腺樣體肥大伴變應性鼻炎患兒致敏原譜及腺樣體組織中IL-25 IL-32 EOS表達分析及診斷價值

韓江南，徐艷紅，姜 霞，石向陽，張瑞林

(1.四川雅安市人民醫院耳鼻咽喉頭頸外科，四川 雅安 625000 2.四川省成都市第二人民醫院耳鼻咽喉頭頸外科，四川 成都 610017)

變應性鼻炎是一種變態反應性疾病，好發于兒童，在臨床上又被稱為過敏性鼻炎。雖然應變原不同，但其典型臨床表現基本相似，即為陣發性噴嚏、大量清涕等，且具有季節性發作與常年性發作等特點[1]。基于此，明確致敏原尤為重要，對臨床治療及預防具有重要意義。而腺樣體肥大是一種經反復炎癥刺激而發生的病理性疾病，隨著增生及肥大進展的改變，可引起分泌性中耳炎、睡眠打鼾，以及呼吸暫停等臨床癥狀。經調查發現，變應性鼻炎患兒常伴有腺樣體肥大表現[2]。有研究指出，腺樣體肥大伴變應性鼻炎患兒機體存在炎癥因子異常表達情況，譬如IL-25、IL-32。也有研究表示，IL-25、IL-32參與了腺樣體肥大伴變應性鼻炎發生、發展。但臨床上對于上述指標與腺樣體肥大伴變應性鼻炎的關系尚未明確，尚不清楚其作用機制，故本次選取96例變應性鼻炎患兒與48例健康體檢者的臨床資料進行回顧性分析，旨在分析腺樣體肥大伴變應性鼻炎患兒致敏原譜及腺樣體組織中IL-25、IL-32、EOS表達及診斷價值，現將其報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析2017年5月至2020年5月診治96例變應性鼻炎患兒與48例健康體檢者的臨床資料，按照1∶1個體匹配原則選擇腺樣體肥大伴變應性鼻炎患者48例為A組與單純變應性鼻炎患者48例為B組。診斷標準：符合“變應性鼻炎診斷和治療指南”[3]相關于變應性鼻炎的診斷標準，經血清過敏原IgE檢測，其濃度>0.35UL/mL。納入標準：①臨床資料齊全；②總病程≥4周；③伴有鼻癢、打噴嚏、清水樣涕、鼻塞等臨床癥狀，其癥狀持續或累計1h以上；④無支氣管哮喘等疾病。排除標準：①伴有急慢性感染性鼻腔疾病；②伴有鼻竇炎等疾病；③伴有重要臟器功能障礙等疾病。變應性鼻炎患兒中男性49例、女性47例，年齡范圍3～12歲，平均值(7.21±1.25)歲；48例健康體檢者中男性25例、女性23例；年齡范圍3～14歲，平均值(7.32±1.19)歲。兩組一般資料比較齊同(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法:回顧性分析96例變應性鼻炎患兒與48例健康體檢者經IL-25、IL-32及EOS檢測的資料。包括變應性鼻炎患兒經變應原檢測的資料。操作步驟如下：①變應原檢測：于空腹狀態下抽取靜脈血3mL行血清特異性IgE檢測，采用德國Cl-BioSciTec GmbH免疫檢測儀，試劑盒為AllergyScreen Test Kit。并行吸入物篩查，如戶塵螨、春季花粉組合、夏秋季花粉組合等常見吸入性應變原。已任何一項檢測結果≥0.35KU/L視為存在致敏原。②IL-25與IL-32檢測：取新鮮腺樣體組織標本后采用4%多聚甲醛固定，常規脫水后，行石蠟包埋備用。將標本制成石蠟切片，采用SP法對其進行免疫組織化學染色，操作步驟按照說明書依次進行。其中，陽性判定標準為細胞膜或細胞質存在環狀沉淀的棕黃色/棕褐色顆粒狀物質，陰性判定標準為無顯著特異性著色。在低倍鏡下觀察各玻片，計算陽性細胞個數在總細胞個數中所占百分比，且算出平均值。③EOS檢測：標本制成石蠟切片后在顯微鏡下肉眼觀察經蘇木精-伊紅染色后組織標本中的EOS浸潤情況，譬如EOS是否呈圓形，細胞內充分均勻排列粉紅色嗜酸顆粒，選取5個視野進行計數，計算取平均值。

1.3觀察指標

1.3.1分析變應性鼻炎患兒的致敏原譜，譬如戶塵螨、春季花粉組合(榿木、榛屬、楊屬、榆屬、柳屬)、夏秋季花粉組合(葎草、艾蒿、豚草、車前草)、短豚草、霉菌組合(點青霉、牙枝霉、黑根霉、交鏈孢霉)、狗毛皮屑，以及雞蛋白、牛奶、魚蝦蟹所占比率。

1.3.2評估三組受檢人員的白介素-25(IL-25)、白介素-32(IL-32)、嗜酸性粒細胞(EOS)。

1.3.3分析腺樣體肥大伴變應性鼻炎患者的獨立影響因素，以及IL25、IL32與EOS相關性。

2 結 果

2.1致敏原譜分布:96例變應性鼻炎患兒經血清變應原總IgE檢測，其陽性為94例(97.92%)；其中僅對一種變應原過敏共42例(44.68%)，對2種以上變應原過敏共52例(55.32%)。吸入性變應原中以戶塵螨陽性率最高，以狗毛皮屑陽性率最低；食入性變應原中以雞蛋白陽性率最高，以魚蟹蝦陽性率最低。詳見表1。

表1 92例患兒的致敏原譜分布

2.2IL-25、IL-32及EOS比較:A組與B組的IL-25、IL-32、EOS均高于對照組(P<0.05)；A組的IL-25、IL-32、EOS高于B組(P<0.05)。詳見表2。

表2 三組的IL-25 IL-32及EOS比較

2.3二分類Logistic回歸分析:以“組別”為因變量(賦值：1=A組，0=B組)，以“IL-25、IL-32、EOS”為自變量，納入Logistic回歸分析。經二分類Logistic回歸分析顯示，IL-25、IL-32、EOS高表達是腺樣體肥大伴變應性鼻炎患者的獨立影響因素(P<0.05)。詳見表3。

表3 腺樣體肥大伴變應性鼻炎患者的二分類Logistic回歸分析

表4 IL-25 IL-32 EOS對腺樣體肥大伴變應性鼻炎的診斷價值分析

2.4相關性分析:Pearson相關性分析顯示，IL-25與EOS呈正相關(r=0.742，P<0.05)；IL-32與EOS呈正相關(r=0.871，P<0.05)。散點圖見圖1、2。

圖1 IL-25與EOS的相關性

2.5ROC曲線分析:ROC曲線分析顯示，IL-25、IL-32、EOS、三項聯合預測腺樣體肥大伴變應性鼻炎的AUC值分別為0.855、0.977、0.996、0.994(P<0.05)。詳見表4。ROC曲線見圖3。

圖2 IL-32與EOS的相關性

圖3 IL-25、IL-32、EOS及三項聯合的ROC曲線分析

3 討 論

變應性鼻炎是指機體過敏原暴露后，在IgE介導作用下由多種細胞因子、炎癥介質所參與的一種非感染性慢性疾病。按照其發病機制可分為兩個階段，一為致敏過程，是指初次接觸致病原產生IgE過程，即為致敏過程；二為激發階段，是指再次接觸過敏原，根據發作時間分為早發性與晚發性；前者是由肥大細胞、嗜堿性細胞脫顆粒釋放炎性介質所引起；后者是由細胞因子引發炎性細胞浸潤的黏膜炎癥[4,5]。從上述作用機制可得出，細胞因子、炎性介質等參與了變應性鼻炎的發生及發展。在正常情況下，機體血清IgE含量極低，僅占血清免疫球蛋白總量的0.2%，而在變應性鼻炎患者中，其血清IgE含量顯著上升，約是正常人1000-10000倍左右[6]。基于此，檢測變應性鼻炎患兒的血清IgE顯得尤為重要，且通過行吸入物篩查，明確致敏原。研究結果顯示，吸入性變應原陽性率顯著高于食入性變應原，由此說明，環境因素在變應性鼻炎發病過程中占據重要位置，譬如戶塵螨、春季花粉組合、夏秋季花粉組合、短豚草、霉菌組合、狗毛皮屑等，均為該病的主要致敏原；其中，以戶塵螨占比最高。針對其致敏原，注意室內衛生，開窗通風，對減少變應原數量及減少變應性鼻炎誘發因素具有重要意義。

經調查發現，變應性鼻炎患兒大多都伴有腺樣體肥大癥狀。而腺樣體肥大是由炎癥反復刺激所引起的一種病理性增生[7]。對于其發病病因，目前臨床上尚未全部闡明，僅認為與微生物刺激、大氣污染等外來刺激具有一定相關性，通過使腺樣體表面上皮黏附生物膜，持續刺激腺樣體，促使其增生、肥大，最終發展為慢性炎癥[8]。眾多臨床研究顯示，多種炎性細胞因子，譬如IL-25、IL-32在腺樣體肥大伴變應性鼻炎發生和發展過程中發揮重要作用[9]。其中，IL-25與IL-7具有同源性特征，主要是由Th2細胞所生產，通過促進炎性因子分泌及增強Th2型免疫應答，導致嗜酸性粒細胞浸潤。IL-32則是由T細胞所產生，是一種促炎性細胞因子，在宿主防御機制中發揮重要作用。在正常情況下，其含量極低，而在異常情況下，其水平上調[10]。研究結果顯示，A組與B組的IL-25、IL-32表達量均高于對照組，由此說明IL-25、IL-32參與了腺樣體肥大伴變應性鼻炎的病理過程，且水平的升高，會促進炎性因子分泌及增強Th2型免疫應答，導致嗜酸性粒細胞浸潤，進一步加劇過敏性疾病[11]。另外，A組的IL-25、IL-32的水平高于B組，經分析發現與腺樣體肥大具有一定相關性，即腺樣體增厚、肥大越明顯，腺樣體組織中的炎性細胞因子水平越高，而異常表達的炎性細胞因子會嚴重影響局部免疫，從而引發各種并發癥，從中說明IL-25、IL-32等炎性細胞因子可能參與腺樣體組織結構的重塑[12]。另外，發現IL-25、IL-32與嗜酸性粒細胞浸潤，可起到互為促進的作用[13]。在Pearson相關性分析可看到，IL-25、IL-32與EOS呈正相關；由此推測IL-25、IL-32通過誘導機體細胞形成大量促炎性因子，或直接促進炎癥細胞的聚集及活化，形成了嗜酸性粒細胞與炎性細胞因子的惡性循環[14]。

綜上所述，IL-25、IL-32參與了腺樣體肥大伴變應性鼻炎的發生及發展，可考慮將其作為診斷該病的生物學指標，以期為臨床診治提供重要信息。