高效液相色譜法測定那如三味丸中的沒食子酸的含量

格根塔娜，成志平，李 強，郝美玲

(1.包頭市藥物警戒中心，內蒙古 包頭 014030；2.包頭市檢驗檢測中心，內蒙古 包頭 014060；3.內蒙古自治區藥品檢驗研究院，內蒙古 呼和浩特 010020)

那如三味丸為蒙藥制劑經驗方，是由訶子、蓽茇、制草烏三味中藥組成。具有消“粘”，除“協日烏素”，祛風，止痛，散寒。用于風濕，關節疼痛，腰腿冷痛，牙痛，白喉等癥的作用。其中訶子是三味藥中的主要藥味之一，具有澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽的功效[1]。據文獻[2]報道，訶子中的主要化學成分為鞣質類、酚酸類、三萜類黃酮類等，酚酸類主要成分為沒食子酸。參照《中國藥典》2015年版一部“健民咽喉片”項下的含量測定方法，做了沒食子酸含量測定，經分析方法驗證，表明該方法重現性好，專屬性強。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp型檢測器，島津SIL-10AF進樣器，CLASS-VP工作站，sartorious BP211D型電子天平，METTLER TOLEDO AB104型電子天平，惠普6010紫外分光光度儀。

1.2 試劑與試藥

沒食子酸對照品(批號110831-200803，中國食品藥品檢定研究院)樣品收集了內蒙古蒙藥股份有限公司(批號1709027、1703087)、烏蘭浩特中蒙藥制藥有限公司(批號1608029、1608030)、阜新蒙藥有限責任公司(批號20170627、20171006)和內蒙古庫倫蒙藥公司(批號1608411、1608412)四個廠家共8批次，模擬樣品為自制。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性

采用Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.1%磷酸(2∶98)為流動相條件摸索。流速1.0mL/min，柱溫 30℃，進樣量10μL，理論塔板數按沒食子酸峰計算應不低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含70μg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率300W頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾取續濾液，即得。

2.3檢測波長的選擇

取沒食子酸對照品溶液，置紫外分光光度計上，在250nm～300nm波長范圍掃描。結果沒食子酸在273nm處有最大吸收，故選擇273nm作為檢測波長。

2.4線性關系考察

取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含700μg的標準儲備溶液(實際為：695.75μg/mL)。分別精密吸取上述對照品儲備溶液0.10mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL至10mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10μL注入液相色譜儀測定，以峰面積對濃度進行回歸分析，結果沒食子酸在0.069 6～1.739 4μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為：Y=32 166X+14 786，γ2=0.999 9

2.5 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h進行測定，沒食子酸在24小時內的峰面積積分值基本穩定不變，RSD為0.58%(n=6)。

2.6 重復性試驗

取同一份供試品6份，按供試品溶液制備方法處理并測定沒食子酸含量，6份供試品沒食子酸平均含量為7.314mg/g，RSD為0.46%，表明方法重復性良好。

2.7 精密度

取沒食子酸對照品(濃度為0.092 767 mg/mL)，連續進樣6次，其RSD為1.2%(n=6),表明方法的精密度良好。

2.8 準確度試驗

取已測定含量的同一供試品(含量7.314mg/g)9份，每份約0.25g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，分成三組，每組三份。每組分別精密加入濃度為4.552mg/mL(實際為：25.26mg×0.901/5mL =4.552μg/mL)的沒食子酸對照品溶液各0.2mL、0.4mL、0.6mL(約相當于供試品含有量的50%、100%、150%)及50%甲醇各50mL，按供試品溶液制備方法處理并測定，計算回收率，結果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結果

2.9 耐用性試驗

換不同廠家、不同型號的色譜柱，取同一份供試品2份，按供試品溶液制備方法處理，取供試品溶液和對照品溶液分別進樣，耐用性較為理想。結果見表2。

表2 不同色譜柱的耐用性試驗

3 樣品含量測定

按供試品溶液制備方法處理測定含量，8批樣品和2批模擬樣品的測定結果見表3。

表3 樣品中沒食子酸的含量測定結果

綜上，結果表明本法簡便可靠、專屬性強、準確度高、重復性好，可做為蒙藥成方制劑那如三味丸中沒食子酸含量的分析方法，同時，8批樣品和2批模擬樣品中沒食子酸含量測定結果為相應標準中指標成分的選擇及限度制定提供了參考。