細(xì)辛水煎液抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

聶安政，茹慶國(guó)，付智慧*

（1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450052；2.河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450008）

細(xì)辛為馬兜鈴科植物北細(xì)辛［Asarum heterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.］、漢城細(xì)辛（Asarum sieboldiiMiq.var.seoulense Nakai）或華細(xì)辛（Asarum sieboldiiMiq.）的干燥根和根莖［1］。細(xì)辛始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性溫，味辛，歸肺、腎、心三經(jīng)，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲的功效，主要用來(lái)治療風(fēng)寒頭痛、牙痛、痹痛及咳喘痰稀等癥，至今已有近2 000 多年的臨床應(yīng)用歷史［2－5］。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，臨床上多用細(xì)辛治療牙痛、坐骨神經(jīng)痛、頑固性三叉神經(jīng)痛與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病［6－7］，但關(guān)于細(xì)辛水煎液抗炎鎮(zhèn)痛的基礎(chǔ)研究卻鮮有報(bào)道，本研究采用小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、熱板法實(shí)驗(yàn)探討細(xì)辛水煎液的抗炎鎮(zhèn)痛作用，以期為細(xì)辛的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)昆明種小鼠120 只，雌雄各半，體質(zhì)量（18±2）g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2020－0004。

1.2 藥物、試劑及儀器

細(xì)辛購(gòu)買于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，由鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)藥學(xué)部王娟教授鑒定為馬兜鈴科植物華細(xì)辛（Asarum sieboldiiMiq.）的根及根莖。取細(xì)辛1 000 g，加水5 000 mL煮沸1 h，去渣取汁，將殘?jiān)铀? 000 mL 再煎煮1 h，過(guò)濾，合并2 次藥液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，灌胃前以蒸餾水分別調(diào)整濃度至0.8、0.4 g/mL（生藥量）。地塞米松（陜西白鹿制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44020701）；二甲苯（新鄉(xiāng)市正鑫化工有限公司，CAS登記號(hào)：95－47－6）；冰醋酸（山東權(quán)泰化工科技有限公司，CAS登記號(hào)：64－19－7）；打孔器（美國(guó)kentscientific，貨號(hào)：INS500075－5）；電子天平（上海力辰儀器科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

取小鼠40 只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組、地塞米松組和細(xì)辛水煎液高、低劑量組，每組10只。地塞米松組給予地塞米松溶液1.5 mg/kg，細(xì)辛水煎液高、低劑量組分別給予12.0、6.0 g/kg的細(xì)辛水提物，給藥體積20 mL/kg，對(duì)照組給予等體積的蒸餾水。每日1次，連續(xù)3 d，末次給藥1 h于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL，左耳涂抹生理鹽水對(duì)照，30 min后將小鼠脫頸椎處死，剪下兩耳，用打孔器直接在兩耳相同部位打孔，分別稱重，記錄數(shù)據(jù)。

腫脹度（g）=右耳質(zhì)量－左耳質(zhì)量

1.3.2 小鼠扭體實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物分組灌胃同“1.3.1”。每日1 次，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥后1 h，腹腔注射0.2 mL的1%醋酸，記錄15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。

1.3.3 熱板法測(cè)定痛閾值

動(dòng)物分組灌胃同“1.3.1”。每日1 次，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后30、60 min測(cè)量并記錄痛閾值。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料服從正態(tài)分布時(shí)以±s表示，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 法（方差齊時(shí)）或Dunnett'T3 檢驗(yàn)（方差不齊時(shí)）。P< 0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠耳廓腫脹度的變化情況比較

與對(duì)照組比較，地塞米松組小鼠耳廓腫脹度顯著性降低（P<0.01）；細(xì)辛水煎液高、低劑量組腫脹度顯著性降低（P<0.01）。結(jié)果見表1。

表1 細(xì)辛水煎液對(duì)小鼠耳廓腫脹度的影響（±s）

表1 細(xì)辛水煎液對(duì)小鼠耳廓腫脹度的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別對(duì)照組地塞米松組高劑量組低劑量組n 10 10 10 10劑量—1.5 mg/kg 12 g/kg 6 g/kg腫脹度（g）0.025 4±0.002 5 0.021 7±0.002 6*0.013 5±0.002 1**0.013 6±0.002 5**

2.2 小鼠扭體次數(shù)的變化情況比較

小鼠在造模后15 min，地塞米松組扭體次數(shù)較對(duì)照組顯著降低（P< 0.01）；細(xì)辛水煎液高劑量組扭體次數(shù)較對(duì)照組明顯降低（P <0.05），細(xì)辛水煎液低劑量組未見顯著差異（P>0.05）。結(jié)果見表2。

表2 細(xì)辛水煎液對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響（±s）

表2 細(xì)辛水煎液對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別對(duì)照組地塞米松組高劑量組低劑量組n 10 10 10 10劑量—1.5 mg/kg 12 g/kg 6 g/kg扭體次數(shù)（次）20.5±2.6 13.4±2.1**16.7±2.2*19.0±2.0

2.3 小鼠痛閾值的變化情況比較

給藥后30 min，地塞米松組小鼠痛閾值較對(duì)照組顯著升高（P<0.05）；細(xì)辛水煎液高、低劑量組小鼠痛閾值較對(duì)照組均未見顯著差異（P> 0.05）；給藥后60 min，各給藥組痛閾值較對(duì)照組均顯著升高（P<0.01）。結(jié)果見表3。

表3 細(xì)辛水煎液對(duì)小鼠痛閾值的影響（±s）

表3 細(xì)辛水煎液對(duì)小鼠痛閾值的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別對(duì)照組地塞米松組高劑量組低劑量組n 10 10 10 10劑量—1.5 mg/kg 12 g/kg 6 g/kg痛閾值（s）給藥后30 min 16.15±1.97 19.11±1.65*16.46±3.78 16.56±1.66給藥后60 min 13.39±1.35 20.78±1.55**21.01±3.69**18.52±2.10**

3 討論

細(xì)辛始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在臨床應(yīng)用較為廣泛，早在《傷寒雜病論》就記載含有細(xì)辛的方劑19 首［8］；隋唐時(shí)期的《備急千金要方》共收載含細(xì)辛內(nèi)服湯劑6 首［9］；清代梳理發(fā)現(xiàn)有373 首含細(xì)辛方劑［10］；《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 版）收錄含細(xì)辛中藥制劑42 種［11］。2020年新冠疫情爆發(fā)以來(lái)，清肺排毒湯（細(xì)辛含量達(dá)6 g）成為首個(gè)防疫通用方廣泛應(yīng)用［12－16］。然而，關(guān)于細(xì)辛抗炎鎮(zhèn)痛的相關(guān)研究報(bào)道卻較不多見，明確細(xì)辛的抗炎鎮(zhèn)痛作用可以為細(xì)辛的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，也可以為細(xì)辛抗炎鎮(zhèn)痛的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)辛水煎液高劑量組（12.0 g/kg）可明顯減少醋酸所致小鼠疼痛扭體次數(shù)，延長(zhǎng)小鼠扭體潛伏期（P<0.05）；細(xì)辛水煎液高、低劑量組（12.0、6.0 g/kg）可抑制致炎物引起的小鼠耳廓腫脹，明顯降低小鼠耳腫脹度（P<0.01）。給藥后30 min，細(xì)辛水煎液高、低劑量組（12.0、6.0 g/kg）對(duì)小鼠痛閾值的影響不明顯；給藥后60 min，可顯著提升小鼠的痛閾值（P<0.01）。以上結(jié)果提示細(xì)辛具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。然本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)細(xì)辛的抗炎鎮(zhèn)痛作用只是進(jìn)行了初步的研究，之后擬對(duì)細(xì)辛水提物的有效部位和化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步分離、純化和鑒定，確定其抗炎鎮(zhèn)痛的活性成分，并深入探討細(xì)辛抗炎鎮(zhèn)痛效用機(jī)制。