免疫組化多種抗體聯合檢測在肝細胞癌與相關良性結節鑒別診斷中的應用

梁婷，李榮，王冬梅，李慧娟

（贛州市腫瘤醫院病理科，江西 贛州 341000）

肝細胞癌及相關的良性增生性結節是肝臟的多發病，正確的診斷對治療決策具有關鍵的指導意義，其臨床及影像學均無明確特異性表現，需依靠病理檢查確診[1]。但在病理組織學形態方面，肝細胞癌（特別是高分化型）與肝細胞腺瘤（HCA）、局灶結節性增生（FNH）、結節性再生性增生（NRH）等良性結節相似，易誤診，引起嚴重后果[2]。本研究旨在探究免疫組化多種抗體聯合檢測在肝細胞癌與相關良性結節鑒別診斷的準確性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年7月至2019年6月本院收治的肝癌患者38例，其中男23例，女15例；年齡38～63歲。另選取同期就診的肝良性結節增生患者18例，其中男11例，女7例；年齡39～63歲。兩組臨床資料比較差異無統計學意義，具有可比性。患者及家屬均簽署知情同意書。本研究已獲得醫院倫理委員會審核批準。

納入標準：所有患者均符合《原發性肝癌診療規范（2015年版）》的診斷標準，超聲檢查存在相關結節[3]。排除標準：患者經化療、放療以及免疫治療，伴繼發性肝癌，合并有其他器官惡性腫瘤或免疫系統疾病者[4-5]。

1.2 方法 所有患者均分別進行病理組織學、形態學和免疫組織化學檢查。對患者進行病理檢測，對比肝癌組織和良性增生性結節在免疫組化檢查的表達情況，確定肝癌以及良性增生性結節的最佳診斷方式[6]。取患者肝癌組織及增生性結節組織各3塊，福爾馬林中保存，脫水、石蠟包埋、切片、脫蠟。隨后選用適合石蠟切片的Glypican-3、Bcl-2及Ki-67鼠抗人單克隆抗體并標記。依據DAB顯色試劑盒要求進行免疫組化實驗[7]。

1.3 觀察指標 對比肝癌組織和良性增生性結節在免疫組化檢查的表達情況，確定肝癌以及良性增生性結節的最佳診斷方式[8]。以高年資病理醫師核閱為金標準，對比在肝癌組織和良性增生性結節不同部位進行免疫組化檢查的準確率、敏感性和特異性[9]。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，計量資料以“±s”表示，行t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Glypican-3免疫組化結果 Gpc-3陽性表達于細胞質和細胞膜，呈棕黃色顆粒。免疫組化染色結果顯示，18例肝細胞癌組織Gpc-3蛋白表達陽性率為84.21%，良性增生性結節Gpc-3蛋白表達陽性率為0.00%，比較差異有統計學意義（χ2=26.784，P＜0.05），見表1。

表1 Gpc-3對肝癌組織和良性增生性結節的免疫組化診斷結果Table 1 Gpc-3 in immunohistochemical diagnosis results of liver cancer tissues and benign hyperplastic nodules

2.2 BCL-2免疫組化結果 BCL-2的免疫組織化學染色，BCL-2陽性染色定位于細胞漿，染色為黃色或棕黃色。BCL-2蛋白在肝癌組織中的陽性表達率為88.89%，在良性增生性結節發生率為55.55%，差異有統計學意義（χ2=4.985，P＜0.05），見表2。

表2 BCL-2對肝癌組織和良性增生性結節的免疫組化診斷結果Table 2 BCL-2 in immunohistochemical diagnosis results of liver cancer tissues and benign hyperplastic nodules

2.3 Ki-67免疫組化結果 Ki-67蛋白表達位于細胞核，陽性細胞的細胞核染色為棕黃色，Ki67以細胞不著色或＜10%為陰性，≥10%的細胞著色為陽性。Ki-67蛋白在肝癌組織中的陽性表達率為76.32%，在良性增生性結節的陽性表達率為33.33%，差異有統計學意義（χ2=8.93，P＜0.05），見表3。

表3 Ki-67免疫組化結果Table 3 immunohistochemistry results of Ki-67

3 討論

肝細胞癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀。手術是臨床上治療肝癌主要的方式，但術后5年復發率超過50%[10-11]，導致患者生存率并未得到顯著改善。因此，借助免疫組化檢測提高肝細胞癌的診斷準確率對于早期發現肝癌具有重要意義。

Glypican-3對于肝細胞癌具有較高的診斷價值，主要是由于該物質在肝細胞癌患者體內有較高的表達率，可反映患者體內的病變情況，從而提高診斷效果[12]。BCL-2基因即B細胞淋巴瘤-2基因，在組織中抑制凋亡因子[13]。Ki67是一種核增殖抗原，是某些惡性腫瘤預后的重要參考指標之一，其表達與多種惡性腫瘤的分化程度、浸潤轉移及預后密切相關[14]。3項指標均可直接反映癌癥組織和增生性結節組織的癌細胞發展程度及病情所處階段[15-16]。本研究表明，肝細胞癌組織Gpc-3蛋白表達陽性率為84.21%，良性增生性結節Gpc-3蛋白表達陽性率為0.00%，BCL-2蛋白在肝癌組織中的陽性表達率為88.89%，在良性增生性結節發生率為55.55%，Ki-67蛋白在肝癌組織中的陽性表達率為76.32%，在良性增生性結節發生率為33.33%，Glypican-3及Ki-67免疫組化在肝癌組織的診斷中表達陽性率最高。

綜上所述，肝臟肝細胞癌與增生性結節難以鑒別時，建議進行Glypican-3及Ki-67免疫組化聯合檢測。