UPLC法同時測定心可舒膠囊中丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B的含量

張世良，董曉茜，鄢長余，楊瑞，唐思，劉君，夏素霞

（1遼寧省中醫藥研究院，遼寧 沈陽；2大連市檢驗檢測認證技術服務中心，遼寧 大連）

0 引言

心可舒膠囊收載于文獻[1]，由山楂、丹參、葛根、木香、三七五味藥材組成，主要效用為活血化瘀，行氣止痛。方中丹參為君藥，現行標準中僅有原兒茶醛的薄層鑒別項目，不能對丹參的質量進行有效的控制，本試驗參考相關文獻[2-5]采用超高效液相色譜建立了同時測定丹參中3種成分的方法，為控制心可舒膠囊的質量提供了方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters Acquity H-CLASS液 相 色 譜 儀；Sartorius BP211D、SartoriusBP221S電子天平。

1.2 試劑與試藥

丹 參 素 鈉（110855-201915 97.8%）、原 兒 茶醛（110810-201909 99.6%）、丹 酚 酸B（111562-201917 96.6%）對照品來自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

采 用Agilent Extend-C18（100mm×2.1mm，2.7μm）色譜柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸梯度洗脫(0-3min，5A；3-9min，5A→13A；9-18min，13A→25A)；檢 測 波 長280nm；流速0.5ml/min；柱溫30℃。

2.1.2 溶液的制備

2.1.2.1 對照品溶液

分別精密稱取丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B對照品10mg，分別置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液，分別精密量取丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B對照品儲備液1ml、1ml、2ml，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，作為混合對照品溶液。

2.1.2.2 供試品溶液

取本品10粒內容物，準確稱量，研磨，混勻，取約0.5g，準確稱量，置具塞錐形瓶中，準確添加50%甲醇50ml，稱量，超聲處理30min，放冷，再稱量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾后取濾液，即得。

2.1.2.3 陰性樣品溶液

取缺丹參的陰性樣品，按“2.1.2.2”項下的方法制備陰性樣品溶液并進行測定，記錄色譜圖，結果陰性無干擾（見圖1）。

圖1 uPLC色譜圖

2.2 方法學驗證

2.2.1 線性范圍的考察

精密吸取對照品溶液，分別制成每1ml含5μg、10μg、20μg、40μg、80μg、100μg的溶液。在上述色譜條件下分別進樣測定。以質量濃度（X，mg/ml）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，見表1。

表1 線性方程及范圍

2.2.2 精密度考察

取同一供試品溶液連續進樣6次，測得丹參素鈉RSD為0.8%、原兒茶醛RSD為0.9%、丹酚酸B峰面積的RSD為0.6%。結果表明，儀器精密度良好。

2.2.3 穩定性考察

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24h進樣測定。測得丹參素鈉RSD為0.5%、原兒茶醛RSD為1.0%、丹酚酸B峰面積的RSD為0.7%。表明3種成分在24h內穩定性良好。

2.2.4 重復性考察

取同一批供試品，平行制備6份供試品溶液，測定，記錄各組分色譜峰面積。丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B含量測定結果RSD分別為0.8%、0.8%、0.6%。

2.2.5 加樣回收率試驗

取已知含量的心可舒膠囊約0.25g，精密稱定，共6份，分別加入丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B對照品儲備液，按“2.1.2.2”項下方法制備供試品溶液，測定，計算加樣回收率。結果丹參素鈉、原兒茶醛和丹酚酸B的平均回收率(n=6)分別為98.9%、98.8%、98.4%，RSD為0.7%、0.5%、0.8%。

3 討論

3.1 提取條件與提取溶劑的選擇

該制劑處方中丹參經過加水煎煮后制成浸膏，因此本試驗選擇超聲處理方式提取。本試驗分別用純水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、乙醇進行提取，結果顯示50%甲醇的提取效率最高，因此提取溶劑選擇50%甲醇。

3.2 提取時間的選擇

準確稱量同一樣品3份，分別用50%甲醇為提取溶劑經超聲處理20min、30min、40min，經測定30min與40min提取結果基本一致，因此認為超聲提取30min基本提取完全。

3.3 流動相的選擇

在試驗中比較了甲醇-水、甲醇-磷酸水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水等流動相系統，最終選用乙腈-甲酸水系統作為流動相，進行梯度洗脫，待測成分與雜質分離度符合規定，峰形較好[6-8]。