血清miR-92a、miR-20a在結腸癌術患者中的變化及對預后的預測價值分析

曾繼莎，屈 敏，何 平

結腸癌具有較高的發病率與病死率。經調查發現，結腸癌發病率在惡性腫瘤中排名第3，而病死率排名第2，且近年來發病率及病死率呈逐漸上升趨勢[1]。研究發現，結腸癌病死率的升高與早期診斷困難、疾病進展速度快等有一定相關性。許多結腸癌患者在中、后期才被確診，故預后不佳，5年生存率較低。基于此，尋找能夠有效診斷結腸癌、評估其預后的分子標志物意義重大。有研究表示，血清miR-92a、miR-20a參與了結腸癌的發生及發展[2]，但目前臨床關于血清miR-92a、miR-20a診斷結腸癌及預測預后價值的研究較少，且尚不清楚結腸癌患者血清miR-92a、miR-20a變化情況。故本研究對86例結腸癌術患者與86例體檢健康者的臨床資料進行回顧性分析，旨在分析結腸癌患者血清miR-92a、miR-20a變化，以及其對預后的預測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年1月—2020年11月攀鋼集團總醫院血液腫瘤科診治的86例結腸癌術患者(觀察組)與86例體檢健康者(對照組)的臨床資料。觀察組納入標準：符合結腸癌診斷標準，經病理學檢查確診；予傳統手術或完整結腸系膜切除術治療；認知功能正常；1個月前未行放化療等治療；無其他部位惡性腫瘤；臨床資料完整。觀察組排除標準：伴嚴重心功能不全；不愿接受手術治療；存在手術禁忌證。172例受檢人員中男87例、女85例，年齡32～70歲。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 結腸癌術患者和體檢健康者一般資料比較

1.2研究方法

1.2.1miR-92a、miR-20a表達：比較觀察組術前及術后1周、1個月、3個月與對照組體檢時血清miR-92a、miR-20a表達量。清晨空腹狀態下抽取受檢人員外周靜脈血3 ml，離心處理后取上清液，將Trizol液與血清按照1︰1混勻在2 ml離心管中，充分震蕩后提取總RNA，加入Rnasin后，再根據逆轉錄試劑盒(System Bio-sciences公司生產)操作說明，將RNA逆轉錄為cDNA；再以cDNA為模板，應用熒光定量PCR試劑行SYBR實時熒光定量PCR檢測，加入miR-92a、miR-20a特定引物后，應用iCycler iQ熒光定量PCR儀進行檢測。循環參數為95℃預變性5 min，隨后95℃變性15 s，退火60℃ 30 s，延長72℃ 1 min，共40個循環，最后采用循環閾值法定量分析miR-92a、miR-20a表達量，以小分子RNAU6為內參，以2-ΔΔCt表示目的基因相對配對正常版本的變化倍數。

1.2.2生存時間、生存率、病死率：觀察組以血清miR-92a、miR-20a中位表達量為截斷值分為高表達組與低表達組，各43例，通過電話方式對2組進行隨訪，隨訪時間2018年1月—2020年11月，比較2組生存時間、生存率、病死率，生存時間為從治療結束后至患者死亡或末次隨訪時間。

1.2.3預后不良影響因素：根據生存率及病死率將觀察組分為預后良好組69例與預后不良組17例，回顧分析2組臨床病理資料,采用多因素Logistic回歸分析探討結腸癌術患者預后不良的影響因素。

1.2.4相關性分析：采用Spearman法分析觀察組腫瘤分化程度、TNM分期與miR-92a、miR-20a的相關性，并行受試者工作特征(ROC)曲線分析miR-92a、miR-20a對患者預后的預測價值，以曲線下面積(AUC)為0.7～0.9表示預測準確性較好。

2 結果

2.1血清miR-92a、miR-20a表達量比較 觀察組術前血清miR-92a、miR-20a表達量高于對照組體檢時(P<0.01)；觀察組術后1周、1個月、3個月miR-92a、miR-20a表達量低于術前(P<0.05)，且術后3個月miR-92a、miR-20a表達量低于術后1周及術后1個月(P<0.05)，術后1周及術后1個月miR-92a、miR-20a表達量比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 結腸癌術患者及體檢健康者血清miR-92a、miR-20a表達量比較

2.2生存時間、生存率、病死率比較 高表達組生存時間短于低表達組，生存率低于低表達組，病死率高于低表達組(P<0.01)。見表3。

表3 結腸癌術患者及體檢健康者生存時間、生存率、病死率比較

2.3預后不良單因素分析 單因素分析顯示，預后良好組與預后不良組在性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，而在腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期、miR-92a表達量、miR-20a表達量方面比較差異有統計學意義(P<0.01)。見表4。

表4 86例結腸癌術患者預后不良單因素分析

2.4預后不良多因素Logistic回歸分析 以“組別”為因變量(賦值：預后良好組=1，預后不良組=2)，以“腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期、miR-92a表達量、miR-20a表達量”為協變量，行多因素Logistic回歸分析顯示，腫瘤分化程度(低分化)、腫瘤TNM分期(Ⅲ期)、miR-92a表達、miR-20a表達是結腸癌術患者預后不良的影響因素(P<0.01)。

2.5相關性分析 Spearman相關性分析顯示，腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期與miR-92a、miR-20a表達呈正相關(P<0.05，P<0.01)。見表5。

表5 結腸癌術患者腫瘤分化程度、TNM分期與miR-92a、miR-20a表達的相關性分析

2.6ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，miR-92a表達預測結腸癌術患者預后的AUC值為0.785，P<0.01；miR-20a表達預測結腸癌術患者預后的AUC值為0.969，P<0.01。見表6及圖1。

圖1 miR-92a與miR-20a表達預測結腸癌術患者預后的受試者工作特征曲線分析

表6 血清miR-92a、miR-20a表達對結腸癌術患者預后的預測價值分析

3 討論

結腸癌多發生在直腸與結腸交界處，隨著病情的發展，會侵犯多個內臟器官及組織[3-4]。統計發現，該病具有較高的病死率，全球結腸癌病死率約為50%；若早期對結腸癌患者實施科學、有效的治療，則能進一步提高生存率[5-8]。miRNA的異常表達在惡性腫瘤發生、發展及預后評估中具有十分重要的作用[9]。有研究報道顯示，miRNA的高表達能夠誘導腫瘤血管生成[10-11]。鑒于miRNA異常表達是導致結腸癌進一步惡化的重要原因，本文從分析血清miR-92a、miR-20a表達量入手，以期為結腸癌的臨床診斷、預后評估篩選實用指標。本研究結果可見，觀察組術前miR-92a、miR-20a表達量高于對照組體檢時，提示結腸癌患者血清miR-92a、miR-20a表達量較正常人群高，血清miR-92a、miR-20a表達與結腸癌的發生具有一定關系，在腫瘤的發生、轉移等過程中起著十分重要的作用。

miR-92a為miR-17-92簇的重要組成，在多種腫瘤性疾病中異常表達。梁衛東等[12]研究顯示，食管鱗癌患者血漿miR-92a表達顯著高于健康人員，且伴有淋巴結轉移的食管鱗癌患者血漿miR-92a表達高于無淋巴結轉移患者，由此說明miR-92a有望成為腫瘤生物學標志物，其通過抑制FOXA2表達促進腫瘤細胞侵襲及轉移，從而充分發揮原癌基因的作用。但結合目前已有研究結果，單一血清miR-92a診斷腫瘤性疾病存在一定局限性，建議聯合其他血清miRNA檢測進一步提高結腸癌的診斷價值。

miR-20a同樣在腫瘤細胞的增殖、轉移、侵襲、凋亡過程中發揮重要調控作用，通過下調程序性細胞死亡基因4的表達，抑制癌細胞凋亡及促進癌細胞增殖[13-15]。黃鋒等[16]指出，miR-20a與腫瘤細胞的遷移及上皮細胞間質轉化具有密切關系。本文多因素Logistic回歸分析可見，miR-92a、miR-20a表達是結腸癌術患者預后不良的影響因素；且miR-92a、miR-20a表達與腫瘤分化程度、TNM分期呈正相關。說明檢測miR-92a、miR-20a表達能為疾病程度判斷及預后評估提供客觀依據。本文86例結腸癌患者經手術治療后，血清miR-92a、miR-20a表達量與術前相比明顯下降，因為miR-92a、miR-20a是經癌組織或癌細胞分泌進入血循環，當手術切除病灶組織，間接切斷了血液中miR-92a、miR-20a的來源，故其表達量明顯下降[17-19]。

綜上，血清miR-92a、miR-20a表達與結腸癌的發生、發展及預后相關，二者有望作為結腸癌診斷及術后預后評估的重要標志物。但本研究樣本量較小，后續仍需收集大量臨床數據，以深入探究血清miR-92a、miR-20a在臨床中的應用價值。