不同提取方法對三七紅籽油體外抗氧化活性的影響

滕 娟，申世安，陳達菊，董卓婭，余興華，孟凡來，李玉祥，楊 青，楊玉玲，劉華萍

文山壯族苗族自治州農業科學院 (文山 663099)

三七隸屬于五加科人參屬，主要栽培于云南和廣西，其地下根莖是我國傳統的名貴中藥材之一[1]。三七紅籽為三七的種子，周家明等[2]和宋建平等[3]對三七紅籽成分進行研究，分別分離得到7個化合物和8個化合物成分。劉潤民等[4]研究了三七種仁油的脂肪酸組成，發現油酸含量最高達到87.48%。但以上研究集中于成分分析，對于三七紅籽油抗氧化活性研究還很少見。本研究采用冷榨法、水代法、有機溶劑浸提法提取三七紅籽油，并比較三種不同提取方式對其抗氧化活性的影響，旨在為三七紅籽油的更深一步開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

三七紅籽：挑選市售新鮮三七紅籽，清洗去皮，置于通風處晾干。晾干后放入熱風干燥箱中105 ℃干燥至恒重。

1.2 儀器與設備

WOP-KP0202型榨油機，江門市西屋廚房小家電有限公司；GENIUS 5K-C型離心機，長沙市鑫奧儀器儀表有限公司；CG-9160型中藥粉碎機，中山市長柏電器實業有限公司；DHG-9055A型電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；UV-1100型紫外/可見分光光度計，上海美普達儀器有限公司；BSAl24S—CW型電子天平，賽多利斯科學儀器有限公司；XMTD-7000型數顯恒溫水浴鍋，北京市永光明醫療儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1三七紅籽油提取方法

(1)冷榨法

將三七種仁在50 ℃干燥至恒重，準確稱取200 g，將其加入家用小型榨油機直接榨取，每份材料重復壓榨3次，試驗重復3次，并計算油得率。

(2)水代法

將三七種仁粉碎后過40目篩，于50 ℃干燥至恒重，稱取50 g，按料液比(g/mL)1∶10加入熱蒸餾水，均速攪拌2 h，然后靜置3 h，經離心后，分離最上層油脂層，每份材料重復提取3次，試驗重復3次，計算油得率。

(3)有機溶劑浸提法

將三七種仁粉碎后過40目篩，于50 ℃干燥至恒重，稱取10 g，按料液比(g/mL)1∶20加入正己烷，采用回流提取法浸提3 h，每份材料重復浸提3次，合并浸提液，經濃縮與干燥后得三七紅籽油，計算油得率。

1.3.2測定方法

1.3.2.1 還原能力的測定

分別將冷榨法、有機溶劑浸提法及水代法提取的三七紅籽油配成0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL的待測液，取1.0 mL上述溶液于試管中，參照文獻[5]的方法略有改動，測定其還原能力并以BHT作對照。

1.3.2.2 清除超氧陰離子(O2-)能力的測定

分別將冷榨法、有機溶劑浸提法及水代法提取的三七紅籽油配成0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL的待測液，取1.0 mL上述溶液于試管中，參照文獻[6]的方法測定其清除超氧陰離子的能力，以BHT作對照。

1.3.2.3 清除羥自由基(·OH)能力的測定

分別將冷榨法、有機溶劑浸提法及水代法提取的三七紅籽油配成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL、10 mg/mL，取1.0 mL上述溶液于試管中，參照文獻[7]的方法測定其清除羥自由基(·OH)的能力，以BHT作對照。

1.3.2.4 清除DPPH自由基(DPPH·)能力的測定

分別將冷榨法、有機溶劑浸提法及水代法提取的三七紅籽油配成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL、10 mg/mL，取2.0 mL上述溶液于試管中，參照文獻[6,8]的方法測定其清除(DPPH·)的能力，以 BHT作對照。

2 結果與討論

2.1 不同提取方法三七紅籽油得率測定

表1 不同提取方法三七紅籽油得率測定結果

由表1可知，三種提取方法的三七紅籽油得率在19.56%～43.40%，其中有機溶劑浸提法和冷榨法都顯著高于水代法。

2.2 不同提取方法三七紅籽油還原能力的測定

抗氧化劑的還原力與其抗氧化活性之間存在聯系，抗氧化劑是通過自身的還原作用給出電子而清除自由基，還原力越強，抗氧化性越強。因此，可通過測定還原力來說明抗氧化活性的強弱[9]。由表2可知，BHT的還原力在濃度為0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL時都顯著高于水代油、冷榨油、溶劑油。通過試驗表明，三種提取方法的三七紅籽油具有一定的抗氧化活性。

表2 不同提取方法三七紅籽油還原能力的測定結果

2.3 不同提取方法三七紅籽油清除超氧陰離子自由基(O2-)能力的測定

自由基損傷肌體的心、腦、肝等細胞組織，是肌體產生某些疾病和衰老等的重要原因，特別是O2-對肌體的損傷尤為嚴重[10]。鄰苯三酚在堿性條件自氧化產生超氧陰離子，自氧化速率與生成的超氧陰離子的濃度成正比[11]。由表3可知，在一定質量濃度范圍內BHT、水代油、冷榨油、溶劑油對超氧陰離子自由基(O2-)的清除能力，均隨著質量濃度的增大而呈現增強的趨勢。在0.4 mg/mL濃度時，水代油清除能力顯著高于BHT、冷榨油、溶劑油；在0.6 mg/mL濃度時，水代油、BHT顯著高于冷榨油，而在其它濃度時三者間差異不顯著。半抑制濃度 IC50 為自由基清除率為 50% 時所需抗氧化物質的質量濃度，IC50越小，表示其清除自由基的能力越強，抗氧化能力越強[12]。其IC50分別為水代油0.813 mg/mL，冷榨油0.827 mg/mL，溶劑油0.884 mg/mL。

表3 不同提取方法三七紅籽油清除超氧陰離子自由基(O2-)能力的測定結果

2.4 不同提取方法三七紅籽油清除羥自由基(·OH)能力的測定

·OH對細胞的破壞能力極強，且反應速度快，能與活細胞中多種分子反應，引發細胞病變、衰老，從而導致多種疾病的發生[13]。由表4可知，在一定質量濃度范圍內BHT、水代油、冷榨油、溶劑油的清除羥自由基(·OH) 能力，隨其質量濃度的增加而呈現增大的趨勢。在2 mg/mL、6 mg/mL濃度時，溶劑油的清除能力顯著高于水代油、冷榨油、BHT。在8 mg/mL和10 mg/mL濃度時，溶劑油、水代油、冷榨油的清除能力都顯著高于BHT。其IC50分別為溶劑油4.942 mg/mL，水代油6.199 mg/mL，冷榨油6.530 mg/mL。

表4 不同提取方法三七紅籽油清除羥自由基(·OH)能力的測定結果

2.5 不同提取方法三七紅籽油清除DPPH自由基(DPPH·)能力的測定

DPPH·具有穩定的自由基，其孤對電子在517 nm波長附近有強吸收；若有自由基清除劑存在，孤對電子被配對，吸收消失或減弱。因此，通過測定吸收減弱的程度，可以評價受試物的抗氧化活性[14]。由表5可知，BHT對DPPH·自由基的清除率一直穩定保持在90%左右，且顯著高于水代油、冷榨油、溶劑油。水代油、冷榨油、溶劑油對DPPH·自由基的清除能力隨濃度的不斷增加也呈現增大的趨勢，清除率在3%～26%范圍之內。在4 mg/mL、6 mg/mL、10 mg/mL濃度時, 水代油清除能力大于溶劑油和冷榨油,并且差異顯著;其IC50分別為水代油14.751 mg/mL，溶劑油16.040 mg/mL，冷榨油16.084 mg/mL。

表5 不同提取方法三七紅籽油清除DPPH自由基(DPPH·)能力的測定結果

3 結論

本試驗主要研究冷榨法、有機溶劑浸提法及水代法對三七紅籽油的抗氧化活性的影響。試驗表明：三種提取方法所得三七紅籽油都具有一定抗氧化能力，并隨著三七紅籽油質量濃度的增加，其抗氧化能力呈現增強的趨勢，這與張軒[15]和羅偉強[16]對大蒜油和絲瓜籽油的研究結果相似。水代油、冷榨油、溶劑油清除羥自由基(·OH) 能力顯著高于BHT，其中溶劑油清除能力最強；三者對于(DPPH·)自由基的清除能力顯著低于BHT，其中水代油清除(DPPH·)自由基能力高于冷炸油和溶劑油。通過IC50比較，發現水代油清除超氧陰離子(O2-·)和(DPPH·)自由基的能力高于冷榨油和溶劑油；而溶劑油對清除羥自由基(·OH)能力高于水代油和冷榨油，這與趙優萍等[17]對牡丹籽油的研究結果相似。

由此可見，不同提取方法對三七紅籽油抗氧化活性是有一定影響的，這與劉婷婷等[18]對茶油的研究結果相似。綜合比較，雖然水代法提取的三七紅籽油抗氧化活性優于冷榨法和有機溶劑浸提法，但水代法油得率較低，如想大規模生產需思考如何提高其油得率；有機溶劑浸提法油得率最高，在抗氧化活性上也表現出一定的優勢，但有機溶劑具有一定危害性，需思考如何降低溶劑浸提存在的安全隱患；冷榨法的油得率和抗氧化活性表現，在三種提取方法中雖不是最突出的，但其油得率顯著高于水代法，并且提取過程比有機溶劑浸提法更為健康。因此，目前來看冷榨法提取三七紅籽油具有一定應用前景。