維持性血液透析患者骨硬化蛋白、Klotho蛋白水平變化及與冠狀動脈鈣化相關性分析

張 媛，朱小靜

(西安市人民醫院 西安市第四醫院腎內科血液凈化中心，陜西 西安 710004)

維持性血液透析(Maintenance hemodialysis，MHD)為終末期腎病患者的常用治療方法，雖然能夠明顯延長患者生存時間，但是大多數MHD患者由于腎功能損害等因素導致冠狀動脈鈣化，使患者心血管不良事件發生風險明顯增加，嚴重威脅患者預后[1]。臨床中對冠狀動脈鈣化的診斷主要通過CT等影像學方法進行，但是在早期診斷中的效果不佳。研究發現，部分血清學標志物在冠狀動脈鈣化的診斷中可優先于影像學改變[2]。其中骨硬化蛋白(Sclerostin,SCL)屬于分泌型糖蛋白，研究發現，其可通過對Wnt/β通路的抑制作用參與至冠狀動脈鈣化的進展過程中[3]。Klotho蛋白主要由腎臟表達，研究發現，Klotho蛋白能夠通過減輕機體炎癥和氧化應激反應，達到對心血管系統的保護功能[4]。但是目前關于SCL和Klotho蛋白在MHD中的研究多集中于鈣磷代謝、骨異常等方面，與冠狀動脈鈣化的相關性研究較少[5]。因此，本研究納入西安市第四醫院血透中心收治的MHD180例，對此進行了分析,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2017年6月至2020年5月西安市第四醫院血透中心收治的MHD患者180例，其中男104例，女76例，年齡28～76歲，平均(54.32±13.41)歲，原發病中，糖尿病腎病49例，腎小球腎炎76例，高血壓腎病39例，其他16例，透析時間6個月至6年，平均(3.37±1.12)年。MHD患者的透析方案為使用聚砜膜透析器、碳酸氫鹽透析液進行，使用動靜脈內瘺作為血管通路，透析參數：透析血流量240 ml/min，透析流量為500 ml/min，透析面積1.5～1.8 m2，4 h/次，3次/周。所有患者均知情同意，本研究經審查符合赫爾辛基宣言。病例納入標準：在我院規律透析，透析時間≥6個月；病情穩定；資料完整。排除標準：合并心肌梗死等心臟疾病；自身免疫性疾病；冠脈支架植入術史；左心室射血分數(LVEF)<50%；合并感染者；低蛋白血癥；近期使用免疫抑制劑；近期骨折者；合并惡性腫瘤；嚴重營養不良；合并腹膜透析者。

1.2 冠脈動脈鈣化檢測方法 所有患者均使用德國西門子16排螺旋CT，由同一位經驗豐富的醫師進行冠狀動脈鈣化檢查。層厚3.0 mm，掃描電流為80 mA，掃描部位包括右冠狀動脈、左回旋、前降支以及左主干。記錄三組患者的冠狀動脈鈣化積分(CACs)，其中無鈣化為≤10分，11～400分為輕中度鈣化，≥400分為重度鈣化[6]。

1.3 觀察指標 ①不同冠狀動脈鈣化程度患者的臨床資料：根據患者CACs情況進行分組，分為無鈣化組、輕中度鈣化組和重度鈣化組。收集三組患者的一般資料，包括年齡、性別、體重指數(BMI)、原發病、糖尿病、高血壓、透析時間等。采集患者空腹靜脈血5 ml，離心后取血清，使用酶聯免疫吸附法(ELISA)對三組患者血清SCL、Klotho蛋白以及骨源性堿性磷酸酶(BALP)水平進行測定，試劑盒均購買自上海雙贏生物科技有限公司，使用日本日立7600-020全自動生化分析儀對三組鈣、磷、甲狀旁腺激素(PTH)、白蛋白(Alb)、25羥維生素D3水平進行測定，使用美國貝克曼庫爾特DxH800全自動血液分析儀對血紅蛋白(Hb)水平進行測定。比較三組的SCL、Klotho蛋白、BALP、鈣、磷、PTH、Alb、25羥維生素D3水平。②MHD患者發生冠狀動脈鈣化的危險因素分析：以冠狀動脈鈣化為因變量，使用二元Logistic回歸對影響MHD患者發生冠狀動脈鈣化的危險因素進行分析。③SCL、Klotho蛋白對MHD患者冠狀動脈鈣化的診斷價值：使用受試者工作曲線(ROC)分析SCL、Klotho蛋白在MHD患者冠狀動脈鈣化診斷中的應用價值，記錄曲線下面積(AUC)、截斷值、靈敏度和特異度。

2 結 果

2.1 不同冠狀動脈鈣化程度患者的臨床資料和血清學指標比較 三組之間性別、BMI、原發病、透析時間、高血壓、BALP、鈣、磷、Hb、PTH和Alb水平比較，差異無統計學意義(均P>0.05)。三組之間年齡、糖尿病、SCL、Klotho蛋白以及25羥維生素D3水平比較，差異具有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 不同冠狀動脈鈣化程度患者的臨床資料和血清學指標比較

2.2 MHD患者發生冠狀動脈鈣化的危險因素分析 以冠狀動脈鈣化為因變量，將可能影響冠狀動脈鈣化的單因素納入二元Logistic回歸分析中，賦值方法如下：年齡≥60歲(是=1，否=0)、糖尿病(是=1，否=0)，SCL、Klotho蛋白以及25羥維生素D3均以實際檢測值納入分析。結果發現，年齡≥60歲、SCL為MHD患者發生冠狀動脈鈣化的危險因素，Klotho蛋白為MHD患者發生冠狀動脈鈣化的保護性因素。見表2。

表2 MHD患者發生冠狀動脈鈣化的危險因素分析

2.3 SCL、Klotho蛋白對MHD患者冠狀動脈鈣化的診斷價值分析 ROC曲線結果表明，SCL對MHD患者冠狀動脈鈣化診斷下，AUC為0.711，截斷值為42.19 ng/L，診斷敏感度為61.50%，特異度為75.56%。Klotho蛋白對MHD患者冠狀動脈鈣化診斷下，AUC為0.802，截斷值為416.95 ng/L，診斷敏感度為82.20%，特異度為62.96%。見表3。

表3 SCL、Klotho蛋白對MHD患者冠狀動脈鈣化的診斷價值分析

3 討 論

心血管疾病為MHD患者預后不良的主要危險因素，其中冠狀動脈鈣化可明顯促進心血管疾病的進展[7]。研究發現，MHD患者長期腎功能損害、炎癥反應、機體鈣磷和骨代謝紊亂等情況，均可促使血管平滑肌細胞的骨樣轉化，進而明顯提高冠狀動脈鈣化的發生風險[8]。調查顯示，MHD患者中約70%合并發生冠狀動脈鈣化[9]。通過尋找新型血清學標志物，有利于對MHD患者的早期干預，以降低冠脈血管鈣化的發生率，并為患者預后的改善提供有效依據[10]。

SCL是經SOST基因表達后產生的蛋白，一般認為其主要通過抑制Wnt-β通路，進而達到對骨形成、骨細胞增殖等生理過程的負性調控[11]。然而近年來的研究發現，SCL不僅可在骨骼中表達，還可在鈣化的冠狀動脈平滑肌細胞中表達，提示其可能參與冠狀動脈鈣化進展[12]。有研究認為，SCL和慢性腎臟病患者不良心血管事件發生率明顯相關[13]。本研究發現，隨著SCL水平的提高，MHD患者發生冠狀動脈鈣化的風險明顯提高，為MHD患者冠狀動脈鈣化發生的獨立危險因素，且SCL可應用于MHD患者冠狀動脈鈣化的診斷中。然而不同研究中關于SCL與MHD患者冠狀動脈鈣化的影響機制研究結果并不一致，有研究認為高水平SCL為MHD患者冠狀動脈鈣化發生的保護性因素，其認為冠狀動脈鈣化嚴重程度的提高，SCL的表達隨之增加，可對血管平滑肌細胞的骨樣轉化產生抑制效果，進而減緩了血管鈣化的進展[14]。關于SCL和MHD患者冠狀動脈鈣化的相關性及發生機制仍需擴大樣本，進行更為深入的研究。

目前認為，MHD患者中，Klotho蛋白可參與成纖維細胞生長因子(FGF)受體的激活，通過對離子通道及信號調節激酶1/2等的調控，達到改善血磷代謝和骨代謝的目的，進而參與至冠狀動脈鈣化的進展中[15-16]。本研究發現，隨著Klotho蛋白水平的下降，MHD患者發生冠狀動脈鈣化的風險越高，且Klotho蛋白可應用于MHD患者冠狀動脈鈣化的診斷中，這可能是由于低水平的Klotho蛋白可導致血管內皮細胞功能障礙，以及一氧化氮(NO)水平的降低，進而促使血管平滑肌細胞增殖以及血管內皮損傷，增加冠狀動脈鈣化的風險[17]。目前關于Klotho蛋白與MHD患者冠狀動脈鈣化發生機理之間的關系尚未完全明確。研究發現，Klotho蛋白可通過血紅素加氧酶、特異性轉錄因子等機制，降低活性氧簇，減少機體氧化應激反應，進而達到對血管平滑肌的保護效果[18]。有研究發現，Klotho蛋白能夠通過降低核苷三磷酸酶的活性，使細胞對磷的吸收減少，進而使血管鈣化得到有效改善[19]。也有研究認為，Klotho可通過拮抗TRPC6、TRPV5路徑，調節細胞內鈣的水平，進而對心肌產生保護效果，減少心室肥厚的發生風險[20]。關于Klotho蛋白在MHD患者冠狀動脈鈣化中的作用機制仍需進一步研究。

綜上所述， SCL、Klotho蛋白水平均與MHD患者冠狀動脈鈣化密切相關，且SCL、Klotho蛋白水平對MHD患者冠狀動脈鈣化具有較好的診斷價值。臨床中可據此為MHD患者冠狀動脈鈣化的早期診斷及干預制定相關措施，以降低MHD患者心血管不良事件的發生風險。