血清SETDB1在結直腸癌中的表達及臨床意義

王慧玲，袁有華

(河南省人民醫院/鄭州大學人民醫院/河南大學人民醫院，河南 開封 475004)

結直腸癌的發病率位居我國消化道腫瘤榜首，因早期癥狀不典型，多數患者發現時已處于中晚期階段。因此，為了早診斷、早治療，應探究結直腸癌發生發展的分子機制，尋找出更加有效的分子檢測靶標[1]。SETDB1是位于染色體的編碼組蛋白甲基轉移酶基因[2]，它能調節組蛋白甲基化、基因沉默和轉錄抑制。研究表明，SETDB1與腫瘤的增殖、侵襲等多種生物學行為密切相關[3]。已有研究表明SETDB1在結直腸癌組織中呈現高表達[4]，但在結直腸癌患者血清中的表達水平卻鮮有報道。本研究旨在通過檢測SETDB1在結直腸癌患者血清中的表達情況，分析其與結直腸癌臨床病理特征的相關性。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象選取河南省人民醫院2017年9月至2019年9月收治的50例原發性結直腸癌患者作為觀察組，選取同期50例正常體檢者作為對照組。收集觀察組的一般資料(年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度、淋巴結轉移情況等)。觀察組患者未接受放療、化療、生物治療等抗腫瘤治療。本研究通過河南省人民醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 檢測方法

1.2.1主要試劑及儀器 采用天根生化的RNA提取試劑盒和型號為ABI 7500的qRT-PCR儀器。SETDB1及內參引物均由上海生工生物公司合成，SETDB1上游引物為5’-TCCTGTGAAGCCTGAAGGAC-3’，下游引物為5’-TTAGTTGATGGCAGGCACAC-3’；內參GAPDH上游引物為5’-AAAATCAAGTGGGGCGATGC-3’，下游引物為 5’-GATGACCCTTTTGGCTCCCC-3’。

1.2.2血清采集 收集河南省人民醫院2017年9月至2019年9月收治的確診為原發性結直腸癌患者的血清標本50例和同期正常體檢者的血清標本50例。采集空腹靜脈血2～3 mL，編號標記，并核對病人信息無誤后如可及時檢測可放置4 ℃冰箱，不能及時檢測則放置-80 ℃冰箱暫存。

1.2.3q-PCR檢測 按照試劑盒說明書提取總RNA，檢測其濃度和純度，RNA純度A260/A280在1.8～2.1視為合格。逆轉錄條件：50℃，30 min；94 ℃，2 min；循環1次。RT-PCR反應：94 ℃，15 s；60 ℃，30 s；68 ℃，3 min；循環40次。每個樣本重復3個副孔。采用2-ΔΔCt法計算SETDB1的相對表達量。

2 結果

2.1SETDB1mRNA的表達觀察組中35例(70%)血清SETDB1mRNA表達量高于正常對照組，差異有統計學意義(t=2.726，P=0.009)，見圖1。

2.2SETDB1mRNA表達與結直腸癌患者臨床病理特征的關系結直腸癌患者血清中SETDB1mRNA表達水平與腫瘤直徑、分化程度、浸潤程度、淋巴結轉移情況有關(P<0.05)；與患者性別、年齡、遠處轉移情況無關(P>0.05)。見表1。

圖1 SETDB1 mRNA在兩組血清中的表達

表1 觀察組患者血清SETDB1 mRNA的表達與其臨床病理特征的關系[n(%)]

3 討論

結直腸癌是一種常見的消化道腫瘤。全球癌癥統計數據顯示，直腸癌是僅次于肺癌和前列腺癌的導致男性死亡的癌癥，在女性中僅次于乳腺癌[5]。結直腸癌的癌變過程復雜且病因尚未明確，涉及多種基因組變異和生物學過程。結直腸在各種致癌因素的作用和影響下，其黏膜上皮細胞的基因水平失去正常的調控能力，致使細胞的正常分裂周期發生改變，從而導致細胞無限增殖引起腫瘤的發生發展。但該過程是一個多因素影響及多基因調控的復雜過程。隨著外科手術[6]、新輔助治療的進步[7]以及分子靶向藥物的發現[8]，結直腸癌患者的預后已經有了明顯改善，但是目前結直腸癌患者的5 a生存率仍然不盡人意[9]。多數結直腸癌患者在診斷之初，就已經出現了遠處轉移[10]。由于結直腸細胞具有高轉移性的生物學特性，約50%的患者死于疾病進展或者遠處轉移[11]。因此，尋找協助結直腸癌診斷以及預測復發轉移相關的分子標志物十分重要。

SETDB1 編碼組蛋白甲基轉移酶，可調節組蛋白甲基化，而組蛋白甲基化對腫瘤的生長起重要作用[12]。研究表明，SETDB1與人類多種腫瘤，如肺癌[13]、肝癌[14]、黑色素瘤[15]、胰腺癌[16]、乳腺癌[17]、卵巢癌[18]和前列腺癌[19]等的發生密切相關，SETDB1在結直腸癌的發生發展中同樣扮演重要角色。華中科技大學同濟醫院及中山大學附屬腫瘤醫院聯合研究表明，SETDB1在結直腸癌組織中表達上調，其表達水平與臨床預后有一定相關性。SETDB1的抑制作用可降低結直腸癌細胞對體外和體內靶向治療的耐藥性，SETDB1可能成為治療KRAS突變型結直腸癌的潛在靶標[20]。武漢大學中南醫院的研究同樣證實沉默SETDB1可抑制結直腸癌的發生發展[21]。Soobeom Lee等[22]研究表明，敲低SETDB1的表達可以將干細胞樣的結直腸癌細胞轉化為有絲分裂后細胞，從而恢復其正常形態。以上研究均取結直腸癌患者組織標本檢測SETDB1表達，具有有創性、取材難、不易頻繁實施的缺點，而血清學檢測則避免了這些弊端。

癌癥基因組圖譜數據庫亦顯示SETDB1在腫瘤高表達基因中排名靠前[23]，因而已有部分學者將SETDB1基因看作癌基因。本研究結果顯示，觀察組患者血清中SETDB1mRNA表達量高于對照組，說明SETDB1可能對結直腸癌發生發展起到一定的促進作用。分析觀察組的臨床資料發現，SETDB1的表達水平與患者的腫瘤直徑、分化程度、浸潤程度、淋巴結轉移情況相關，與患者的性別、年齡、遠處轉移情況無關。

綜上所述， SETDB1參與了結直腸癌的發生發展、侵襲轉移等過程，SETDB1的表達水平對評估臨床腫瘤進展和患者預后有一定價值。SETDB1檢測有望成為一種無創的臨床診療方法，在結直腸癌患者的診斷及預后評價過程中發揮一定的價值，但SETDB1在結直腸癌發生發展中的具體作用機制有待進一步研究。