10個白色金針菇菌株工廠化栽培試驗

王 雷 劉 暉 竇宏強 程調娟 袁 斌

（天水眾興菌業科技股份有限公司，甘肅 天水 741000）

金針菇（Flammulina filiformis）又名構菌、冬菇、毛柄金錢菌，隸屬于泡頭菌科（Physalacriaceae），冬菇屬（Flammulina）[1-2]，是我國栽培的主要食用菌之一，也是工廠化栽培數量較大的品種。目前工廠化栽培的金針菇主要為白色品種。為了選育出較優的工廠化白色金針菇品種，我們對收集到的10個菌株進行了比較試驗。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

10個供試菌株均為白色金針菇，其中，白色13來自河南，白色Q1、白色Q2、白色5號來自山東，J08來自江蘇，白色428來自上海，07-3、07-5、07-A、07-11為天水眾興菌業保藏菌種。

1.2 供試培養基

母種培養基：使用日本寒天培養基制作母種試管和平板培養基。液體搖瓶培養基配方：豆粕粉2.11 g，白砂糖12.8 g，KH2PO40.42 g，MgSO40.42 g，水600 mL，pH 6.3～7.3。

栽培料配方：玉米芯37%，米糠30.5%，麩皮10%，棉籽殼6%，大豆皮5.5%，啤酒糟6.5%，甜菜渣2%，貝殼粉2%，碳酸鈣0.5%，含水量67%。

1.3 試驗方法

1.3.1 供試菌株菌絲生長特性測試

從母種試管中挖取直徑為4 mm供試菌株菌塊轉接至日本寒天平板培養基上，置于19 ℃恒溫培養箱中避光培養，試驗重復3次。菌絲萌發后第3天，在培養皿底部菌塊中心劃兩條十字交叉線，繼續培養至菌落邊緣距培養皿邊緣約1 cm時，測算菌絲日均生長速度并觀察菌絲長勢。

1.3.2 ITS rRNA 基因序列及菌株系統發育分析

供試菌株由生工生物工程（上海）股份有限公司進行ITS rRNA基因測序。獲得的序列在NCBI（National Center for Biotechnology Infor- mation）與 GenBank（www.ncbi.nml.nih.gov）數據庫中以BLAST搜索，獲得其他金針菇序列，在CLUSTAL X1.8程序進行比較。使用neighbor-joining method計算進化距離，在MEGA 6.0軟件中用p-distances和Kimura-2parameter雙參數法構建系統發育樹，并用bootstrap檢驗進化樹分支聚類的置信度，重復1 000次[3]。

1.3.3 供試菌株栽培料試驗

按照工廠化瓶栽模式，采用1 500 mL聚丙烯瓶裝料，瓶口內徑84 mm，每瓶濕料重1 060 g，干料重349.8 g。采用液體菌種接種，每個菌株接種16瓶，重復3次。接種后放置于培養溫度16～17 ℃，空氣相對濕度75%的環境下避光養菌。19天菌絲長滿，21天利用機器搔菌并注水8 mL后送至出菇室進行出菇管理。

按照常規工廠化調控方法進行培育，經過菌絲恢復期、現蕾期、低溫抑制期，菇蕾長出后包膠片。待子實體長度達15～16 cm時采收，統計平均單瓶產量和生物轉化率，并評價子實體品質，包括菇帽大小、干爽度、根切面白度、菇形緊實度、菇柄硬度等，統計優等菇比率。優等菇標準為菇帽直徑5～8 mm，菇體干爽、根切面白皙，菇形緊實。

2 結果與分析

2.1 不同菌株的菌絲生長特性

由表1可知，10個白色金針菇菌株在日本寒天培養基平板上的菌絲生長速度相近，其中白色5號日均生長速度最快，為3.81 mm；J08長速慢，為3.28 mm。菌絲長勢較弱的是白色Q1和07-5。

表1 10個白色金針菇菌株菌絲生長表現

2.2 10個菌株的系統發育分析

將10個菌株的ITS rRNA基因序列提交到NCBI，通過Blast工具在GenBank數據庫中進行相似性比較，選取相似性在99%以上的菌株構建系統發育樹（圖1）。結果顯示，10個菌株可以歸于兩類，其中07-11、白色Q2、白色28、白色Q1、白色13、07-A、07-5之間的親緣關系非常近，位于同一個進化枝；其他3個菌株07-3、J08和白色5號的親緣關系最近，說明具有較高的同源性。而這10株菌株和標準菌株位于不同的兩枝，親緣關系稍遠。

圖1 11個菌株（含1個標準菌株）基于ITS序列的系統發育樹

2.3 不同菌株的出菇產量與品質

10個菌株生物轉化率由高到低為：J08>白色Q2>白色Q1>白色5號>07-3>07-5>07-A>白色28>白色13>07-11（表2）。平均單瓶產量以菌株J08最高，為547.27g；以07-11最低，僅472.79 g。單瓶產量最高的是白色Q2，為570.53 g。

表2 10個白色金針菇菌株產量及生物轉化率比較

優等菇率是反映金針菇菌株工廠化栽培商業屬性的指標之一，考察菇帽、干爽度、根切面、菇形緊實度和菇柄的綜合屬性。10個菌株的優等菇率由高到低為：白色Q2>白色Q1>白色5號>白色13>07-A> 07-5>07-11>白色28>07-3>J08（表3），其中白色Q2優等菇率為78.9%，J08僅29.17%。菇體干爽度07-A和白色Q1最佳；菇根切面以白色13和07-5表現白凈；菇形以07-A、白色Q1和白色5號表現緊實；菇柄硬度以白色Q2、白色Q1、07-A和07-5為好。

表3 10個白色金針菇菌株子實體品質比較

3 小結與討論

試驗結果表明，菌株白色Q2和白色Q1有著較高的生物轉化率和優等菇率，符合工廠化栽培對菌株性狀的要求，適合工廠化推廣和栽培。J08雖然單產和生物轉化率高，但子實體農藝性狀欠佳，菇帽大，優等率較低。其他菌株表現一般。

本試驗平板培養基菌絲的生長速度差異不大，但菌絲的長速和長勢與單產并無直接關系。菌絲生長速度快的，單產和轉化率不一定高，這與文獻[4-6]的報道相一致。

通過ITS序列分析表明，雖然10個菌株來源地不同，但菌株間親緣關系較近，平均單瓶產量、生物轉化率和子實體外觀品質表現一定差異。陸歡等[7]研究表明，我國市場上金針菇工廠化栽培菌株的親緣關系較近，與本文研究結果相符。因此，我國金針菇優良菌種繁育工作任重而道遠。