血漿miR-223-3p，PCT，IL-6和CRP水平聯合檢測對膿毒癥實驗診斷及預后的價值研究

王 海，肖 華，陳興壯

（1.三亞市中醫院檢驗科，海南三亞 572019；2.三亞中心醫院檢驗科，海南三亞 572000）

膿毒癥是一種嚴重威脅人類生命的急危重癥[1]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）作為一類新型的基因調控分子，參與膿毒癥的發生發展及預后[2]。近期的研究發現，miR-223-3p 參與炎癥基因調控和宿主-病原相互作用，是膿毒癥發病的關鍵，與膿毒癥器官損傷的發展有關，可能為了解膿毒癥的發病機制提供新的方向[3]。降鈣素原（procalcitonin，PCT）是一種有效反映炎癥反應程度的實驗室指標，常用于評價膿毒癥患者的嚴重程度、預后及治療效果，在指導臨床醫生使用抗生素中具有較好的應用價值[4]。白細胞介素-6（interleukin-6,IL-6）及C 反應蛋白（C-reactive protein,CRP）作為評估炎癥反應程度的常用指標，在細菌感染、組織損傷或炎癥反應時其水平顯著升高，與膿毒癥患者感染嚴重程度和器官功能障礙密切相關[5]。本研究通過檢測膿毒癥患者血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平，分析四項聯合檢測對膿毒癥診斷及預后預測的價值，以期為膿毒癥的診療提供依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月～2020年10月在三亞市中醫院和三亞中心醫院收治的146 例膿毒癥患者，其中男性87 例，女性59 例，年齡36 ～85（60.83±10.37）歲。根據146 例膿毒癥患者28 天的生存情況，將其分為101 例存活組和45 例死亡組。納入標準：①參考2012 國際嚴重膿毒癥及膿毒性休克診療指南[6]；②臨床隨訪資料完整。排除標準：①并發血液系統疾病、免疫系統疾病及惡性腫瘤者；②放棄治療，不能配合研究者。同期選取60 例體檢正常者作為對照組，其中男性37 例，女性23 例，年齡40 ～82（62.50±9.40）歲。各組年齡、性別比較差異無統計學意義（P>0.05）。本研究開展之前與患者或家屬簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 TL988-II 實時熒光定量PCR 檢測儀、PCR 試劑盒、RNeasy 試劑盒、miRNA Easy 試劑盒和Trizol 試劑盒均購自廣州銳博生物有限公司，CL-2200i 邁瑞全自動化學發光免疫分析儀，7600 型日立全自動生化分析儀。

1.3 方法

1.3.1 miR-223-3p 檢測:采集靜脈血3 ml 于EDTA抗凝管中，離心分離血漿，在ABI 7500 型熒光定量PCR 儀上檢測miR-223-3p 水平。反應體系為20μl：1μl 引物及探針Mix（20×），10μl TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μl 反向轉錄脫氧核糖核酸，7．67μl雙蒸餾水。以 U6作為miR-223-3p內參，采用2-△△Ct法計算miR-223-3p 表達水平。

1.3.2 PCT，IL-6，CRP 檢測：使用貝克曼DXI800全自動化學發光免疫分析儀，化學發光免疫分析法檢測PCT 及IL-6；使用日立7600 系列全自動生化分析儀，采用免疫透射比濁法檢測CRP。

1.4 統計學分析 采用SPSS20.0 統計軟件分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗。計數資料比較采用χ2檢驗。應用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 對膿毒癥診斷及預后預測的價值。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 膿毒癥組和對照組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平比較 見表1。膿毒癥組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（均P<0.001）。

表1 膿毒癥組和對照組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平比較（±s）

表1 膿毒癥組和對照組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平比較（±s）

項 目對照組（n=60）膿毒癥組（n=146）tP miR-223-3p 0.37±0.082.15±0.9213.805<0.001 PCT（ng/ml）0.02±0.0113.50±6.4814.620<0.001 IL-6（pg/ml）5.37±1.4574.12±15.7010.512<0.001 CRP（mg/L）3.82±1.4637.26±10.158.783<0.001

2.2 死亡組和存活組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6及CRP 水平比較 見表2。死亡組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平均明顯高于存活組，差異有統計學意義（均P<0.001）。

表2 死亡組和存活組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平比較（±s）

表2 死亡組和存活組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平比較（±s）

項目存活組（n=101）死亡組（n=45）tP miR-223-3p 1.31±0.503.04±1.1613.390 <0.001 PCT（ng/ml）6.72±3.1521.28±10.28 16.317 <0.001 IL-6（pg/ml）56.17±10.20 102.83±21.75 8.936 <0.001 CRP（mg/L）25.75±8.24 56.40±15.30 7.415 <0.001

2.3 miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 診斷膿毒癥的價值 見表3 和圖1。miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 診斷膿毒癥的曲線下面積（0.905，95%CI ：0.847～0.968）明顯高于單項miR-223-3p（0.815，95%CI：0.753～0.877），PCT（0.827，95%CI：0.766～0.885），IL-6（0.785，95%CI ：0.724～0.845）及CRP（0.760，95%CI ：0.708～0.817），差異有統計學意義（均P<0.05），其敏感度為92.0%，特異度為83.4%。

圖1 miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 診斷膿毒癥的ROC 曲線

表3 miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 診斷膿毒癥的價值

2.4 miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 預測膿毒癥患者死亡的價值 見表4 和圖2。miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 預測膿毒癥患者死亡的曲線下面積（0.933，95%CI：0.875～0.990）明顯高于單項miR-223-3p（0.850，95%CI ：0.788～0.911），PCT（0.836，95%CI：0.778～0.895），IL-6（0.794，95%CI ：0.734～0.856）及CRP（0.782，95%CI：0.720～0.843），差異均有統計學意義（均P<0.05），其敏感度為95.3%，特異度為87.5%。

表4 miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 預測膿毒癥患者死亡的價值

圖2 miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 預測膿毒癥患者死亡的ROC 曲線

3 討論

miRNA 作為一類非編碼RNA 分子，參與了膿毒癥后期的細胞凋亡、免疫抑制和器官功能障礙，可能在膿毒癥診斷和預后方面起重要的作用[7]。有研究表明，miRNA 在膿毒癥相關性炎癥反應以及器官損傷過程中發揮重要的調控作用，其表達水平變化與膿毒癥病程發展有關，監測分析miRNA 水平可以輔助診斷膿毒癥和判斷疾病預后[8]。BENZ等[9]研究發現，miR-223-3p 作為miRNA 的一類新型基因調控分子，不僅參與多種疾病的發生發展，而且與膿毒癥的炎癥反應密切相關。PCT 是降鈣素的前肽物質，是預測膿毒癥患者死亡率和感染性休克的良好指標[10]。IL-6作為一種促炎性反應因子，可通過介導多種免疫細胞參與膿毒癥早期的炎癥反應過程，有助于膿毒癥的早期診斷[11]。CRP 是一種急性時相反應蛋白，是反映細菌感染較為敏感的指標，對評估膿毒癥患者的病情發展有一定的意義[12]。

本研究結果顯示，膿毒癥組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平均明顯高于對照組，死亡組血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平均明顯高于存活組，說明miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP水平在膿毒癥患者中明顯升高，死亡患者引起的炎癥反應無法得到有效地控制，血漿miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP 水平顯著升高；而存活患者的感染得到有效地控制，循環、呼吸等臟器功能逐漸穩定，其水平下降。分析其原因可能是死亡患者炎癥反應較嚴重，引起大量炎癥因子釋放，造成免疫功能嚴重紊亂，使得miR-223-3p，PCT，IL-6 及CRP水平于治療后仍繼續升高。提示血漿miR-223-3p表達水平呈明顯升高的膿毒癥患者，病情較為嚴重，臨床上需及時采取有效的治療措施，以降低患者死亡率。ZHAO 等[13]研究發現，膿毒癥患者miRNA表達水平明顯升高，而且與疾病嚴重程度、器官功能損害及病死率明顯相關，可以作為評估膿毒癥患者病情嚴重程度和預后的一個有用的生物學指標。另有研究表明，作為膿毒癥診斷的常用指標，與IL-6 及CRP 聯合檢測能夠顯著提高膿毒癥的診斷和預后評估水平，對膿毒癥病情嚴重程度及預后判斷具有重要價值[5]。

本研究應用ROC 曲線分析顯示，miR-223-3p對膿毒癥診斷及預后預測的曲線下面積與PCT 相當，其敏感度和特異度均高于IL-6 或CRP，miR-223-3p 聯合PCT，IL-6 及CRP 對膿毒癥診斷及預測死亡的AUC 最大，其敏感度和特異度較高；而單獨檢測IL-6 或CRP 對膿毒癥診斷及預后預測的特異度較低，其應用價值有限。提示miR-223-3p對膿毒癥診斷及預后預測具有較好的價值，聯合PCT，IL-6 及CRP 檢測可彌補單項檢測的不足，能有助于提高膿毒癥診斷和預后預測的敏感度和特異度。ZHANG 等[14]研究發現，與對照組比較，膿毒癥患者miR-223-3p 表達水平明顯升高，其對膿毒癥診斷的敏感度和特異度分別為82.9%和100%，有望作為膿毒癥診斷的分子標志物，也為膿毒癥基因水平治療提供新的思路。本研究中膿毒癥患者血漿miR-223-3p 表達水平與PCT，IL-6 及CRP 均呈正相關，進一步提示了miR-223-3p 聯合PCT，IL-6及CRP 可更好地預測膿毒癥患者的預后及診斷。桑珍珍等[15]研究表明，miRNA 表達水平在膿毒癥患者中明顯升高，對膿毒癥患者的預后評估具有一定的臨床價值，聯合PCT 檢測對評估膿毒癥預后具有較高的敏感度和特異度。

綜上所述，膿毒癥患者血漿miR-223-3p 表達水平明顯升高，聯合PCT，IL-6 及CRP 檢測對膿毒癥的診斷及預后預測具有良好的價值，可能為膿毒癥的基因靶向治療提供了新的研究方向。