HPLC法測定中蒙藥哈日阿嘎如中梔子苷含量

張艷茹，菅艷艷，寶山，巴乙拉

（1包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內蒙古 包頭；2內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特）

0 引言

哈日阿嘎如由35味藥組成，其中含有進口沉香、豆蔻、旋復花、木棉花、沒藥、肋柱花、牦牛心、馬錢子(制)味等。具有調“赫依”熱“粘”交爭。哈日阿嘎如在臨床中多用于治療“山川間熱”“赫依”、熱兼盛，胸滿氣短，干咳少痰，游走刺痛，心悸失眠，譫妄等。哈日阿嘎如中的主要藥物之一是梔子，其含有環烯醚萜類、三萜類、黃酮類化合物、多糖類等化合物[1-3]。而梔子的主要成分為梔子苷[4,5]，本文以梔子苷作為測定指標，建立了HPLC法測定梔子中梔子苷的含量，結果表明HPLC法的操作簡潔、靈活度較高，而且專屬性強，處方中其他成分均未對梔子苷的測定造成相關的干擾[6]。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

U3000型高效液相色譜儀；隔膜真空泵(鞏義市英峪儀器廠)；KQ-250DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Heal Force NW15UV型超純水系統；ADVENTURERTM型 電 子 天 平（萬 分 之 一）；Ohaus Discovery型電子天平（十萬分之一）；FW400A型多功能粉碎機（材茂科技有限公司）。

1.2 試劑材料

梔子苷對照品（批號：110749-201919），由中國食品藥品檢定研究院提供；供試品三批（批號：202011、202012、202013），由內蒙古國際蒙醫醫院提供，自制樣品一批由包頭市食品藥品檢驗檢測中心制；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltima C18柱(250mm×4. 6 mm，5μm)；流動相的選擇：乙腈-水溶液(15:85)；柱溫：33℃；流速1.0ml/min；檢測波長：238nm；理論塔板數：按梔子苷計不得低于1500。

2.2 配制對照品溶液

取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含46.5μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 配制供試品溶液

準確稱量約1.0g的供試品粉末，置具塞錐形瓶中，準確添加25ml的甲醇，稱量，超聲處理30min（功率250kW，頻率40kHz），冷卻后，再次稱量，對于已經損失的重量使用甲醇進行補足處理，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.4 配制陰性對照溶液

以不含梔子的陰性供試品按處方配比制備陰性對照液。

2.5 提取方法的選擇及提取時間的考察

參考文獻[7]“梔子”項下，以甲醇作為提取溶劑進行超聲處理（功率90Hz），試驗中考察了不同提取時間（超聲10min、20min、30min、40min等）對提取效率的影響，結果見表1。

表1 梔子苷提取時間考察

從表中數據可見，超聲處理30min時，在供試品中提取梔子苷的含量最高，故將提取時間定為30min。

2.6 專屬性

準確稱量陰性對照，供試品和對照品溶液各10μl，將其注入色譜儀并記錄色譜圖。

在同一保留時間8.0min處，在相同的保留時間內，供試品在梔子苷色譜圖中具有相同的梔子苷吸收峰，陰性對照在梔子苷相同保留時間內無吸收峰，提示，該方法具有較好的特異性、專屬性。

2.7 線性關系考察

取梔子苷對照品約7.3mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加純甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(梔子苷實際濃度為0.0734mg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl分別進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對梔子苷的進樣量進行回歸分析，結果梔子苷在進樣體積在1-20μl范圍內呈良好的線性關系。回歸方程為Y=0.135223X-0.07817，r2=0.9996。

2.8 穩定性試驗

一份相同的供試品溶液分別在0h、2h、4h、5h、6h、7h、8h進樣測定，結果見表2。

表2 不同時間測定供試品中梔子苷的峰面積積分值

從表中數據可見，梔子苷在8h內的峰面積積分值基本穩定不變。

2.9 精密度試驗

取同一份供試品0.10036g，連續進樣6次，測定梔子苷峰面積積分值，測定供試品含量，RSD為1.08%，液相色譜儀精密度良好。

2.10 重復性試驗

按含量測定項下的方法，用同一批樣品配制供試品溶液6份，測得了峰面積積分值，并計算了含量。平均含量為0.9985mg/g，RSD為1.80%。表明該方法重復性良好。

2.11 加樣回收試驗

取供試品6份，均約0.5g，精密稱定，6份樣品中分別加入10 ml用甲醇配制的梔子苷對照溶液(梔子苷濃度：0.0465mg/ml)，測定各樣品的含量，按含量測定法計算回收率。結果表明，平均加樣回收率為95.34%(n=6),RSD為1.95%，本方法準確度較好。

2.12 樣品含量測定

取樣品以及自制品各約1.0g，精密稱定配制成供試品溶液，注入10μl，記錄色譜圖，以外標法計算梔子苷含量。數據顯示，三批樣品的含量1.62mg/g與自制樣品梔子苷含量1.00mg/g，這說明梔子藥材的質量，對成品中梔子苷的含量影響較大。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取梔子苷對照品溶液在200-600nm波長處進行光譜掃描，結果表明，梔子苷在238nm波長處吸收最大，與文獻[7]“梔子”項下有關規定一致,故選擇238nm作為檢測波長。

3.2 含量限度的測定

三批供試品中梔子苷的含量最低為1.55mg/g，自制樣品中梔子苷的平均含量為1.00mg/g，實驗中用相同方法對生產用相同梔子藥材進行了含量測定，測得梔子苷的含量為30.13mg/g（3.013%）。根據本品處方量折算，理論上每1g供試品含梔子藥材20/704=0.0284g，本品梔子苷的含量=0.0284g/g×1000×3.013%=0.856mg/g。再根據文獻[7]“梔子藥材的梔子苷的含量限度不得少于1.8%”，還考慮不同產地木香藥材質量差異，下浮20%[8-10]，木香烴內酯含量低限=0.0284g×1000×1.8%×80%=0.409mg/g。結合實際測定結果最低含量為1.55mg/g，綜合評判，確定本品以木香烴內酯計不得少于0.50mg。