卵巢癌患者血液NLR，CA125，HE4水平聯合檢測的實驗診斷和預后價值研究

劉 檢，李 敏，陸明洋，徐 斌，鄭 曉，周 怡

(蘇州大學附屬第三醫院腫瘤生物診療中心，江蘇常州 213003)

卵巢癌(ovarian cancer，OC)是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤，發病率居婦科惡性腫瘤的第三位，僅次于宮頸癌和宮體癌，但病死率卻是第一位[1]。我國宮頸癌五年生存率近60%，但晚期OC 患者五年生存率僅為39%。另外據國家癌癥中心最新發布的數據顯示，我國惡性腫瘤五年生存率已從10年前的30.9%提升到40.5%，而OC 患者五年生存率僅提高0.4%[2]。早期OC 癥狀不明顯，大部分患者確診OC 時已發展為中晚期。目前臨床開展的OC相關腫瘤標志物主要有糖類抗原125（CA125），血清人附睪蛋白4（HE4）等[3-5]，在OC 的診斷中具有一定的價值和意義，但靈敏度和特異度不高，同時在OC 的病情及治療效果評價中有一定局限性。因此，我們迫切需要發現新的OC 生物標記物。眾所周知，炎癥反應與腫瘤有著密切的關系[6]。炎癥反應通過上調炎癥促進腫瘤血管生成和抑制抗腫瘤活動，在腫瘤的增殖、侵襲和遷移中發揮重要的作用[7]。中性粒細胞/淋巴細胞比值（NLR）是一種白細胞相關的炎癥標志物，被證明與肺癌、肝癌、胃腸道癌和結直腸癌等多種腫瘤的進展和預后相關[8-11]。卵巢惡性腫瘤風險判定(risk of ovarian malignancy algorithm，ROMA)檢測是通過聯合HE4，CA125 檢測以及患者月經情況，評估術前有盆腔包塊的女性罹患OC 的風險[12]。因其靈敏度高、準確性好在臨床得到廣泛應用。本研究通過NLR 聯合血清CA125，HE4 檢測以及ROMA 比值，探討其在卵巢疾病診斷、病情評估及預后判斷中的應用價值，為臨床提供更多的診療參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年5月～2020年2月蘇州大學附屬第三人民醫院收治的OC 患者、卵巢良性疾病患者和健康體檢者。其中OC 患者58例，均經過病理診斷為OC；卵巢良性疾病患者57 例，均為子宮肌瘤患者；我院健康體檢者49例為健康對照組。同時分析研究對象的NLR 數值，所有臨床、實驗室以及病理數據均從婦科、檢驗科和病理科獲得，腫瘤分期依據國際抗癌聯盟（Unionfor International Cancer Contorl，UICC)第8 版腫瘤TNM 分期。本研究經醫院倫理委員會批準同意。

1.2 試劑與儀器 HE4 和CA125 試劑盒購自瑞士，NLR 比值(中性粒細胞計數/淋巴細胞計數)試劑盒購自日本，全自動電化學發光免疫分析儀(Roche Cobas E602，瑞士Roche 公司)，全自動血液分析儀(XN-9000日本SYSMEX 公司)，低速離心機(LC-4012，安徽中科中佳公司)，低溫冰箱(BCD-52WB，日本Panasonic 公司)。

1.3 方法

1.3.1 血清檢測:采集受試者清晨空腹靜脈血3ml，室溫(22℃～25℃) 下靜置30～60min 自發凝集，析出血清，3 000 r/min 離心10min 收集血清(排除溶血和脂血樣本)，分裝于2 個離心管中，置于-20℃或以下冰箱備檢。HE4 和CA125 采用Roche Cobas E602 全自動電化學發光免疫分析儀分析。嚴格按照儀器SOP 標準和試劑說明書分析待測標本，相同條件下測定質控樣品。試劑說明書標準參考范圍是CA125：0～35.0U/ml；HE4：絕經前0～68.96pmol/L、絕經后0～114.90pmol/L，計算ROMA 指數(卵巢癌風險預測值)：0～11.4( 絕經前)，0～29.90(絕經后)，以大于參考值上線判斷為陽性樣本。

1.3.2 全血檢測: NLR 比值(中性粒細胞計數/淋巴細胞計數) 采用日本SYSMEX XN-9000 全自動血液分析儀檢測外周血中的中性粒細胞數量和淋巴細胞數量，并計算比值。NLR 的判斷標準為：繪制ROC 曲線，取約登指數最大值時對應的NLR 值作為cut-off 值。

1.4 統計學分析 采用SPSS 23.0 和GraphPad Prism5.0 統計分析軟件進行數據分析。采用中位數及最小最大值表示計量資料，采用百分比表示計數資料。率的比較采用卡方檢驗；計量資料組間比較采用秩和檢驗。ROC 曲線確定NLR，CA125，HE4 以及ROMA 比值在OC 中的診斷效率和價值。擬合Logistic 回歸模型分析，將NLR，CA125，HE4 納入模型，生成回歸方程，并預測每個樣本的預測概率，并計算其敏感度、特異度及準確度。P<0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢組、卵巢良性疾病組和健康對照組NLR，CA125 和HE4 水平 見表1。NLR，CA125和HE4 在OC 組中的表達水平顯著高于卵巢良性疾病組和健康對照組，差異均具有統計學意義(χ2=60.22～93.23，均P<0.0001)。

表1 NLR，CA125，HE4 在卵巢組、卵巢良性疾病組和健康對照組的水平[中位數（最小值，最大值）]

2.2 NLR，CA125 和HE4 水平對卵巢癌的診斷價值比較 見圖1，表2。根據OC 患者NLR，CA125，HE4 檢測結果繪制ROC 曲線，得出各項指標的曲線下面積(AUC) 及95% 置信區間(95% CI)。不同標志物檢測診斷OC 的ROC 曲線面積結果：AUCNLR=0.828，95%CI(0.761～0.895)， AUCCA125=0.923，95%CI(0.876～0.971)， AUCHE4=0.960， 95%CI(0.929～0.990)。

表2 NLR，CA125，HE4 在卵巢癌中的診斷價值(%)

圖1 NLR，CA125，HE4 對卵巢癌診斷的ROC 曲線

NLR，HE4 和CA125 對OC 診斷截點的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值和準確度分析，其中繪制ROC 曲線取約登指數最大值對應的NLR 值2.175 作為cut-off 值，NLR>2.175 為陽性診斷標準。NLR 的敏感度最高，而HE4 的特異度和準確度最高。

2.3 NLR，CA125，HE4 表達與OC 患者病理特征的相關性 見表3。結果發現NLR 比值與OC 患者的腫瘤數量和患者年齡顯著相關(P<0.05)，與其他參數不相關(P>0.05)。血清CA125，HE4 的水平以及ROMA 比值與OC 患者的腫瘤數量、盆腔有無黏液顯著相關(P<0.01)，與年齡和腫瘤直徑不相關(P>0.05)。CA125，HE4 的表達以及ROMA 比值和NLR 比值OC 患者的TNM 分期顯著相關(P<0.01)。

表3 NLR，CA125，HE4 表達與卵巢癌相關病理參數關系[中位數（最小值，最大值）]

2.4 卵巢癌手術前后CA125，HE4，NLR 水平變化 見表4。58 例OC 患者中47 例患者有術后CA125，HE4，NLR 的結果。CA125，HE4，NLR 水平術后組均顯著低于術前組，差異均有統計學意義（P<0.05）。

表4 OC 組術前術后NLR，CA125，HE4 的水平變化[n =47，中位數（最小值，最大值）]

3 討論

卵巢癌是一種發生于卵巢表面體腔上肢和其下方卵巢間質的惡性腫瘤。其發病年齡是婦科腫瘤中最寬的，可發生在婦女一生中的任何時期，年輕化趨勢加劇，OC 的防治形勢嚴峻，因此發現和推廣好的OC 標志物具有重要的臨床價值。有研究發現，惡性腫瘤中NLR 水平明顯高于良性腫瘤組，同時多因素分析顯示NLR 與腫瘤患者的TNM 分期顯著相關[13]，提示NLR 與患者的腫瘤進展密切相關。TOKMAK A 等[14]分析了NLR 和CA125 在OC 中的表達，結果發現聯合檢測敏感度和特異度較單個指標明顯提高，提示聯合檢測可以提高OC 診斷的準確度。

腫瘤與全身性的慢性炎癥密切相關，尤其是在早期腫瘤轉移時，少量的癌細胞轉移，無法通過影像學檢查出來，但是可以通過全身性的炎癥指標來反映出來，在肺癌、膽管癌等腫瘤中得到證實[15-16]。本研究發現OC 患者血液中NLR 的水平顯著高于良性疾病組及健康對照組，同時良性疾病組中的表達與健康對照組相比差異有統計學意義。NLR 診斷OC 的敏感度高于CA125 和HE4，表明NLR 具有診斷OC 及相關疾病的價值。腫瘤發生后，人體的免疫功能下降，表現出淋巴細胞數值可能下降。另外腫瘤的出現包括少量的腫瘤細胞轉移必然導致了全身性的炎癥反應，這也會導致中性粒細胞相對升高。中性粒細胞相對升高與淋巴細胞相對下降，必然導致NLR 的升高。同時發現NLR 在OC 患者術前術后的比較中差異顯著。推測如果患者NLR 持續性升高，則意味著腫瘤在進展，術后預后較差，可以成為OC 獨立的危險預后因子。結果還顯示NLR 在OC 患者的年齡、腫瘤數量、TNM 分期中差異有統計學意義；與患者腫瘤的直徑、是否產生黏液不相關。說明腫瘤的數量和年齡影響NLR，數量越多、年齡越大，NLR 值越高。

CA125 與HE4 的表達相互獨立，兩者在OC患者中的分布具有顯著差異。本研究分析發現血清CA125 對OC 診斷的敏感度(81.0%) 高于HE4(70.7%)，但特異度低于HE4(88.7% vs 100%)，國內外多數研究與本研究結果相一致，也有研究結果不相同的[17]。HE4 和ROMA 比值對OC 的診斷特異度最高(100.0%)，診斷效率最佳，但敏感度較低。結果還發現血清CA125，HE4 的表達以及ROMA 比值在OC 中的表達顯著高于良性疾病組和健康對照組(P<0.001)。同時CA125，HE4 的表達以及ROMA比值與OC患者的腫瘤數量、TNM分期、盆腔有無黏液密切相關，與年齡和腫瘤直徑不相關，與相關文獻報道相一致[18-19]。同時在OC 患者術前術后的比較中具有更加顯著的差異。CA125 與HE4的聯合檢測，尤其是在兩項指標基礎上算出的風險預測模型(ROMA 比值)結合了兩者的優勢，具有更好的診斷效率，與NLR 在診斷OC 及OC 患者預后中具有一定的互補性。

綜上所述，NLR，血清CA125，HE4 以及ROMA比值的檢測在早期OC 患者中具有較高的診斷效率，進一步完善早期OC 的輔助診斷；同時在OC 患者病情的進展以及OC 患者臨床治療效果的評估中具有重要價值。本研究納入的樣本數量不足，結果可能存在偏差，后續進一步擴大樣本，開展更深入和更嚴謹的研究。