Flot2 在惡性腫瘤中的研究進展

胡懿心 王彩霞

【摘要】脂筏是存在于質膜上的微域，其中鞘糖脂和膽固醇的含量豐富，參與信號轉導、細胞粘附、神經突延伸和神經營養因子受體的功能。Flot2（ 脂筏結構蛋白 2） 是一種脂筏支架蛋白，是脂筏標記物 Flotillin 家族的成員之一。Flotillins 參與多種生物過程，如軸突生長、膜運輸和各種信號通路[1] 。Flot2 是一種高度保守且廣泛表達的蛋白，位于細胞膜的細胞質側，位于特定的富含膽固醇的微域內。作為其他分子的物理平臺，在細胞內重要的信號通路中起著關鍵作用，參與多種生物學過程。近年來對于 Flot2 的研究證實其表達上調與多種腫瘤的發生、進展及預后具有相關性，例如鼻咽癌、乳腺癌、胃癌等，本文將對新近發現的其他類別的腫瘤與 Flot2 的相關性的研究成果進行綜述。

【關鍵詞】Flot2 基因;脂筏;腫瘤

【中圖分類號】R730.5 【文獻標識碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.12.212

1 Flot2 與脂筏

Flot（Flotillin） 是微域脂筏上的一個蛋白質家族，在細胞存活、增殖、粘附、凋亡和運動等多種生物學過程中發揮重要作用，其主要原因是它在細胞質膜的囊泡內陷、信號轉導途徑、細胞骨架的組織、細胞外吞和內吞過程中的蛋白質分選以及突觸傳遞中起著重要作用。Flot1（Flotillin-1） 和 Flot2（Flotillin-2） 這兩種同源異構體在細胞粘附、肌動蛋白骨架重組、細胞內吞、吞噬和細胞信號轉導等多種細胞過程中起著重要的生理作用。Flotillin-1 寡聚構建微結構域支架，參與分子分選、細胞骨架動力學[2] 、網格蛋白獨立的內吞途徑和吞噬小體運輸。然而，它也促進細胞增殖和 T 細胞活化。此外，Flotillin-1 作為調節信號分子，協調各種信號轉導過程[2] 。與 Flot1 一起，Flot2 是一個小孔脂筏結構域的標記物，該結構域將生長因子受體與信號轉導途徑聯系起來。Flot2 對于非空洞筏的形成是重要的，并與癌癥的發展和進展有關。 [3]近年來，對 Flot2 的研究已經從蛋白水平逐漸深入到了分子水平，我們也將重點對其分子水平的各種研究成果進行綜述。

2 Flot2 與神經分化的關系

Flot2 被認為與神經分化有關，其被 Fyn（一種 Src 激酶）磷酸化，并導致筏狀依賴的內吞作用 ; 然而，Flot2 在神經分化中的確切作用尚不清楚。為了揭示脂筏相關蛋白在神經分化過程中的作用，Hanafusa.K 等[4]分析了其表達和定位。P19C6 細胞是多能胚胎癌細胞 P19 的亞克隆，神經分化可以用 P19C6 細胞來模擬。他們發現 P19C6 細胞神經分化后全細胞裂解液中 Flot2 和 Fyn 蛋白的表達水平增加。此外，蔗糖密度分級和免疫熒光實驗顯示，神經分化后，Flot2 和 Fyn 向脂筏的定位增加。他們還發現 Fyn 在神經細胞中與 Flot2 脂筏部分共定位。至此，通過觀察抗垢膜 （DRM） 組分中 Fyn 的分布及失活 Fyn 的水平，揭示了神經分化后 DRM 組分中活化 Fyn 的含量可能增加?？偟膩碚f，這些發現表明 Flot2 脂筏與 Fyn 相關，并且 Fyn 在 P19C6 細胞的神經分化過程中使 Flot2 磷酸化。

3 Flot2 在腫瘤中的表達及與腫瘤的關系

3.1 膠質瘤

Huang 等[5] 為了揭示 Flot2 在膠質瘤中的表達，對 56 對膠質瘤組織及癌旁正常組織進行了 qPCR 分析。結果顯示，Flot2 在膠質瘤組織中的表達明顯高于癌旁正常組織 （ P <0.05），并且腫瘤的分期和大小與Flot2 在膠質瘤組織中的表達顯著相關，且膠質瘤患者預后不良與 Flot2的過表達相關。功能分析顯示，沉默的 Flot2 抑制了膠質瘤細胞的活力、遷移和侵襲。新的證據表明，miRNAs（長度為 19-24 個核苷酸的一類細胞質非編碼 RNA）通過與目標基因的 miRNAs 的 3‘-UTR（3‘-非翻譯區）結合來負調控癌基因或腫瘤抑制子的表達，從而參與腫瘤的發生和發展。為此他們檢測了 miR-449 和 Flot2 之間的關系。熒光素酶報告基因和 Western-blot 結果顯示，miR-449 直接結合 Flot2 的3'UTR 序列，調控了膠質瘤細胞中 Flot2 的表達。通過檢測 miR-449在膠質瘤組織以及細胞系中的表達水平，發現 miR-449 在膠質瘤組織以及細胞系中顯著下調。此結果證實了膠質瘤患者的疾病進展以及預后不良與 Flot2 的過表達相關，使得 Flot2 可能成為一種新的預后生物標志物和膠質瘤進展的治療靶點。

此外，TaoSong 等[6]通過免疫組化 （IHC） 染色和 Westernblot驗證了膠質瘤組織中 Flot2 和 EphA2（ephr 受體酪氨酸激酶 A2 型）的上調，Flot2 沉默可顯著抑制膠質瘤細胞的生長和侵襲。同時，Flot2消耗會抑制 Akt 和 NF-kB 的活性，誘導細胞凋亡、細胞周期阻滯和上皮間充質轉化 （EMT） 抑制，表明上述過程的關鍵蛋白表達改變。在機制上，Flot2 通過穩定膠質瘤中的 EphA2 而激活致癌信號。Flot2 在膠質瘤中蛋白和 mRNA 水平與 EphA2 均呈正相關并與 EphA2 相互作用，且與膠質瘤患者 Ki67 強度、p53 表達、腫瘤分期等臨床特征顯著相關。綜上所述，我們的研究結果揭示了 Flot2 以 EphA2 依賴的方式促進膠質瘤細胞的生長和侵襲，凸顯了 Flot2-epha2 軸是膠質瘤治療的一個有前景的靶點。

3.2 骨肉瘤

骨肉瘤 （Osteosarcoma，OS） 是世界常見的惡性腫瘤。環狀 rna是與癌癥發展有關的內源性非編碼 rna，有研究表明多種環狀 rna 可能通過對 Flot2 表達的靶向調控來影響骨肉瘤病程的進展。XiaoB [7]等采用了實時定量聚合酶鏈反應 （qRT-PCR） 檢測 circ_001569、microRNA-185-5p（miR-185-5p） 和 Flotillin-2（Flot2） 的表達。采用 3-（4，5 二甲基 -2- 噻唑基 ）-2，5- 二苯基 -2-h 四唑溴化銨 （MTT）和 Transwell 測定細胞的增殖及侵襲能力。westernblot 檢測上皮 -間充質轉化（EMT） 的相關蛋白和 Flot2 蛋白水平。此外，采用雙熒光素酶報告基因實驗來驗證 circ_001569、miR-185-5p 和 Flot2 之間的相互作用。Circ_001569 在 OS 組織和細胞中的表達增加，其下調降低了 OS 細胞的增殖、遷移、侵襲和 EMT。MiR-185-5p 可以與 circ_001569 相互作用。抑制 miR-185-5p 可以恢復 silent-circ_001569 對 OS 細胞增殖和轉移的抑制作用。此外，Flot2 是miR-185-5p 的靶點。過表達 Flot2 可以恢復 miR-185-5pmimic 對OS 細胞增殖和轉移的抑制作用。同時，Flot2 表達受 circ_001569 和miR-185-5p 調控。此外，circ_001569 敲除也降低了 OS 腫瘤在體內的生長。Circ_001569 可能通過調控 miR-185-5p/Flot2 軸在 OS進展中發揮致癌基因的作用，為 OS 患者的治療提供了可靠的新途徑。

有研究表明，miR-34c-5p 參與了多種癌癥的進展。WangY [8]等為了探討 miR-34c-5p 對骨肉瘤發生發展的影響及作用機制，采用qRT-PCR 檢測骨肉瘤組織和細胞中 miR-34c-5p 和 Flot2mRNA的表達情況。采用 WesternBlot 檢測了蛋白的表達，MTT 法檢測了細胞活力以及用 Transwell 檢測了各組細胞的遷移情況和侵襲情況，檢測熒光素酶活性則采用了雙熒光素酶報告基因。實驗數據表明：骨肉瘤組織和細胞中 mir-34c-5p 的表達程度明顯降低，Flot2mRNA 的表達水平明顯升高。過表達 miR-34c-5p 和抑制 Flot2 可抑制骨肉瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，抑制 CyclinD1、MMP-2 和 MMP-9 蛋白的表達，促進 p21 蛋白的表達。證實了 miR-34c-5p 可以靶向調控 Flot2 的表達，且 Flot2 的過表達逆轉了 miR-34c-5p 過表達對骨肉瘤細胞系增殖、遷移和侵襲的抑制作用。得出結論 ：miR-34c-5p 可抑制骨肉瘤細胞的增殖、遷移和侵襲。其機制可能與 Flot2 靶向有關，這將為骨肉瘤的預防和治療提供一個新的靶點。

3.3 大腸癌

TaiyuanLi [9] 等的研究探討了 Flot2 在結直腸癌（CRC）中的臨床和預后意義。他們在 7 個 CRC 細胞系和 1 個正常結腸細胞系中檢測Flot2 的表達，發現 Flot2 在 CRC 細胞系中升高，提示 Flot2 與 CRC相關。另外，對 8 例患者的原發性結直腸癌組織及相應的非癌結腸組織中 Flot2 蛋白水平進行了檢測。與非癌組織相比，CRC 組織中 Flot2蛋白明顯上調。為了驗證這一結果而進行了免疫組化分析，在 180 對石蠟包埋的CRC組織中，Flot2蛋白主要定位于質膜。在180份標本中，119 份標本中 Flot2 蛋白含量較高 （66.11%）;61 例 （33.89%） 腫瘤標本未見染色。在癌旁組織和正常結直腸組織中均未檢測到信號或微弱信號。結論為，Flot2 在大腸癌組織中高表達。臨床分析發現 Flot2 表達的增加與 CRCs 的浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移和美國癌癥聯合委員會分期相關。此外，Cox 回歸模型的多因素分析顯示，Flot2 表達增加是 CRC 患者預后的獨立因素 （ P =0.013）。綜上所述，此研究結果提示 Flot2 的過表達促進了 CRC 的進展，提示 Flot2 可能成為治療CRC 的新靶點。

3.4 肝細胞癌

肝細胞癌 （HCC） 是全球第五大常見癌癥，也是男性癌癥相關死亡的第二大原因。肝切除術雖然為肝細胞癌患者提供了長期生存，但術后高復發率是一個主要問題。肝癌轉移性復發是根治性切除術后高死亡率的主要原因。有研究表明上皮 - 間充質轉化 （epithelial-mesenchymaltransition，EMT） 是指上皮細胞向間充質細胞轉化的復雜過程，在腫瘤轉移的早期階段起著至關重要的作用。在這個過程中，上皮細胞的極性消失，侵襲和遷移能力增強，同時上皮標記物下調，間充質標記物上調。Cheng 等的研究探討了 Flot2 的表達與 EMT 以及 HCC 進展的關系及其機制。其研究結果顯示，Flot2 在 HCC 組織和細胞系中過表達，Flot2 通過調節細胞周期和誘導 EMT，顯著促進肝癌在體內外的侵襲、遷移、增殖和轉移，該活性是通過激活 Raf/MEK/ERK1/2 通路上調 Twist 來介導的。相反，沉默 Flot2 表達可以抑制這些生物學過程。此外，Flot2 的高表達與肝細胞癌根治性切除后預后不良顯著相關，是一個獨立的危險因素。綜上所述，Flot2 通過調節細胞周期和誘導 EMT 促進肝癌的生長和轉移。Flot2 的表達可能在 HCC 進展中起關鍵作用，并可能被認為是 HCC 預后不良的潛在標志物。

3.5 小細胞肺癌

肺癌是發病率增長最快、發病率高、死亡率高的惡性腫瘤之一，威脅著世界各國人民的健康和生命。小細胞肺癌 （SCLC） 是肺癌的主要類型之一，約占肺癌的 20%～25%。小細胞肺癌具有惡性程度高、分化程度低、生長迅速、血管浸潤、早期廣泛轉移、生物學行為差、預后危險等病理特點。此外，SCLC 患者在診斷前癥狀較少，存活時間短于其他類型肺癌。許多研究表明，許多分子觸發器在 SCLC 的發展中起著至關重要的作用，但這一過程的機制仍不清楚。多個研究證實 MiRNAs 在調節細胞增殖、分化、凋亡和遷移等多種細胞過程中發揮重要作用，且miR-485-5p 是許多人類癌癥的重要調節因子。之前已有研究證實在非小細胞肺癌 （NSCLC） 的細胞株及組織中，Flot2 基因在 mRNA 及蛋白水平均高表達 ， 而且高水平的 Flot2 基因表達與非小細胞肺癌患者的預后不良相關 ， 可以成為一個潛在的預后標記物。

在 FengGao 的研究中，探討了小細胞肺癌 （SCLC） 組織中 miR-485-5p 與 Flot2 的關系。采用免疫組化法檢測 Flot2 蛋白，qPCR 定量檢測 miR-485-5p 和 Flot2mRNA。免疫組化顯示 Flot2 在小細胞肺癌組織中的表達明顯增高 （P<0.01）。實時定量 PCR 檢測 miR-485-5p 的表達，發現小細胞肺癌組織中 miR-485-5p 的表達低于正常組織。在體外培養的 SCLC 細胞中，miR-485-5p 的過表達抑制細胞的增殖、遷移和侵襲，而敲除 miR-485-5p 則相反。已知 Flot2 在小細胞肺癌組織中的表達明顯上調，則其與 miR-485-5p 表達水平呈負相關。MiR-485-5p 的過表達明顯抑制小細胞肺癌細胞中 Flot2 蛋白的表達。熒光素酶報告試驗證實 Flot2 是小細胞肺癌細胞 miR-485-5p 的直接靶點。由此可見，miR-485-5p 作為腫瘤抑制因子，通過靶向 Flot2 抑制 SCLC 的生長和轉移。上調 miR-485-5p 表達可能是一種很有吸引力的小細胞肺癌治療策略。

4 總結

脂筏在眾多生理過程中發揮了重要作用，Flot2是含SPFH（stomatin，prohibitin，Flotillin，HflK/C） 結 構 域 的 脂 筏 的 特 征 蛋 白，也 稱 為R eggie - 1，大小為 48KDa。人 Flot2 的 m R NA 廣泛表達于各類細胞，研究表明，Flot2 在一些惡性腫瘤中會表達上調且其過表達與一些人類癌癥的轉移有關，使它被認為是可以判斷癌癥預后的指標。

近年來，它的上調已被證實參與多種癌癥的進展和發展，例如乳腺癌和黑色素瘤等。先前的一個微陣列結果已經證實 Flot2 在一組乳腺腫瘤中表達上調。另一項研究表明，Flot2 的敲除可以減弱人乳腺癌細胞系的增殖和轉移。Flot2 蛋白在非致瘤細胞系中表達很低，在體外某些轉移性黑色素瘤細胞系中則顯示高表達 ， 則 Flot2 的異位表達與體內人類黑色素瘤的進展相關。除此之外還有很多腫瘤與 Flot2 的相關性得到了證明，如鼻咽癌、宮頸癌、胃癌、腎癌等，從腫瘤的起始到加速進展和后期的轉移，都可受到 Flot2 表達水平的影響，其表達水平的升高與腫瘤的惡性程度和不良預后均有相關性。

當下的研究已經表明 Flot2 基因通過 PI3K/Akt、Wnt/β - catenin、NF - kB、p53 家族等多個信號通路以多種不同的方式影響腫瘤的進展和轉移，它在發揮作用時又會受到 micro R NA 及其他多條信號通路的調節。作為一個有趣的治療靶點，Flot2 在腫瘤發生、發展動態進程中的表達，其相關的信號通路等正在成為國內外學者研究的熱點。對它的深入研究可能為腫瘤的發病機制以及治療策略的研究帶來有益的啟示以及方法，可為未來腫瘤的生物治療提供嶄新的途徑，為人類腫瘤的預防和治療帶來新的曙光。

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[9]Gao F， Wu H， Wang R， et al. MicroRNA-485-5p suppressesthe proliferation， migration and invasion of small cell lung cancer cells bytargeting Flotillin-2[J]. Bioengineered. 2019;10（1）：1-12.

作者簡介：胡懿心（1995.04-），女，漢，黑龍江省海倫市人，碩士研究生在讀，研究方向：消化道腫瘤。

通訊作者：王彩霞，佳木斯大學。