毛細管氣相色譜法測定復方鮮竹瀝液中α-松油醇的含量

吳旻昱，鄔秋萍，付志文，付輝政，周志強，肖小武

1.江西省藥品檢驗檢測研究院,江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心,國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西 南昌 330029；2.江西康恩貝中藥股份有限公司，江西 上饒 334400

復方鮮竹瀝液由鮮竹瀝、魚腥草、枇杷葉、桔梗、生半夏、生姜、薄荷素油七味中藥組成，方中為君藥的鮮竹瀝具有性寒滑利，清肺降火，化痰止咳等功效，魚腥草和枇杷葉均具有清熱降氣，化痰止咳等功效，二者共為臣藥［1］。魚腥草為三白草科植物載菜Houttuynia cordataThunb.的新鮮全草或干燥地上部分，均具有止咳化痰、清肺止咳等功效［2］。現行的復方鮮竹瀝液處方制法規定要求魚腥草為蒸餾液入藥［3］，而魚腥草蒸餾液主要含α-松油醇，甲基正壬酮等魚腥草揮發性特征成分，現代研究表明α-松油醇，甲基正壬酮等為魚腥草的功效成分［4-6］。現行復方鮮竹瀝液的質量標準只是采用對照藥材水煎處理法對魚腥草進行了薄層色譜的定性控制［3］，此方法未能對魚腥草蒸餾液的揮發性成分進行有效的控制。但《中國藥典》2020 版一部［3］收錄的以蒸餾液入藥的“魚腥草滴眼液”，《中國獸藥典》2015 年版［7］收錄的“魚腥草注射液”也以α-松油醇、甲基正壬酮、4-萜品醇和乙酸龍腦酯進行定量控制。現行標準簡單，而相關質量控制研究文獻也較少［8-12］。故本研究參照相關研究［13］采用毛細管氣相色譜法測定復方鮮竹瀝液中α-松油醇的含量，以期為復方鮮竹瀝液質量控制提供參考。

1 儀器與試劑

8890 型氣相色譜儀（美國Agilent 公司），配置氫火焰離子化檢測器（FID）、7693 型液體自動進樣器，Openlab 色譜工作站，BT25S 型十萬分之一電子天平（瑞士賽多利斯公司）。α-松油醇（中國食品藥品檢定研究院，批號：111859-201804），甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。復方鮮竹瀝液樣品共計18 批次，共涉及6個生產企業，均來自國家藥品評價性抽檢市場抽樣。

2 方法與結果

2.1 對照品貯備液的制備

取α-松油醇對照品適量，精密稱定，用乙酸乙酯∶無水乙醇（8∶2）制成質量濃度約為0.7 mg/mL 的對照貯備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取鮮竹瀝40 mL,通過C18 固相萃取小柱（600 mg∶6 mL，使用前用12 mL 的甲醇活化，活化后用50 mL 水沖洗干凈），用乙酸乙酯∶無水乙醇（8∶2）的混合溶液洗脫，收集洗脫液約2 mL，置5 mL 量瓶中，加上述混合溶液至刻度，搖勻，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：DB-WAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）,以N2為載氣，柱流速：3.5 mL/min,進樣1 μL，分流比10∶1；進樣口溫度：250 ℃；程序升溫：初始溫度65 ℃，保留0.5 min，3 ℃/min 升至120 ℃保留0.5 min，10 ℃/min 升至210 ℃；280 ℃后運行5 min，FID 檢測器溫度300 ℃。結果色譜圖中其他成分對α-松油醇色譜峰無干擾，分離度良好，對照品和供試品溶液色譜圖見圖1。

圖1 對照品和供試品溶液的色譜圖：A.對照品；B.供試品

2.4 線性關系考察

取“2.1”項下的對照品貯備液，依次用乙酸乙酯∶無水乙醇（8∶2）的混合溶液稀釋成5 個所需的質量濃度，按“2.3”項下色譜條件進樣測定峰面積。以質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線并進行回歸分析，α-松油醇的回歸方程為Y=2.341 6X+3.102 7，R2=0.999 8，α-松油醇在7.524 0～752.400 0 μg/mL 范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取“2.1”項目下的對照品貯備液，用乙酸乙酯∶無水乙醇（8∶2）的混合溶液稀釋5 倍，按“2.3”項條件下連續進樣6 次，測定峰面積。結果α-松油醇峰面積的RSD（n=6）為0.87%，表明精密度良好。

2.6 重復性試驗

取A 公司復方鮮竹瀝（批號：1909013），按“2.2”項下方法平行制備供試品溶液6 份，在上述“2.3”條件下進行分析測定，結果表明α-松油醇平均含量為14.05 μg/mL、RSD（n=6）為1.62%，表明該方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取A 公司復方鮮竹瀝液（批號：1909013），按“2.2”項下方法制備供試品溶液，在上述“2.3”條件下分別于0、6、12、18、24 h 進行分析測定峰面積，結果α-松油醇的峰面積的RSD（n=5）為0.71%，表明α-松油醇在24 h 內穩定性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取A 公司復方鮮竹瀝液（批號：1909013）6 份，每份20 mL，分別精密加入相對應量α-松油醇對照品溶液（0.150 48 mg/mL）20 mL，按“2.2”項下方法制備供試溶液，在上述“2.3”條件下進行分析測定，計算回收率，結果表明樣品按本標準試驗，回收率良好，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n=6）

2.9 樣品的測定

取6 家生產企業18 批次的復方鮮竹瀝液樣品（每家企業3 批次），按“2.2”項下方法制備，每批平行處理兩份，每份進兩針。在上述“2.3”條件下進行分析測定，以平均峰面積計算α-松油醇含量，結果見表2。

表2 樣品的測定結果（μg/mL）

3 討論

3.1 前處理方式的選擇

復方鮮竹瀝液成分復雜，試驗首先考察了頂空加熱直接進樣以及溶劑萃取濃縮兩種處理方式測定復方鮮竹瀝液中的α-松油醇，但供試品中的α-松油醇含量較小且供試品液中薄荷油等成分存在較大干擾，故采取了固相萃取進行凈化的方法進行前處理。

3.2 目標成分的確定

考慮到魚腥草蒸餾液中含有α-松油醇、4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯等多個揮發性特征成分，試驗最開始測定復方鮮竹瀝液中α-松油醇、4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯4 個組分的含量，但對6 家生產企業的樣品測定發現僅檢出α-松油醇，均未檢出4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯三個成分，故本研究只測定了α-松油醇。

3.3 測定結果分析

從樣品測定結果分析，生產企業的批間差異較小，但一家生產企業3 批次樣品均未檢出α-松油醇，且4-萜品醇、甲基正壬酮和乙酸龍腦酯也未檢出，認為可以考慮該企業的生產工藝或投料存在問題。