2014-2020年上海市青浦區HIV抗體篩查和確證試驗結果分析

徐秋芳,范 妤,張亞軍,張相猛, 盧曉蕓, 施怡茹,徐瑞芳,潘俊鋒,趙錦江

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染引起，主要通過性接觸、輸血、血制品以及母嬰垂直傳播感染的綜合性疾患，是當前全球公共衛生面臨的最重要威脅之一[[1-2]。根據中國疾病預防控制中心性病艾滋病防治中心的數據，近年來，我國HIV感染者正在以每年1萬左右的速度加速增長。早發現、早診斷、早治療能有效遏制艾滋病相關疾病發病率、延長生存期和防止艾滋病病毒傳播[3]，根據聯合國艾滋病規劃署提出的“2030年終結艾滋病的流行”[4]的目標，HIV的早期檢測是艾滋病防治工作的重要組成部分。本次通過對HIV抗體篩查與確證試驗結果的分析，初步探討HIV抗體篩查方法選擇與確證試驗間的關系，了解轄區內HIV感染狀況及檢測工作質量，為我區HIV檢測質量控制和防治提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集2014年1月至2020年12月轄區內醫療機構(篩查實驗室和快檢點)送檢的HIV抗體篩查有反應標本，以及經本中心實驗室(篩查中心實驗室)篩查和復檢為有反應的自愿咨詢(VCT)標本和監管場所標本，共計1 374份。

1.2 篩查復檢方法 標本采用四代ELISA法、三/四代化學發光法、膠體硒法進行初篩。轄區內篩查實驗室多采用化學發光法+膠體硒法復檢，快檢點采用膠體硒法雙孔或兩種試劑復檢，本實驗室采用ELISA法+膠體硒法復檢或膠體硒法雙孔或兩種試劑復檢。

1.3 確證試驗方法 篩查復檢試驗均呈有反應或一無一有反應的標本均采用Western Blot(WB)進行確證試驗。采用新加坡MP生物醫學亞太私人有限公司或IMT上海英旻泰生物技術有限公司生產的HIV 1+2型抗體免疫印跡試劑盒，試驗所用試劑均由合格代理商購買，在有效期內使用，確證結果按照《全國艾滋病檢測技術規范(2009年、2015年和2020年修訂版)》和試劑盒說明書進行判定。

2 結 果

2.1 總體情況 1 374份復檢有反應標本經過免疫印跡法進行確證后，1 156份(84.13%)為HIV-1抗體陽性；陰性為148份(10.77%)，不確定為70份(5.10%)；確證陽性病例主要集中在16～40歲，占70.76%；51～78歲占17.56%，男性∶女性為36.3∶1，其中羈押人員男性∶女性為820∶1；HIV確證陽性樣本來源分布(表1)：除羈押人員外，以醫療機構門診所占比例最高，占15.65%(215/1 374)，其次為VCT門診，孕產期檢查來源最低，僅為0.44%(6/1 374)，但HIV感染者發現途徑以VCT門診為主，醫療機構門診其次；2014年至2020年各年份HIV抗體復檢有反應標本確證陽性率呈下降趨勢，陰性率呈上升趨勢，差異有統計學意義(χ2=31.131，P=0.002)。表2顯示中心實驗室篩查有反應標本確證陽性率每年都高于92%，醫療機構篩查有反應標本確證陰性率最高達50.0%。

表1 不同來源標本HIV抗體確證結果[n(%)]Tab.1 Confirmation results of HIV antibodies in samples from different sources [n(%)]

表2 2014-2020年間不同送檢機構的標本確證結果[n(%)]Tab.2 Confirmation results of HIV antibodies in samples from different institutions between 2014-2020 [n(%)]

2.2 篩查復檢情況 ELISA法：篩查有反應但確證陰性標本的S/CO比值為(2.78±2.01)，篩查有反應但確證陽性標本的S/CO值為(11.45±2.49)，二者差異有統計學意義(t=16.534,P=0.000),篩查有反應但確證不確定標本的S/CO值為(5.15±3.55)。化學發光法：篩查有反應但確證陰性標本的S/CO值為(2.69±2.85)，篩查有反應但確證陽性的標本S/CO值為(313.29±481.59)，二者差異有統計學意義(t=10.856,P=0.000)，篩查有反應但確證不確定標本的S/CO值為(22.63±67.56)。

2.3 篩查復核結果與確證試驗之間關系 單一ELISA法復核有反應確證陽性率為93.72%，單一膠體硒法復核有反應的確證陽性率為85.04%，單一化學發光法復檢有反應的確證陽性率為30.05%， ELISA法和膠體硒法復檢均有反應的確證陽性率為95.12%，膠體硒法雙孔或兩種試劑復檢均有反應的確證陽性率為90.45%，膠體硒法和化學發光法復核均有反應的確證陽性率為78.08%，而化學發光法雙孔或兩種試劑復檢均有反應的確證陽性率僅為1.41%，見表3。

表3 2種復檢結果與確證試驗之間關系[n(%)]Tab.3 Relationship between two types of retest results and confirmatory tests [n(%)]

2.4 確證條帶分布情況 1 156份確證陽性樣本中，gp160出現頻率為100%；70份不確定樣本中，p24和gp160出現頻率分別為62.86%和52.86%(表4)。表5顯示，確證條帶含有2條及以上的樣本為28份，其中13份進展為陽性，占46.43%，同時含有gp160和p24條帶的有16份，10份(62.50%)進展為陽性；隨訪38份不確定病例，17份轉陽，均為男性，ELISA 篩查標本的S/CO比值均值為8.30；16例隨訪無進展，化學發光法篩查標本的S/CO比值均值為4.70；其余病例失訪或轉其他途徑進一步診治。確證陰性病例中有11例多次送檢，其中1例結合流行病學史和化學發光法復檢S/CO比值為172，隨訪轉為陽性全條帶。其余10例病例，因就診其他科室進行檢測，復檢采用化學發光法且有反應，9例確證均為陰性，1例出現p24條帶轉不確定后失訪。

表4 1 156份確證陽性和不確定樣本條帶分布情況[n(%)]Tab.4 Band distribution of 1 156 confirmed positive and uncertain samples [n(%)]

表5 不確定樣本條帶分布情況和隨訪結果Tab.5 Band distribution and follow-up results of uncertain samples

3 討 論

HIV抗體檢測是診斷HIV感染的常規方法，而免印跡試驗是 HIV 抗體確證試驗中最常用的檢測方法之一[5]。隨著篩查實驗室和檢測點的增加以及擴大檢測策略的推行，青浦區醫療機構的實驗室數量和上送標本數量明顯增加，但抗體篩查有反應標本確證陽性率逐年下降，結果顯示醫療機構篩查有反應病例確證陰性率高達50.0%。推測醫療機構初篩和復檢以化學發光法為主有關，本次調查發現膠體硒法和化學發光法復檢均有反應標本的確證陽性率為78.08%，低于單一膠體硒法，化學發光法雙孔或兩種試劑復檢均有反應標本的確證陽性率僅為1.41%，提示化學發光法不適合作為復檢方法，尤其在醫療機構診療過程中篩查出有反應標本，從復檢再到送上級機構最終確證檢測至少需要5 d時間，對患者造成嚴重心理負擔。湯琰等[6]研究表明，敏感性與特異性均達到100%的ELISA法與兩種快檢聯合運用可替代WB確證，結果顯示ELISA法和膠體硒法復核均有反應標本的確證陽性率為95.12%，膠體硒法兩種試劑復核均有反應的確證陽性率為90.45%，均高于單一ELISA法或膠體硒法，提示ELISA法和膠體硒法聯合運用可提高篩查有反應的確證陽性率。近年來HIV感染者發現途徑以VCT和醫療機構門診為主，建議醫療機構在復檢中盡量采用四代ELISA或膠體硒法聯合檢測，降低確證檢測成本，也可以降低篩查有反應標本的確證假陽性率。

本次確證陽性病例年齡主要集中在16～40歲，其次是51～78歲年齡段，男性高于女性，尤其羈押人員中性別差異明顯。感染者以青壯年男性為主，這與大多數調查一致[7]，推測可能與男性性生活較活躍，行為易沖動，而老年人群的HIV防范意識薄弱，提示青年男性和老年男性是預防重點對象，應加強健康宣教。

確證陽性病例在復檢時ELISA法或化學發光法S/CO值遠大于確證陰性病例，且差異有統計學意義，S/CO值有一定提示作用。確證試驗結果帶型預示HIV感染的意義不同[8]。本研究中，從不確定標本的帶型分布看，gp160、p24 帶型出現的頻率最高，這一研究結果與多報道吻合[8-11]。劉全忠等[12]研究結果顯示，在一個新近感染HIV-1的人血液中，出現抗HIV-1抗體可能僅限于抗包膜蛋白抗體或抗包膜蛋白抗體加P24反應。如果WB試驗出現p24和gp160條帶，可以作為HIV初期感染的重要依據[13]。本次分析70例不確定樣本的條帶分布，主要出現p24(62.86%)和gp160(52.86%)。其中38份不確定標本經流行病學調查，14 d后隨訪，有17份標本條帶發展為陽性，5例排除，16例隨訪結果仍為不確定；不確定病例中16例出現gp160和p24雙條帶，隨訪轉陽率為62.50%(10/16)，此類病例處于感染初期。另外有1份陰性樣本，綜合其復檢S/CO比值和流行病調查情況，14天后隨訪轉為陽性，提示確證試驗存在一定的局限性。本次分析中還發現1例陰性病例，3年3次住院，HIV抗體初篩和復檢均有發應，但S/CO比值較低，確證試驗3次均為陰性。

建議當確證試驗出現不確定或陰性時，醫生應結合臨床癥狀、復檢檢測和流行病學調查結果做綜合性判斷，對S/CO比值較低的患者選用非化學發光法進行復檢，對于不確定的標本或S/CO比值較高的病例，應及時進行核酸檢測等補充試驗或者積極跟進隨訪，盡早確定是否為HIV感染，以免耽誤患者的治療。