微粉化技術對功能性食品藜麥的顯微特征和總黃酮溶出量影響的研究

張 璐

（山西省醫藥與生命科學研究院，山西 太原030006）

藜麥是雙子葉藜科藜屬一年生的超級谷物，原產于南美洲，現今中國山西、河北、甘肅等地已有種植，是一種低升糖、低熱量、高蛋白、活性物質豐富的功能性食品，適用于老年人、兒童、孕產婦、糖尿病患者、腸胃病患者尤其是乳糜瀉患者等不同人群食用。聯合國國際糧農組織（FAO）確認單體植物中唯一能滿足人體基本營養需求的藜麥是最適合人類的全營養食品，具有“營養黃金”“糧食之母”“素食之王”等之稱［1-3］。

藜麥中的營養成分：蛋白質含量在15%左右，且不含麩蛋白；氨基酸含量豐富，尤其是人體的8種必需氨基酸和嬰幼兒必需的組氨酸，比例平衡，易消化［4］；脂肪酸多為不飽和脂肪酸，具有降低低密度脂蛋白、升高高密度脂蛋白的作用；富含膳食纖維、礦物質元素和維生素。藜麥具有補充均衡營養、調節機體免疫力和內分泌、增強機體功能、預防肥胖、心血管疾病和癌癥等功效。藜麥中含有黃酮類化合物，含量范圍是（36.2±0.3）~（72.6±5.3）mg/100 g［5］。黃酮類化合物具有降血壓血脂、抗病毒、抗癌防癌和抗氧化等多種藥理作用。

超微粉碎技術是將粒徑為3 mm以上的物料粉碎至粒徑為10～25 μm以下的微細顆粒過程［6］，可以使細胞破壁率達到95%以上，從而提高了有效成分的溶出和釋放。用超微粉技術對功能性食品進行處理，可以使功能因子從中分離、提取，最大限度地保留活性，提高穩定性，使得超微粉具有優良的營養、功能性，可以簡化提取工藝，降低成本；改善口感和促進營養物質的吸收；可以配置和深加工各種藜麥功能性食品，如營養代餐粉、制作面包等［7-9］。本研究旨在探索微粒化技術對功能性食品藜麥的顯微特征和總黃酮溶出量的影響。

1 藥物與方法

1.1 材料與試劑

藜麥米（批號：20200826），山西綠色山區農副產品銷售有限公司提供；蘆丁對照品（批號：100080-201811，純度：≥98%），中國食品藥品檢定研究院；無水甲醇、硝酸鋁，天津市天力化學試劑有限公司；氫氧化鈉、亞硝酸鈉，天津市風船化學試劑科技有限公司；甘油，南昌白云藥業有限公司；水合氯醛，天津市科密歐化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

WGL-230B型電熱鼓風干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司；FW135型中草藥粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；WZJ-100型藥物超微粉碎機，濟南倍力粉體工程有限公司；BH-2型生物顯微鏡，日本奧林巴斯光學工業株式會社；UV757CRT型紫外可見分光光度計，上海精科電子有限公司；XB4200C型電子天平，瑞士普利賽斯；KQ-250B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 藜麥超微粉與普通粉的制備 藜麥普通粉：將藜麥米洗凈，浸泡1 h，蒸30 min，放置于電熱鼓風干燥箱中，溫度為60℃，干燥至恒重，烘干后轉入中草藥粉碎機中粉碎，過160目篩，得到藜麥普通粉。藜麥超微粉：烘干后的藜麥米粉碎，過80目篩得粗粉，將藜麥粗粉置于振動式藥物超微粉碎機中，粉碎10 min，過300目篩，得到藜麥超微粉。

1.3.2 藜麥超微粉與普通粉顯微觀察 將少量藜麥超微粉與普通粉分別置于載玻片上，滴加幾滴水合氯醛，加熱透化，用稀甘油固定后，在顯微鏡下觀察細胞，二者進行比較。

1.3.3 藜麥超微粉與普通粉總黃酮溶出量的測定

1.3.3 .1 所用溶劑的配制5%亞硝酸鈉溶液：用100 mL的蒸餾水將5 g的亞硝酸鈉溶解并定容于100 mL容量瓶中。10%硝酸鋁溶液：用100 mL的蒸餾水將10 g的硝酸鋁溶解并定容于100 mL容量瓶中。4%氫氧化鈉溶液：用100 mL的蒸餾水將4 g的氫氧化鈉溶解并定容于100 mL容量瓶中。

1.3.3 .2 蘆丁標準品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品0.0100 g，用無水甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，搖勻，得0.2000 mg/mL蘆丁標準品溶液。

1.3.3 .3 供試品溶液的制備 藜麥超微粉：精密稱取藜麥超微粉10.00 g，平行稱取3份，分別置于3個50 mL具塞三角瓶中，精密量取加無水甲醇50 mL，稱定質量，超聲提取30 min，補足失重，過濾，取續濾液，即得。藜麥普通粉：精密稱取藜麥普通粉10.00 g，平行稱取3份，分別置于3個50 mL具塞三角瓶中，精密量取加無水甲醇50 mL，稱定質量，超聲提取30 min，補足失重，過濾，取續濾液，即得。

1.3.3 .4 最大吸收波長的測定 精密量取4 mL蘆丁標準品溶液，于25 mL容量瓶中，加無水甲醇至6 mL，加5 %亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4 %氫氧化鈉10 mL，用無水甲醇定容，搖勻，放置15 min后，用紫外可見分光光度計在300～700 nm波長范圍內掃描，測定最大吸收波長為500 nm。

1.3.3 .5 總黃酮溶出量的測定 精密量取供試品溶液2 mL，于25 mL容量瓶中，加無水甲醇至6 mL，按1.3.3.4操作步驟進行操作，在500 nm波長下測吸光度，通過回歸方程計算25 mL供試品溶液的濃度。

2 結果

2.1 藜麥超微粉與普通粉顯微觀察

通過顯微觀察發現，藜麥超微粉與普通粉用同等放大倍數顯微鏡觀察有明顯差異。超微粉中細胞大多散在且破壁，甚至破碎，普通粉中可見完整組織細胞或散在的完整細胞。結果見圖1。

圖1 藜麥超微粉與普通粉顯微觀察

2.2 藜麥超微粉和普通粉總黃酮溶出量的測定

2.2.1 蘆丁標準曲線的繪制 精密量取0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL蘆丁標準品溶液，分別置于25 mL容量瓶中，加無水甲醇至6 mL，按照1.3.3.4操作步驟進行操作，放置15 min后，以第1份溶液為空白試劑，在500 nm下測吸光度，計算回歸方程。結果蘆丁標準曲線的線性回歸方程為：A=11.625C-0.0001（R=0.9998）。結果表明，在測定濃度范圍內線性關系良好。

2.2.2 方法學考察 精密度試驗：精密量取蘆丁對照品溶液2 mL，置于25 mL容量瓶中，按1.3.3.5操作步驟進行操作，共6份，分別在500nm處測吸光度，求RSD。結果見表1。結果表明，該儀器的精密度良好。

表1 精密度試驗

重復性試驗：精密稱取藜麥超微粉10 g，共6份，按照1.3.3.3操作制備供試品溶液，精密量取供試品溶液2 mL，置于25 mL容量瓶中，按1.3.3.5操作步驟進行操作，分別在500 nm處測吸光度，求RSD。結果見表2。結果表明，該試驗重復性較好。

表2 重復性試驗

穩定性試驗：精密量取重復性試驗中的3號供試品溶液2 mL，置于25 mL容量瓶中，按1.3.3.5操作步驟進行操作，每隔20 min在500 nm處測定1次吸光度，測定2 h，求RSD。結果見表3。結果表明，供試品溶液在2 h內穩定。

表3 穩定性試驗

2.2.3 藜麥超微粉總黃酮溶出量 取藜麥超微粉適量，按1.3.3.5操作步驟進行操作，放置15 min后，在500 nm波長下測吸光度，通過回歸方程計算25 mL供試品溶液的濃度。計算樣品中總黃酮的含量，結果見表4。

表4 藜麥超微粉總黃酮溶出量的測定

2.2.4 藜麥普通粉總黃酮溶出量 取藜麥普通粉適量，按1.3.3.5操作步驟進行操作，放置15 min后，在500 nm波長下測吸光度，通過回歸方程計算25 mL供試品溶液的濃度。計算樣品中總黃酮的含量，結果見表5。

表5 藜麥普通粉總黃酮溶出量的測定

2.2.5 藜麥超微粉與普通粉總黃酮溶出量方差分析比較上述藜麥超微粉和普通粉樣品中總黃酮的含量，通過方差分析，分析藜麥超微粉與普通粉兩組是否存在統計學意義，結果見表6、表7。結果表明，總黃酮溶出量藜麥超微粉比普通粉提高了48.62%，二者差異有統計學意義。

表6 總黃酮含量比較表 （mg/100 g）

表7 方差分析表

3 討論

顯微特征和總黃酮溶出量結果表明，藜麥經超微粉碎后，破壁細胞量增大，總黃酮溶出量提高了48.62 %。超微粉的總黃酮溶出量大于普通粉是因為藜麥中的大多數營養成分、功能因子存在于細胞中，經過超微粉碎后，粒度均勻細密，細胞破壁率達到95 %以上，有效成分沒有細胞壁、細胞膜的阻礙，增加了藥材的比表面積，有利于藥物有效成分的溶出，因此超微粉有效成分的溶出量較大［10］。現代研究表明，超微粉碎可以提高多種中藥有效成分的溶出率［11-12］。本研究表明超微粉碎技術對藜麥粉末顯微特征有顯著影響，而且可以提高功能性食品藜麥有效成分的溶出。