二級標準血液分析儀測定紅細胞和白細胞計數與參考方法測定結果的比較

陳微，王會如，楊忠，宋偉，朱晉升

北京市醫療器械檢驗研究院·醫療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室 （北京 101111）

血液分析儀是臨床最常用的血液檢測儀器之一，其檢測結果是否準確直接影響疾病的診斷準確性和治療效果，因此，確保檢測結果準確是保證檢驗質量的關鍵[1]。使用新鮮血樣本用于血液分析儀的校準，可提高不同儀器間檢驗結果的可比性[2]。本研究探討二級標準血液分析儀測定紅細胞和白細胞計數與參考方法測定結果的相關性，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器和試劑

二級標準血液分析儀（日本希森美康公司，型號XE2100）及配套稀釋液（批號為G0155、G9009）和配套溶血素（批號為R9547、R9533）；標準血細胞計數儀（日本希森美康公司，型號SCC2）；20、200 μl定量移液器（美國Drummond Scientific公司，由中國計量科學研究院進行校準取得合格證書）；A級容量瓶（北京玻璃廠，1 000 ml最大允差±0.4 ml，100 ml最大允差±0.3 ml，由中國計量科學研究院進行校準取得合格證書）；DB-1樣品杯（日本希森美康株式會社）。

1.2 樣本

健康人新鮮血3 0 份，使用E D T A-K2抗凝（抗凝濃度1.5～2.2 mg/ml）真空采血管，按照紅細胞濃度為（3.8～5.8）×1012/L、白細胞濃度為（3.5～9.5）×109/L采血，不能發生凝固、乳糜、溶血現象，采血后6 h之內完成實驗。

1.3 方法

1.3.1 參考方法測定紅細胞計數

依據國際血液學標準委員會（International Committee for Standardization in Haematology，ICSH）推薦的參考方法[3]，上下顛倒充分混勻EDTA-K2抗凝新鮮血樣本，使用20 μl 定量移液器吸取樣本，用蘸有稀釋液的低塵擦拭紙輕輕擦拭管外壁的血跡，加入裝有1 000 ml 稀釋液的容量瓶中，蓋好瓶塞，手部抵住瓶塞倒置后，底部畫圓旋轉混勻，反復3次此操作后使血液均勻散開；然后將容量瓶中的稀釋試樣注入DB-1樣品杯中，上機連續測試11次，計算第2～11次結果（CV ≤1.0%）的平均值作為每一支樣本的測定值。

1.3.2 參考方法測定白細胞計數

依據 ICSH 推薦的參考方法[3]，上下顛倒充分混勻EDTA-K2抗凝新鮮血樣本，使用200 μl 定量移液器吸取樣本，用蘸有稀釋液的低塵擦拭紙輕輕擦拭管外壁的血跡，加入裝有100 ml 稀釋液的容量瓶中，然后加入1 000 μl 溶血素，蓋好瓶塞，手部抵住瓶塞倒置后，底部畫圓旋轉混勻，反復3次此操作后使血液均勻散開；然后靜置15 min 完成溶血反應，將容量瓶中的稀釋試樣注入DB-1樣品杯中，上機連續測試11次，計算第2～11次結果（CV ≤1.0%）的平均值作為每一支樣本的測定值。

1.3.3 二級標準血液分析儀測定紅細胞和白細胞計數

血液分析儀的工作原理：血細胞為不良導體，用等滲電解質溶液稀釋的血細胞懸液通過兩側有穩定電流的小孔時，由于細胞導電性質較電解質溶液低，小孔感應區內電阻增加，瞬間引起電壓變化產生一個脈沖信號，即通過脈沖；脈沖信號經過放大、甄別、整形后，送入計數系統，進而得到細胞計數結果；根據脈沖大小還可分析細胞體積，提供細胞體積分布圖形。

新鮮血樣本選擇手動模式，每一個樣本測試3次，取其平均值作為每一個樣本的測定值。

1.3.4 方法的比較

每次測定3支樣本，經過10個工作日統計30支樣本數據。比較兩種方法對紅細胞和白細胞計數的測定結果，分析兩者的相關性。

1.4 統計學處理

采用Microsoft Excel 2010及SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，繪制測定結果的散點圖，并通過直線回歸方程計算相關系數，并對兩種方法的測定結果進行配對t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 直線回歸方程

以兩種方法的測定值作散點圖，見圖1、2。經對每個樣本兩種方法的測定值進行直線回歸計算，得到以下結果：兩種方法測定紅細胞計數的相關系數r=0.9967（r2=0.9933），截距=0.0342，斜率=0.9912，線性方程Y=0.9912X+0.0342；兩種方法測定白細胞計數的相關系數r=0.9957（r2=0.9915），截距=0.1919，斜率=0.9730。依據EP9-A2文件[4]，如果r≥0.975（或r2≥0.95），則認為X范圍適合，直線回歸統計的斜率及截距是可靠的[5]。

圖1 紅細胞計數測定值散點圖

2.2 可比性

兩種方法測定結果比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

表1 兩種方法測定結果比較

3 討論

圖2 白細胞計數測定值散點圖

根據ICSH 頒布的文件要求，血細胞分析的檢測結果只有溯源至參考方法，才能保證結果的準確性和不同實驗室間的可比性[6]。對于血液分析儀配套用試劑和校準品，進口產品入關手續辦理難、效期短等特性，易推遲儀器校準時限，耽誤實驗或檢驗結果進度。本研究使用參考方法為新鮮血賦值，再使用二級標準血液分析儀實施量值傳遞過程[6]，實現了可溯源性，保證了檢測數據的準確性和可靠性。

本實驗室二級標準血液分析儀通過參考方法校準調整系數，從直線回歸方程結果可知，r2均≥0.95，表明選擇的樣本濃度范圍足夠寬泛，直線回歸統計的斜率和截距是可靠的；對兩種方法的測定結果進行配對t檢驗，差異無統計學意義（P>0.05），表明兩者具有可比性。

目前，隨著各種檢驗技術的不斷進步及實驗室工作對儀器設備需求的不斷增加，檢測原理不斷完善，測量參數不斷增多，血液分析儀的各項用途和用法也在不斷地發展，基本取代了手工方法。但不同生產廠家儀器的原理和方法不同，容易導致測定結果及參考范圍有所差異[7]。使用可溯源到國際參考方法的血液分析儀進行新鮮血樣本定值，再使用定值的新鮮血樣本對其他血液分析儀進行校準[8]，可保證不同儀器間檢測結果的一致性。