正交試驗法優選鹽菟絲子的工藝研究

種 振，高 波，羅 川，胡 雨

(1.安徽華潤金蟾藥業股份有限公司，安徽 淮北 235000 ；2.華潤三九醫藥股份有限公司，廣東 深圳 518000)

菟絲子是南方菟絲子CuscutaaustralisR.Br.或菟絲子CuscutachinensisLam.的成熟種子。味辛、甘，平，具有固精縮尿，安胎，明目的功效[1～3]。菟絲子的主要化學成分有黃酮、有機酸、氨基酸及腦磷脂等[2,4～5]。臨床上多用于腎虛胎漏，胎動不安，目昏耳鳴，脾腎虛瀉；外治白癜風[1～2]。金絲桃苷是菟絲子的主要單體成分之一，具有較強的抗氧化功能[6]。菟絲子鹽炙后能引藥歸腎，增強補腎固澀的作用，用于下元虛弱、腰膝酸軟等。臨床常用的炮制品為鹽菟絲子，通常采用鹽炙法進行加工炮制[2,7～9]。《中國藥典》2015版描述的鹽菟絲子炮制工藝缺少可控的工藝參數[10]。目前，關于鹽菟絲子炮制工藝研究的文獻[7～8]，多以金絲桃苷、槲皮素等為評價指標，缺少對鹽菟絲子外觀性狀的描述評價。而筆者研究以外觀性狀及金絲桃苷為指標，采用正交設計[11]，考察悶潤時間，鹽炙溫度，鹽炙時間3個因素，優選菟絲子鹽炙的炮制工藝，以期為菟絲子鹽炙的擴大生產提供參考。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀色譜系統，包括四元梯度輸液泵、色譜柱溫箱、二極管陣列紫外檢測器、Chromeleon 7 色譜管理系統；C18色譜柱、超聲清洗儀、XP26型百萬分之一電子天平、粉碎機

1.2 試劑

菟絲子(批號：2003001)、金絲桃苷(批號：111521-201809；中國食品藥品檢定研究院)、乙腈(色譜級)、甲醇(色譜級)；研究用的菟絲子飲片購自亳州某飲片公司，經鑒定為：旋花科植物菟絲子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子[1,7～8]。

2 方法

2.1 金絲桃苷的測定

2.1.1 色譜條件及系統適用性 C18色譜柱，流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)，檢測波長：360 nm；流速為 1.0mL.min-1，柱溫：25℃，進樣量為10 μL。理論板數應≥5 000(以金絲桃苷峰計算)，色譜峰對稱性較好[1]。見圖1。

t/min

2.1.2 對照品溶液的制備 取對照品金絲桃苷適量，參照《中國藥典》(2015版)菟絲子藥材標準含量測定項對照品溶液的制備方法制備對照品溶液，即得[1]。

2.1.3 供試品溶液的制備 參照《中國藥典》(2015版)菟絲子藥材標準含量測定項供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，即可[1]。

2.2 正交試驗

2.2.1 鹽菟絲子工藝的正交試驗設計 基于菟絲子鹽炙加工文獻檢索綜述[5，7～8]及單因素試驗考察，利用L9(34) 正交設計，考察悶潤透心時間(A)、鹽炙溫度(B)、鹽炙時間(C) 3個因素，以外觀性狀及金絲桃苷為指標，優選鹽菟絲子的炮制工藝。各因素水平見表1。

表1 正交設計因素水平

2.2.2 外觀性狀的評分標準 現行版《中國藥典》及《安徽省中藥飲片炮制規范》2005版[10]鹽菟絲子性狀項下描述：形如菟絲子，表面棕黃色，裂開，略有香氣[1,12]。筆者試驗研究按照正交設計制備加工菟絲子鹽炙品，參照2015版藥典及炮制規范確定評分：棕黃色，略有香氣，計10分；棕黃色，有香氣及灰棕色，略有香氣，均計8分；灰棕色，無香氣，計6分。

2.2.3 綜合評分標準 為了更客觀地評價菟絲子鹽炙品的質量，研究以鹽菟絲子外觀性狀和金絲桃苷為評價指標，用綜合評分法來評定試驗[13]。金絲桃苷是《中華人民共和國藥典》(2015版)規定的指標性成分，所以其權重系數擬定為0.6；飲片外觀性狀是中藥飲片的傳統質量評價指標，是評價飲片質量優劣的關鍵性因素之一[10,14,15]，故將其作為評價指標，并擬定其權重系數為0.4。綜合的評分=外觀性狀評分×0.4+金絲桃苷×0.6[13]。試驗安排和結果如表2，方差分析如表3。

表2 鹽菟絲子工藝的L9 (34) 正交試驗結果(n=3)

表3 綜合評分方差分析

由直觀分析的結果可知，各個因素對菟絲子鹽炙加工工藝的影響順序為 B >C > A。由方差分析可知鹽炙溫度(B因素)對菟絲子鹽炙加工工藝有顯著性影響，悶潤透心時間及炒制時間(A及C 因素)則對菟絲子鹽炙加工工藝無顯著性影響[16]。故從直觀分析及方差分析結果可知菟絲子鹽炙的最佳工藝為 A1B2C3，即取凈菟絲子適量，加入2%鹽水拌勻，悶潤0.5 h，置于130℃的炒藥機中，炒制25 min，取出，晾涼，過篩即可[17]。

2.3 驗證性試驗

取凈菟絲子2 kg，按優選的鹽炙工藝制備鹽菟絲子樣品 3 份[16]，觀察飲片外觀性狀及測定金絲桃苷含量，驗證結果見表4。

表4 驗證試驗結果

結果表明，采用該優選工藝鹽炙加工的鹽菟絲子性狀及金絲桃苷含量均較穩定，表明該鹽炙工藝較穩定、可控。即菟絲子鹽炙的最佳工藝為：取凈菟絲子適量，加入2%鹽水拌勻[7]，悶潤0.5h，置于130℃的炒藥機(CY-25炒藥機)中，炒制25 min，取出，晾涼，篩去碎屑即可。

3 討論

菟絲子鹽炙加工品炒至表面棕黃色，裂開，略有香氣時，成品質量較優，這也與菟絲子鹽炙加工成品傳統外觀性狀及現行版藥典描述相一致[8]。表明外觀性狀是中藥飲片的關鍵評價指標之一，是傳統意義上飲片內在化學成分及化學成分集群不能替代的評價標準[10,14,18]。

菟絲子鹽炙加工文獻[5，7～8]優選的工藝各不相同，本研究以外觀性狀及內在含量指標代替單一內在指標來考察鹽菟絲子的炮制工藝，結果更具科學性和實用性。該研究以外觀性狀及指標性成分金絲桃苷為綜合評價指標，采用正交試驗法優選出的菟絲子鹽炙加工工藝穩定，重現性良好，可為菟絲子鹽炙的擴大生產提供技術參考[19]。將來，還應結合藥代及藥動優選炮制工藝，以便優選工藝更客觀實用。