QuEChERS凈化氣相色譜法測定調(diào)味品中的防腐劑

楊李勝，劉志鵬*，黃敏興，鄒夢(mèng)嬡，余構(gòu)彬

廣東省科學(xué)院生物工程研究所（廣州 510316）

對(duì)羥基苯甲酸酯類（即尼泊金酯類），呈現(xiàn)白色，有點(diǎn)澀味，狀態(tài)是結(jié)晶粉末狀，可溶于氫氧化鈉溶液及有機(jī)溶劑，但難溶于水。對(duì)羥基苯甲酸酯類是世界上用量很大的一類防腐劑，因其具有良好的殺菌能力和穩(wěn)定性，被廣泛應(yīng)用在食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域，在食品中主要作為醬油、醋、果醬及果汁等產(chǎn)品的防腐劑[1-4]。國家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)醋、醬油等調(diào)味品中對(duì)羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽最大的使用量做出規(guī)定，均為0.25 g/kg（用對(duì)羥基苯甲酸計(jì)算）[5-6]。

應(yīng)用于食品中對(duì)羥苯甲酸酯類檢測的色譜方法主要有3種，分別是氣相色譜（GC）法[7-10]、液相色譜（PLC）法[11-14]、毛細(xì)管電泳色譜（CEC）法[15]。其中，氣相色譜法具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、定量準(zhǔn)確、使用成本低、能夠多種物質(zhì)同時(shí)檢測等優(yōu)點(diǎn)，在食品檢測廣泛應(yīng)用。國家標(biāo)準(zhǔn)方法使用的萃取劑有三氯甲烷、四氯甲烷、二氯乙烯、乙腈、乙醚等有毒有害試劑，優(yōu)化氣相色譜（GC-FID）測定食品中對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的方法，采用乙酸乙酯作為萃取劑，濃縮近干后用無水乙醇溶解通過QuEChERS凈化，用氣相色譜儀（FID）檢測，實(shí)現(xiàn)調(diào)味品等復(fù)雜基質(zhì)中對(duì)羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽的同時(shí)提取和測定。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑

7890B氣相色譜儀（配FID檢測器）、HP-5石英毛細(xì)管柱（30 m×0.530 mm×1.0 μm）（美國安捷倫公司）；渦旋振蕩器（德國IKA公司）；CL5R臺(tái)式高速離心機(jī)（湖南湘儀公司）；氮吹儀（美國Organomation）；電子天平（感量0.1 mg和0.01 g，德國梅特勒公司）。

對(duì)羥基苯甲酸甲酯（純度99.73%）、對(duì)羥基苯甲酸乙酯（純度99.02%）、對(duì)羥基苯甲酸丙酯（純度98.70%）、對(duì)羥基苯甲酸丁酯（純度99.90%）（德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）；乙腈、乙酸乙酯（美國BCR公司）；無水乙醇、鹽酸（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；QuEChERS凈化管（內(nèi)含100 mg PSA、100 mg C18E、300 mg MgSO4，月旭科技公司）；醬油和醋樣品（市售）。

2 方法與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.1 g（精確至0.000 1 g）對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用無水乙醇溶解后移入100 mL容量瓶中，定容搖勻，4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量濃度均為1.0 mg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液，于4 ℃可保存1個(gè)月，臨用前用無水乙醇逐級(jí)稀釋至所需濃度。

2.2 色譜條件

進(jìn)樣量2 μL、分流比10∶1、色譜柱流量2.0 mL/min。升溫程序：100 ℃（保持1 min），以20 ℃/min升溫到170 ℃（保持0 min），以12 ℃/min升溫到220℃（保持1 min），以10 ℃/min升溫到250 ℃（保持2 min），程序升溫總時(shí)間15 min，進(jìn)樣口溫度250 ℃，檢測器溫度260 ℃。4種對(duì)羥基苯甲酸酯分離效果色譜圖見圖1。

圖1 對(duì)羥基苯甲酸酯類分離效果色譜圖

2.3 樣品前處理

提取：稱取5 g（精確至0.001 g）混勻后樣品于50 mL離心管中，加入1 mL鹽酸（1∶1）混勻酸化，加入15 mL乙酸乙酯，超聲提取10 min，劇烈振蕩2 min，加入2 g氯化鈉，振蕩1 min，以5 000 r/min離心5 min，移取上面有機(jī)層于旋蒸瓶中，加入15 mL乙酸乙酯提取1次，合并2次提取液，于40 ℃旋蒸近干，用無水乙醇溶解，并定容至5 mL。

凈化：將5 mL濃縮液轉(zhuǎn)移至15 mL凈化管中（內(nèi)含100 mg PSA、100 mg C18E、300 mg MgSO4），渦旋1 min，以5 000 r/min離心5 min，吸取上清液于1 mL進(jìn)樣瓶中，用帶（FID）氣相色譜儀按1.2.1的色譜條件測定。

2.4 試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線以及檢出限

準(zhǔn)確移取20，100，500，1 000和2 000 μL標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液于5個(gè)10 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度2，10，50，100和200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，在1.2.2的色譜條件下，以被測物峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（X，mg/L）作為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限見表1。kg，定量限為1.2~1.5 mg/kg。

表1 對(duì)羥基苯甲酸酯類的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限

2.5 試驗(yàn)方法的精密度和回收率測定

分別稱取5.00 g醬油樣品，按低、中、高3個(gè)不同濃度的加標(biāo)平行試驗(yàn)，測定方法的加標(biāo)回收率和精密度。在樣品中分別按5，15和50 mg/kg 3個(gè)濃度添加對(duì)羥基苯甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)液，同時(shí)測定空白樣品，且每個(gè)濃度做6次平行試驗(yàn)。結(jié)果如表2所示。

表2 4種對(duì)羥基苯甲酸酯在醬油樣品上的回收率試驗(yàn)

2.6 不同萃取劑的萃取效果圖

通過對(duì)樣品提取液QuEChERS凈化前后效果對(duì)比，可見樣品凈化前色譜圖（圖2）雜峰較多，對(duì)樣品提取液QuEChERS凈化能有效去除樣品中雜質(zhì)的干擾（見圖3）。

圖2 樣品凈化前

圖3 樣品凈化后

3 結(jié)論

試驗(yàn)采用乙酸乙酯為萃取溶劑，通過QuEChERS凈化，能有效消除樣品中色素和氨基酸等雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物的干擾，并優(yōu)化氣相色譜法同時(shí)測定液體調(diào)味品中4種對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑的色譜條件。結(jié)果表明，試驗(yàn)方法是一種重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度和靈敏度高且萃取完全的檢測對(duì)羥基苯甲酸酯類在調(diào)味品中含量的方法，可以滿足日常檢測的要求。