延邊地區豬O型口蹄疫抗體水平監測與免疫效果分析

韓 悅，張 燕，周博宇，于龍政

延邊大學農學院，吉林延吉 133000

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性高度接觸性發熱性傳染病。它主要感染蹄類動物，例如豬和牛。受感染動物的典型臨床特征為口舌黏膜、蹄部皮膚形成水皰、糜爛或潰瘍性病變，可導致幼畜死亡、并導致成年畜生產性能下降[1]。世界動物衛生組織把口蹄疫列為A類中的第一傳染病，我國將其列為一類動物疫病[2]。近幾年，北美洲、大洋洲、歐洲等地區的畜牧業發達國家始終保持無口蹄疫狀態，只有亞洲和非洲為口蹄疫高發區。目前已知的口蹄疫有A型、O型、SAT1、SAT2、SAT3 型和 Asia I型、C 型等七個血清型[3]。

口蹄疫病毒在我國民間俗稱“鵝口瘡”“五號病”“脫靴癥”[4]。此病多發生于與患病動物密切接觸，主要通過消化道、生殖系統、呼吸道、破損的皮膚、黏膜和人工授精等進行直接或間接傳播。該病病程急，傳播速度快，所以一旦發生，常表現為大流行。因此，口蹄疫病毒的防制工作仍然是我國獸醫衛生工作的重要部分。

1 材料和方法

1.1 血清樣品

來自延邊州龍井市地區，不同規模的27個養殖場戶的豬全血樣品846份，其中10月份采集血清600份，11月份采集186份，12月份共采集60份。

1.2 主要儀器設備與試劑

產自北京吉田生物科技有限公司的口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒。單道移液器、多道移液器、加樣槽、洗板機、振動器、離心機、自動酶標儀、恒溫培養箱、高壓滅菌器、便攜式超純水系統、pH測試儀、超級潔凈工作臺、實驗室冰箱,待測血清。

1.3 方法

1.3.1 試劑準備

準備25×PBST濃縮液，用去離子水稀釋。磷酸鹽-吐溫緩沖液因低溫保存有結晶，使用前微熱溶化。底物溶液配制：1片檸檬酸-磷酸鹽片劑+100 mL去離子水，避光溶解。取50 mL+1片鄰苯二胺（OPD）片劑充分溶解，分裝，-20 ℃避光保存。使用前每次1 mL底物溶液加3%雙氧水10 μL制備。

1.3.2 操作步驟

在稀釋板上稀釋樣品血清及陽性對照血清，陰性對照血清，50 μL/孔；在樣品血清和陰陽性對照血清中加入抗原，50 μL/孔；封板，震蕩，將稀釋板4 ℃過夜或37 ℃90 min；包被 ELISA板每孔用50 μL兔抗病毒血清包被，U型反應板。將抗原抗體混合液從U型反應板上按次序轉移至已包被口蹄疫O型兔抗的ELISA板上。封板，37 ℃ 60 min。洗板3～5次，拍干，加口蹄疫O型豚鼠抗體工作液（紅色）封板，37 ℃ 30 min。洗板3～5次，拍干，加兔抗豚鼠lgG-HRP工作液（藍色）封板，37 ℃ 30 min。洗板3～5次，拍干，加入底物溶液 50 μL/ 孔 37 ℃ 15 min；加入終止液，50 μL/ 孔，輕輕震搖混勻；測定讀取酶標儀OD492 nm讀數。

2 結果與分析

2.1 結果判定

判定標準：抗體效價≥1:128 口蹄疫O型抗體陽性；抗體效價＜1:64口蹄疫O型陰性；抗體效價1:64～1:128 可疑，重測后抗體效價≥1:128時，判定為陽性；抗體效價＜1:128時為陰性。ELISA抗體效價與免疫動物攻毒保護關系：抗體滴度以50%終滴定表示，即該稀釋度50%孔的抑制率大于抗原對照孔抑制率均數的50%。

2.2 豬O型口蹄疫免疫抗體個體合格率

10～12月份，對龍井市27個養殖場點的846份樣品進行了監測，抗體合格數789份，抗體合格率93.26%，其中10～12月份的抗體合格數分別為91.66%、97.85%、95.00%（監測結果詳見表1）。龍井市本地豬養殖場豬O型口蹄疫抗體水平趨勢（見圖1）。

表1 龍井市豬場2019年10～12月份豬O型口蹄疫免疫抗體合格率

圖1 龍井市豬O型口蹄疫抗體水平趨勢圖

2.3 分析

調查結果表明，近期本地養殖豬場豬O型口蹄疫抗體水平一直處于較高的水平，都在80%（國家規定水平）以上，雖然結果看著相差不大，但我國口蹄疫抗體水平都維持在較高的抗體水平，這樣使得抗體功能有效化，從而讓易感動物處于長期保護狀態。

3 討論

當前，我國預防口蹄疫的主要途徑是使用合成肽疫苗和滅活疫苗，兩者均是由基礎疫苗合成。在疫苗質量上作比較，國產疫苗價格優惠，免疫期短，但是在生產工藝上仍存在很多問題,例如可能引起副反應、疫苗抗原含量不符合標準，疫苗運輸與存儲沒有按照相關規定執行。另外，出現不合格樣品有很多原因：可能是免疫操作不規范、操作過程中出現漏免、免疫間隔會影響疫苗的免疫效果。對于這些問題豬場的工作人員仍然不能松懈，從疫苗質量、注射操作、豬群的狀況等幾個方面處理，找到原因并進行解決，保障豬群及養豬業更快更好的發展。

建議加強對口蹄疫免疫抗體的監測工作，采用病原體監測和抗體監測相結合的方式，實施定期監控。口蹄疫疾病防治監測任務困難，每年采集的樣本量較多，動物面臨著多次的免疫和抽血，易出現應激反應，養殖戶對采血產生抵觸情緒。建議探索實施引進哨兵動物策略[5]，進行口蹄疫等疾病監測。要提高大眾對飼養化管理的認識，首先讓群眾了解什么是飼養化管理，從基本出發，打好“把飼養化管理落實群眾”這一根本基石。實行科學免疫，嚴格引種，強化監督。科學免疫至關重要，近年來，不少豬場對免疫不夠重視，為疫病暴發留下隱患。豬口蹄疫危害巨大，應加大重視，采取及時有效的免疫接種措施，這樣才能有所防護,還要根據每個豬場的實際情況對免疫程序進行制定調整，嚴格按規定進行免疫接種工作[6]。