血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF在潰瘍性結(jié)腸炎患者中的表達(dá)變化及臨床意義*

徐水亮,張 婷

鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院/湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科，湖北黃石 435000

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)多伴有腸道多種免疫細(xì)胞的活化及炎癥級聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生，涉及大量趨化因子的產(chǎn)生[1-2]。白細(xì)胞介素-8(IL-8)又稱趨化因子8(CXCL8)，UC患者血清IL-8水平升高，能結(jié)合相應(yīng)受體如CXCR1/2，招募中性粒細(xì)胞。CXCL9屬于CXC亞家族成員，能激活T細(xì)胞，參與UC的發(fā)生發(fā)展[3]。單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1屬于CC亞家族成員，MCP-1表達(dá)上調(diào)能誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化至腸黏膜局部，促進(jìn)炎性腸病的發(fā)展[4]。肝細(xì)胞生長因子(HGF)的表達(dá)增加參與UC腸道炎癥修復(fù)過程[5]。本研究通過檢測UC患者血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF的表達(dá)，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取自2018年3月至2019年3月期間本院診治的106例UC患者作為UC組，其中男60例，女46例，年齡19～49歲，平均(36.4±7.5)歲。病變范圍：直乙狀結(jié)腸型36例，左半結(jié)腸型41例，全結(jié)腸型29例；根據(jù)改良Willians活動指數(shù)[7]，將UC患者分為活動性(>9分)66例和非活動性(≤8分)40例；采用Truelove-Witts 分級標(biāo)準(zhǔn)將UC組患者分為輕度35例，中度48例，重度23例[8]。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)參考中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病協(xié)作組制定的《中國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識意見》中UC診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷[6],所有患者均接受臨床、實驗室檢查、胃腸道造影或鋇灌腸等影像學(xué)檢查、內(nèi)鏡及病理組織學(xué)檢查。(2)患者年齡18～80歲。(3)對本研究知情理解并愿意參加本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除腸道細(xì)菌性感染、病毒性感染及非感染性腸炎等疾病。(2)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫相關(guān)疾病。(3)嚴(yán)重心肺肝腎等臟器功能障礙、惡性腫瘤等疾病。選擇50例體檢健康者作為對照組，其中男27例，女23例，年齡20～52歲，平均(37.7±6.3)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡1～14歲。(2)無腹瀉、腹痛、血便等腸道癥狀。(3)無貧血、營養(yǎng)不良及生長發(fā)育遲緩等全身癥狀。(4)既往無非甾體消炎藥、激素類及免疫抑制劑等藥物治療史。兩組研究對象性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有研究對象均知情理解并簽字，并經(jīng)本院倫理委員會審核批準(zhǔn)通過。

1.2檢測方法 采取研究對象清晨空腹靜脈血約6 mL，枸櫞酸鈉抗凝，4 ℃ 4 000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，取上清血清轉(zhuǎn)移到新EP管，-80 ℃冰箱保存待測。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)雙抗體夾心法檢測血漿中IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平。試劑盒購自武漢博士德生物技術(shù)公司，貨號EK0413、BA1843-2、PB0762、EK0369，實驗步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。步驟：準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品及試劑，每孔添加100 μL樣品及標(biāo)準(zhǔn)品，37 ℃反應(yīng)90 min，每孔加入100 μL生物素標(biāo)記抗體，37 ℃反應(yīng)60 min，0.01 M TBS液洗滌3次，每孔添加100 μL ABC，37 ℃反應(yīng)30 min，0.01 M TBS洗滌5次，加入TMB 37 ℃避光反應(yīng)30 min，加入TMB終止液，讀數(shù)。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度梯度為橫坐標(biāo)，以各標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(A)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。應(yīng)用酶標(biāo)儀測A450nm吸光值，待測樣本濃度與測得的A值呈正比，得出樣本中樣本濃度。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF表達(dá)水平比較 與對照組相比，UC組血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF表達(dá)水平明顯較高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF表達(dá)水平比較

2.2UC組血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF與臨床特征的關(guān)系 UC組患者血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平與病變嚴(yán)重程度有關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡、病變范圍及疾病活動性無關(guān)(均P>0.05)。UC病變重度的UC患者血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平明顯高于輕度及中度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 UC組血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF與臨床特征的關(guān)系

2.3多因素Logistic回歸分析影響UC病情嚴(yán)重程度的危險因素 將性別、年齡、IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平納入多因素Logistic回歸分析，并以UC病情嚴(yán)重程度作為因變量，結(jié)果血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平是UC病情嚴(yán)重程度的獨立危險因素(均P<0.05)，表明血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平升高發(fā)生重度UC風(fēng)險增加。見表3。

表3 多因素Logistic回歸分析影響UC病情嚴(yán)重程度的危險因素

2.4血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平預(yù)測UC病情嚴(yán)重程度診斷價值 應(yīng)用ROC曲線分析血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平預(yù)測UC患者病情嚴(yán)重程度診斷價值，結(jié)果血清IL-8、MCP-1、CXCL-9、HGF及聯(lián)合檢查的曲線下面積分別為0.616、0.726、0.674、0.802及0.891，表明血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF對評價UC患者病情嚴(yán)重程度具有一定的價值，四者聯(lián)合檢測的靈敏度為91%，特異度為68%，聯(lián)合檢測對預(yù)測UC病情嚴(yán)重程度的價值高于任一單一指標(biāo)。見圖1、表4。

圖1 ROC曲線分析血清IL-8、MCP-1、CXCL-9、HGF及聯(lián)合檢測對預(yù)測UC病情嚴(yán)重程度的價值

表4 血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平對預(yù)測UC病情嚴(yán)重程度價值

3 討 論

UC是炎癥性腸病的一種類型，病理上，由直腸連續(xù)性向近端擴散至結(jié)腸甚至全結(jié)腸，病變多累及黏膜層。近年來，我國UC的發(fā)病率有上升的趨勢，嚴(yán)重威脅人民身體健康及生活質(zhì)量。UC的病因與炎癥、免疫等因素有關(guān)，多種因素?fù)p傷腸黏膜上皮，引起腸免疫系統(tǒng)功能失調(diào)，腸黏膜大量免疫細(xì)胞浸潤，同時釋放大量趨化因子、細(xì)胞因子等，誘導(dǎo)白細(xì)胞向腸道病變局部聚集，導(dǎo)致疾病進(jìn)展。檢測血清炎癥因子水平，對于UC診斷、評估病情及指導(dǎo)治療等均具有重要的臨床意義。

趨化因子是趨化細(xì)胞定向移動的多肽，長度約70～100個氨基酸，根據(jù)氨基端前兩個半胱氨酸之間是否插入氨基酸，分為CXC、CC、CX3C及C四個亞家族。IL-8及CXCL-9均屬CXC亞家族成員，UC患者腸黏膜組織中IL-8和CXCL-9表達(dá)水平升高，兩者能夠招募單核細(xì)胞及粒細(xì)胞，參與腸道局部炎癥的進(jìn)展，并可能是UC患者潛在的治療靶點[8]。本研究中，UC患者血清IL-8及CXCL-9水平明顯升高，其機制尚不明確，目前研究認(rèn)為與UC發(fā)病時機體免疫功能異常有關(guān)。研究表明，UC病變腸黏膜局部大量免疫細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致促炎及抗炎系統(tǒng)失衡，IL-1及腫瘤壞死因子顯著性水平升高，進(jìn)而上調(diào) IL-8及CXCL-9的表達(dá)[9]。此外，UC患者血清IL-8及CXCL-9水平與UC疾病嚴(yán)重程度有關(guān)，并且兩者是UC病情嚴(yán)重程度的危險因素，表明血清IL-8及CXCL-9水平升高發(fā)生重度UC的風(fēng)險增加。其原因可能是IL-8及CXCL-9具有較強的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞趨化的功能，大量中性粒細(xì)胞及炎癥細(xì)胞招募到腸道病變位置，釋放大量炎癥因子，加重UC病變的進(jìn)展[10]。MCP-1又稱CCL-2，屬于CC亞家族成員，該細(xì)胞因子對單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的具有趨化活性，但對中性粒細(xì)胞或嗜酸性粒細(xì)胞沒有趨化活性。研究表明，UC患者血清中MCP-1水平升高，并且UC經(jīng)免疫治療后，MCP-1水平降低是UC患者預(yù)后良好的重要指標(biāo)[11]。本研究中，UC患者血清MCP-1明顯高于對照組，其機制尚不清楚。有研究報道，UC腸黏膜細(xì)胞外基質(zhì)中糖蛋白肌腱蛋白C(TNC)表達(dá)水平顯著升高，TNC能通過激活Toll樣受體4(TLR4)，促進(jìn)MCP-1等細(xì)胞因子的表達(dá)[12]。此外，血清MCP-1與UC疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，并且血清高水平MCP-1是UC病情嚴(yán)重程度的獨立危險因素。其原因是血清MCP-1能夠招募單核細(xì)胞至病變腸段，上調(diào)腸黏膜局部免疫反應(yīng)，加重局部炎性反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)在敲除MCP-1表達(dá)的UC動物模型中，腸道局部T細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤顯著減少，IL-1及干擾素水平降低，UC病變嚴(yán)重程度明顯降低[13]。

HGF基因位于7q21.11，主要由間充質(zhì)細(xì)胞分泌，其編碼產(chǎn)生的蛋白原經(jīng)蛋白酶水解加工以產(chǎn)生形成成熟異二聚體的α和β鏈，在上皮來源的細(xì)胞中充當(dāng)多功能細(xì)胞因子，在腸黏膜上皮細(xì)胞炎癥及黏膜修復(fù)過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本研究中，UC患者血清HGF水平高于對照組，表明UC患者血清HGF水平升高。研究發(fā)現(xiàn)，腸黏膜上皮損傷后，局部免疫細(xì)胞釋放轉(zhuǎn)化生長因子β等因子，刺激腸黏膜上皮細(xì)胞HGF的表達(dá)，導(dǎo)致血清HGF水平升高[14]。此外，UC患者血清HGF與UC疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，并且血清高水平HGF的UC患者發(fā)生重度UC的風(fēng)險增加。可能是高水平HGF結(jié)合細(xì)胞表面的HGF受體c-Met后，刺激腸黏膜上皮細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腸黏膜上皮屏障的修復(fù)，但重度UC患者，過高水平的HGF引起炎癥系統(tǒng)的平衡失衡，機體正常免疫功能障礙，加重腸道病變的發(fā)展，并易引起細(xì)胞惡變的發(fā)生[15]。本研究進(jìn)一步分析血清IL-8、MCP-1、CXCL-9、HGF及聯(lián)合檢測對UC病情嚴(yán)重程度診斷價值，結(jié)果聯(lián)合檢測的價值高于任一單一指標(biāo)，靈敏度高于任意單一指標(biāo)。表明四者聯(lián)合檢測有助于預(yù)測UC患者病情嚴(yán)重程度，有可能成為判斷UC病情程度血清標(biāo)志物，但四者能否作為UC治療及隨訪的特異性標(biāo)志物，有待進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，UC患者血清IL-8、MCP-1、CXCL-9及HGF水平升高。四者與UC病情嚴(yán)重程度有關(guān)，并且均是UC病情嚴(yán)重程度的獨立危險因素。四者聯(lián)合檢測有助于預(yù)測UC患者病情嚴(yán)重程度，具有一定的臨床價值。