微波輔助提取黃芪枸杞子中總多糖的工藝研究

邢炎華，陳玉鳳，楊 敏，郭亞敏

(1.陜西國際商貿學院 醫藥學院，陜西 咸陽 712046;2.陜西省中藥綠色制造技術協同創新中心，陜西 咸陽 712046)

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge. Var. Mongholicus (Bge.) Hsiao 或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge. 的干燥根，具有補氣升陽、固表止汗、利水消腫、生津養血等功效；枸杞子為茄科植物寧夏枸杞LyciumbarbarumL. 的干燥成熟果實，具有滋補肝腎、益精明目的功效[1]?，F代藥理研究表明黃芪、枸杞子水提液具有增強免疫力、抗氧化、抗腫瘤等作用[2,3]。通過對1∶1配伍的黃芪枸杞子中總多糖的工藝進行研究，為1∶1配伍的黃芪枸杞子中多糖的應用提供倫理依據。

1 實驗材料

紫外分光光度計(北京普析TP-1810)、微波消解儀(上海屹堯科技WF-4000)、濃硫酸、苯酚、D-無水葡萄糖(上海源葉生物)；黃芪、枸杞子(購于陜西龍海醫藥有限公司)

2 實驗方法

2.1 對照溶液的制備

精密稱取無水葡萄糖對照品10 mg置于50 mL的容量瓶中，加水溶解稀釋至刻度。從已配置好的溶液中精密吸取1.0 mL置于25 mL容量瓶中加水稀釋至刻度，作為對照溶液備用。

2.2 標準曲線的制備

精密吸取對照溶液0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 分別置于6支具塞試管中，分別加水補至5.0 mL ，再分別精密加入5% 苯酚溶液1 mL 搖勻，各支試管中再精密加入硫酸5 mL 搖勻，放置10 min后40 ℃水浴15 min，放置室溫后在490 nm 處測定其吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。

2.3 樣品溶液的制備

黃芪枸杞按照1∶1 的配伍比例進行稱取，將已稱取的藥材置于100 mL的三角瓶，然后按照設置好的單因素參數進行提取，濾過，濾液轉移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.4 含量的測定

精密吸取樣品溶液0.1 mL至具塞試管中再加水至2 mL，再精密加入5% 苯酚溶液1 mL 搖勻，再精密加入硫酸5 mL搖勻，放置10 min后40 ℃水浴15 min，然后放置室溫后在490 nm 處測定吸光度。

2.5 單因素實驗

2.5.1 提取時間 黃芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各稱取1.0 g，置于三角瓶中，固定料液比1∶20 、提取功率600 W、溫度50 ℃，提取時間按照設置參數15 min 、20 min、25 min、30 min、35 min分別進行提取，濾過，濾液轉移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.5.2 提取溫度 黃芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各稱取1.0 g，置于三角瓶中，固定料液比1∶20 、提取功率600 W、提取時間25 min，提取溫度按照設置參數40 ℃ 、45 ℃、50 ℃、55 ℃、60 ℃分別進行提取，濾過，濾液轉移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.5.3 料液比 黃芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各稱取1.0 g，置于三角瓶中，固定提取功率600 W、提取時間25 min、提取溫度50 ℃，料液比按照設置參數1∶10 、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30分別進行提取，濾過，濾液轉移至50 mL的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.5.4 提取功率 黃芪枸杞按照1∶1 的配伍比例各稱取1.0 g，置于三角瓶中，固定料液比1∶25 、提取溫度50 ℃、提取時間25 min，提取功率按照設置參數300 W 、400 W、500 W、600 W、700 W分別進行提取，濾過，濾液轉移至50 ml的容量瓶中，最后用水定容至刻度，待用。

2.6 正交設計

根據單因素實驗結果，選擇提取時間(A)、料液比(B)、溫度(C)、提取功率(D)作為影響因素，提取液中多糖的含量作為評價指標，采用L9( 34)正交表設計試驗。因素水平表見表1。

表1 因素水平

3 實驗結果

3.1 標準曲線的制備

實驗結果見圖1 ，結果顯示回歸方程y=23.750x+0.0438 ( R2=0.9991 ) 在0.008 ～0.040 mg·mL-1范圍內線性關系良好。

圖1 葡萄糖的標準曲線

3.2 各因素對多糖含量的影響

單因素實驗結果見圖2 。從圖2 可知在20 min 到35 min之間，多糖的含量與提取時間的關系是先升高再逐漸降低，在25 min時提取液中多糖的含量最高；料液比與多糖的含量關系為隨料液比的增加多糖的含量總體呈增加的趨勢，料液比達到1∶20 后，隨料液比的增加多糖的含量增加緩慢接近于穩定狀態；提取溫度對多糖的含量影響是在45 ～55 ℃ 之間時溫度與多糖的含量呈倒拋物線關系，在50 ℃時提取出的多糖單位含量最高；微波功率對多糖的含量影響為在500 W的功率下進行提取，多糖的含量最高。因此從單因素實驗結果可以得出各因素對多糖含量影響的最佳參數為提取時間是25 min、料液比為1∶20、提取溫度是50 ℃、微波功率為500 W。

圖2 各因素對多糖含量的影響

3.3 正交實驗結果

采用L9( 34)正交表對4種因素進行關聯設計并進行實驗，實驗結果見表2、表3。從正交實驗結果分析可以得出4種因素對多糖的含量影響為提取時間( A ) > 提取溫度( C ) > 料液比( B ) >提取功率( D )；由表3方差分析結果可知提取時間、料液比及提取溫度對多糖的含量有顯著性影響，提取功率對多糖含量的影響無顯著性。因此綜合分析最終確定最佳提取工藝為提取時間30 min，提取溫度45 ℃，料液比為1∶30，提取功率600 W。

表2 正交試驗設計及多糖含量

表3 方差分析

3.4 工藝驗證

分別稱取三份1:1配伍的黃芪枸杞子，按照最優工藝條件進行提取，提取液定容至50 mL 量瓶中，待測。測得三次實驗提取液多糖含量為14.13 mg·g-1、13.12 mg·g-1、14.28 mg·g-1，平均含量為13.84 mg·g-1，RSD為4.56 %。結果表明該工藝穩定、可靠。

4 討論

黃芪和枸杞子是一種藥食兩用的中藥材，黃芪和枸杞子水提液都具有一定的抗氧化等藥理作用[8～12]，且黃芪多糖作為一種增強免疫力的中藥也在廣范應用。黃芪和枸杞子兩藥配伍之后不但可以作為一種保健食品進行服用，也可以通過進一步的研究提升為一種中藥產品服務于市場。筆者主要研究了黃芪枸杞子組方中多糖的提取工藝，該工藝的研究為黃芪枸杞子組方中多糖的進一步開發和應用提供了一定的理論依據。該工藝與傳統水煎煮相比其優勢為提取溫度低和提取效率高，可大大的減低生產成本和提高生產效率。