格：5 mg/10 s；浙江京新藥業(yè)有限公司)；胃泌素、胃動(dòng)素酶聯(lián)免疫試劑盒由武漢華美生物公司提供，NO試劑盒(南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20120924)，所有操作均依據(jù)試劑盒說(shuō)明完成。

1.3 儀器電子天平(萬(wàn)分之一，Sartorius；德國(guó)賽多斯)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE52CS，上海亞榮生化儀器公司)；循環(huán)水式真空泵(SHZ-DIII，鞏義市予華儀器公司)；電熱恒溫水浴鍋(上海供銷公司提供)；調(diào)溫電熱套(型號(hào)：PTHW；鞏義市予華儀器公司提供)；數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(型號(hào)：JZX-9070MBN；上海博訊實(shí)業(yè)醫(yī)療設(shè)備廠提供)；紅外測(cè)溫儀(型號(hào)：Raytek RayngerST20；美國(guó)雷泰公司)；酶標(biāo)儀(型號(hào)：DNA Expert)由TECAN公司提供。

1.4 方法

1.4.1 厚樸飲片提取物制備應(yīng)用水煎回流法提取[4]，取150 g姜厚樸飲片粉碎，加入10倍蒸餾水浸泡30 min，煎煮30 min，煎煮2次且合并煎液，過(guò)濾，濃縮為1.5 g生藥/ml藥液備用。破壁厚樸飲片則用無(wú)菌蒸餾水制備為所需濃度的藥液，勻漿機(jī)攪拌為混懸液。

1.4.2 胃排空及小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)健康昆明小鼠63只，依據(jù)體質(zhì)量，將其隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A1組)、多潘立酮陽(yáng)性組(13 mg/kg；B1組)、厚樸傳統(tǒng)飲片組(650 mg/kg；C1組)、厚樸破壁1倍組(650 mg/kg；D1組)、1/2倍組(325 mg/kg；E1組)、1/4倍組(162.5 mg/kg；F1組)、1/8倍(81.25 mg/kg；G1組)組，共7組，每組9只小鼠。空白對(duì)照組給予無(wú)菌蒸餾水，劑量：10 ml/kg，每天1次，連續(xù)7 d。最后一次給藥前禁食24 h，自由飲水，給藥后1 h灌胃0.5%酚紅溶液，20 min后頸椎脫臼法處死小鼠，腹部剖開后結(jié)扎胃幽門、賁門、回盲部，取小腸和胃，用濾紙?jiān)嚫晌福Q胃全重。沿胃大彎處剪開，洗凈胃內(nèi)物，取濾紙?jiān)嚫晌福Q胃凈重；計(jì)算小鼠胃殘留率；拉直小腸平鋪在白紙板上，測(cè)量其全長(zhǎng)和酚紅移動(dòng)前沿至幽門間長(zhǎng)度，算出小腸推進(jìn)率。胃排空率為胃全重減去未凈重后除以酚紅溶液注入量；小腸推進(jìn)率為酚紅移動(dòng)距離除以小腸全長(zhǎng)[4]。

1.4.3 左旋精氨酸致大鼠胃動(dòng)力障礙的影響實(shí)驗(yàn)選56只SD大鼠，雌雄皆可，隨機(jī)分為8組，每組7只，分別為空白對(duì)照組(A2組)、西沙比利組(B2組)、厚樸傳統(tǒng)飲片組(C2組)、厚樸破壁1倍組(650 mg/kg；D2組)、1/2倍組(325 mg/kg；E2組)、1/4倍組(162.5 mg/kg；F2組)、1/8倍(81.25 mg/kg；G2組)，模型組(H組)共8組，每組7只SD大鼠。空白對(duì)照組給予生理鹽水，腹腔注射1 ml，灌胃20 ml/(kg·d)；模型組腹腔注射左旋精氨酸，劑量：第1天5.2 mg/kg，第2～5天為2.6 g/kg，同時(shí)灌胃生理鹽水20 ml/(kg·d)。其余各組左旋精氨酸用量同模型組(應(yīng)用生理鹽水配置左旋精氨酸溶液，濃度為20%)，各組分別灌胃4 ml的厚樸藥物提取液10 g/(kg·d)。B組給予西沙比利懸混液20 ml/(kg·d)(生藥75 mg/ml)；第6天各組灌胃相應(yīng)藥物，并給水合氯醛(10%)3 ml/kg，取心尖血5 ml，以酶標(biāo)儀發(fā)測(cè)定血清胃泌素GAS、胃動(dòng)素MTL，硝酸還原酶法檢測(cè)血清NO。

1.4.4 觀察指標(biāo)觀察各組小鼠胃殘留率及小腸推進(jìn)率。

1.4.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 21.0處理分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以%表示，行χ2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 厚樸破壁飲片和傳統(tǒng)飲片對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響胃殘留率和腸推進(jìn)率是評(píng)估胃腸動(dòng)力的主要觀察指標(biāo)，此研究通過(guò)對(duì)比厚樸破壁飲片與傳統(tǒng)飲片小鼠胃殘留率、腸推進(jìn)率來(lái)評(píng)估厚樸破壁飲片對(duì)胃腸動(dòng)力的影響。

2.1.1 厚樸破壁飲片與傳統(tǒng)飲片小鼠胃殘留率比較同空白對(duì)照A1組相比，除厚樸破壁飲片162.5 mg/kg組(F1組)和81.25 mg/kg(G1組)組，各給藥組小鼠的胃殘留率顯著下降，各組間比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與多潘立酮陽(yáng)性組(C1組)比較，厚樸傳統(tǒng)飲片(D1組)、厚樸破壁飲片325 mg/kg(E1組)、厚樸破壁飲片162.5 mg/kg(F1組)、81.25 mg/kg(G1組)的胃殘留率均高于多潘立酮陽(yáng)性組，其中D1組、F1組和G1組均明顯高于多潘立酮陽(yáng)性組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。厚樸破壁飲片325 mg/kg(E1組)同多潘立酮陽(yáng)性組比較則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而C1組、D1組、F1組及G1組間的比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 各組小鼠胃殘留率

2.1.2 厚樸破壁飲片與傳統(tǒng)飲片對(duì)小鼠腸推進(jìn)率的影響與空白對(duì)照組(A1組)相比，多潘立酮組(B1組)、厚樸傳統(tǒng)飲片650 mg/kg(C1組)、厚樸破壁1倍組(D1組)、厚樸破壁飲片325 mg/kg(E1組)和厚樸破壁飲片162.5 mg/kg(F1組)的小腸推進(jìn)率均顯著提升，組間比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但厚樸破壁飲片81.25 mg/kg(G1組)小鼠小腸推進(jìn)率則無(wú)明顯改變，2組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與多潘立酮陽(yáng)性組相比，厚樸傳統(tǒng)飲片和厚樸破壁飲片81.25 mg/kg組明顯低于多潘立酮陽(yáng)性組，2組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其余各組則高于多潘立酮陽(yáng)性組，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 各組小腸推進(jìn)率

2.2 厚樸飲片對(duì)各組小鼠胃動(dòng)力障礙的影響模型組空白對(duì)照組比較顯示各指標(biāo)差異顯著(P<0.001)，提升模型成功。與模型組相比，B2組、C2組、D2組、E2組、G2組的胃動(dòng)素MTL含量明顯上升，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但各組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；這表明給藥后大鼠機(jī)體恢復(fù)胃動(dòng)素含量，大鼠胃動(dòng)力障礙緩解。胃泌素含量：同模型組相比，各給藥組血清胃泌素含量顯著上升(P<0.001)，但各給藥組間、給藥組與空白對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，給藥組大鼠恢復(fù)胃泌素含量，提升其胃動(dòng)力障礙得到緩解。NO含量：同模型組相比，西沙比利組NO含量下降(P<0.05)，其余給藥組均無(wú)明顯差異(P>0.05)，但均呈下降趨勢(shì)。見(jiàn)表1。

表1 厚樸破壁飲片及傳統(tǒng)飲片對(duì)大鼠胃動(dòng)力障礙的影響 (例，

3 討論

在胃排空及小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)中，本研究結(jié)果顯示，厚樸傳統(tǒng)飲片(650 mg/kg)、厚樸破壁飲片325 mg/kg能促進(jìn)胃排空，而厚樸破壁飲片650 mg/kg則減緩小鼠胃排空，厚樸破壁飲片影響小鼠胃排空構(gòu)不成劑量依賴變化，厚樸破壁1/2倍(325 mg/kg)劑量與傳統(tǒng)厚樸飲片650 mg/kg對(duì)小鼠胃排空作用相當(dāng)，增加厚樸破壁飲片劑量后可能有反作用。厚樸破壁飲片與傳統(tǒng)飲片均可促進(jìn)小腸蠕動(dòng)，加快小腸推進(jìn)作用，且隨厚樸破壁飲片劑量的增加其對(duì)小鼠小腸的推進(jìn)作用也增強(qiáng)，在厚樸破壁飲片1/4倍量時(shí)刻達(dá)到厚樸傳統(tǒng)飲片650 mg/kg劑量的效果。

NO是胃腸道抑制遞質(zhì)，左旋精氨酸為NO合酶抑制劑，對(duì)中間神經(jīng)元NO合成具有抑制作用，大鼠注射左旋精氨酸可抑制NO合成，從而致其胃動(dòng)力障礙。灌服厚樸傳統(tǒng)飲片和破壁飲片后可促進(jìn)NO功能恢復(fù)，胃泌素和胃動(dòng)素含量與模型組相比得到提升，恢復(fù)至正常水平，表明厚樸飲片和破壁飲片對(duì)大鼠胃動(dòng)力障礙的緩解作用明顯，給藥1/4倍破壁飲片能夠達(dá)到與厚樸傳統(tǒng)飲片650 mg/kg用量的效果。

綜上所述，厚樸破壁飲片和厚樸傳統(tǒng)飲片能夠加速小鼠胃排空和加速小腸推進(jìn)，能夠加速大鼠胃腸道動(dòng)力障礙緩解和恢復(fù)，但在使用劑量上厚樸破壁飲片具有一定的優(yōu)勢(shì)。