強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦的急性毒性研究及安全性評(píng)價(jià)

劉巧凌，劉 沖，林 偉＊

（1.新縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站，河南新縣 464000；2.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000）

克氏原螯蝦，也被稱(chēng)為紅螯蝦或淡水小龍蝦，隸屬節(jié)肢動(dòng)物門(mén)，是近幾年來(lái)我國(guó)淡水蝦蟹五個(gè)主要養(yǎng)殖品種中產(chǎn)量年均增長(zhǎng)速率最高的[1]。隨著克氏原螯蝦養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，集約化養(yǎng)殖的持續(xù)增加，使得養(yǎng)殖過(guò)程中各種藥物使用的劑量和頻率不斷增加，隨之而來(lái)的水體環(huán)境污染和各種疾病的發(fā)生也不斷涌現(xiàn)，給養(yǎng)殖戶們帶來(lái)不小的經(jīng)濟(jì)損失。強(qiáng)力碘作為一種常見(jiàn)的廣譜殺菌消毒劑，因其價(jià)格適中、使用方法簡(jiǎn)單且安全高效的優(yōu)點(diǎn)被越來(lái)越多的養(yǎng)殖戶所接受。但是由于養(yǎng)殖戶們的養(yǎng)殖水平不一，養(yǎng)殖觀念的不同還有廠家指導(dǎo)的不足造成了養(yǎng)殖戶們的盲目用藥，有時(shí)就導(dǎo)致了克氏原螯蝦中毒死亡。因此，為了給克氏原螯蝦的用藥提供科學(xué)指導(dǎo)，研究強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦的急性毒性是很有必要的。

1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)及條件

試驗(yàn)于2019年3～5月在信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院水產(chǎn)動(dòng)物病害學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，試驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)48h（小時(shí)）循環(huán)曝氣的自來(lái)水，水體溫度為20～23℃；水體總硬度為3.6，pH值為6.9～7.4，堿度為1.49mmol/L。

2 材料

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)采用的克氏原螯蝦均采購(gòu)于羅山某養(yǎng)殖戶，平均體長(zhǎng)為（6.53 ±0.38）cm，平均體重為（11.72±1.25）g，試驗(yàn)前小龍蝦先在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)暫養(yǎng)7d，每天換水一次，每次換水約1/2，并撈出運(yùn)動(dòng)不正常個(gè)體，暫養(yǎng)及試驗(yàn)過(guò)程中均不進(jìn)行投喂，待小龍蝦的存活狀況達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)方能用于試驗(yàn)。

2.2 試驗(yàn)試劑

強(qiáng)力碘藥品（有效碘濃度約為2%）購(gòu)自鄭州康諾生物科技有限公司，藥物保存在避光陰涼處，使用時(shí)現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3 器材

藍(lán)色塑料箱（53cm×35cm×12cm）、（10mL、500mL）、容量瓶（1000mL）、吸耳球、分析天平、試管刷、玻璃棒、溫度計(jì)、pH測(cè)試儀、移液管等均由上海生工生物工程有限公司鄭州分公司提供。

3 方法

3.1 步驟

采用靜水生物試驗(yàn)法[2]，用強(qiáng)力碘進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)開(kāi)始前經(jīng)過(guò)大量相關(guān)文獻(xiàn)的查閱并擬定了預(yù)試驗(yàn)濃度，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)確定了本次試驗(yàn)所需強(qiáng)力碘溶液對(duì)試驗(yàn)對(duì)象的急性毒性的濃度范圍（全數(shù)致死下限濃度和全部存活上限濃度）。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)得到的濃度范圍進(jìn)行對(duì)等數(shù)間距設(shè)置6個(gè)正式試驗(yàn)濃度，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組（空白對(duì)照組為無(wú)強(qiáng)力碘添加），其中每個(gè)濃度組和空白對(duì)照組都設(shè)置3個(gè)平行對(duì)照組，每個(gè)試驗(yàn)組放入規(guī)格大小無(wú)差異且須肢健全的健康蝦10只，在20～23℃水溫且完全靜水停食的條件下進(jìn)行試驗(yàn)。用藥后前6h持續(xù)觀察蝦的存活狀況，及時(shí)取出死蝦，之后每24h觀察記錄一次試驗(yàn)動(dòng)物中毒反應(yīng)和死亡情況，發(fā)現(xiàn)死亡個(gè)體及時(shí)記錄并撈出。

3.2 死蝦判斷標(biāo)準(zhǔn)

用玻璃棒觸碰蝦體，在3min內(nèi)無(wú)刺激反應(yīng)，判定死亡[3]。

3.3 數(shù)據(jù)處理

采用改良寇氏法計(jì)算半致死濃度[4]。

Xm：為最大劑量組劑量的對(duì)數(shù)值。

i：相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)值之差。

P：各組動(dòng)物的死亡率。

∑p：各組動(dòng)物死亡率之和。

通過(guò)24h LC50和48h半致死濃度，計(jì)算出安全濃度。計(jì)算公式為：安全濃度（SC）=48h LC50×0.3 ×（24hLC50×48hLC50-1）-2[4]（2）

4 結(jié)果與分析

4.1 各濃度組不同時(shí)間的死亡情況

預(yù)試驗(yàn)得出的強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦全數(shù)致死下限濃度為3200mg/L全部存活上限濃度為800mg/L，依據(jù)此濃度范圍，設(shè)置等對(duì)數(shù)間距的濃度組6個(gè)，分別 為：800mg/L、1056mg/L、1393mg/L、1838mg/L、2425mg/L、3200mg/L。每個(gè)濃度組有3個(gè)平行組，對(duì)照組也有三個(gè)空白對(duì)照，合計(jì)21組。每個(gè)濃度組依次編號(hào)，每個(gè)暫養(yǎng)箱放入克氏原螯蝦10只。水體溫度為20～23℃，水體pH值為6.8～7.5，總硬度為3.5，堿度為1.54mmol/L。各濃度組克氏原螯蝦死亡情況如表1。

表1 強(qiáng)力碘不同濃度各組克氏原螯蝦死亡情況（n=10）

4.2 不同濃度組的半致死濃度和安全濃度計(jì)算

根據(jù)表1的數(shù)據(jù)，用公式（1）和公式（2）計(jì)算各時(shí)間段的半致死濃度和安全濃度。結(jié)果如表2。

表2 強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦在24h、48h、72h、96h的半致死濃度mg·L-1

4.3 中毒反應(yīng)

克氏原螯蝦在不同濃度的強(qiáng)力碘溶液中表現(xiàn)的中毒癥狀各異。高濃度組的克氏原螯蝦在20分鐘后出現(xiàn)中毒初期癥狀，蝦四處移動(dòng)，活動(dòng)劇烈。此時(shí)用玻璃棒輕觸蝦身，克氏原螯蝦會(huì)表現(xiàn)出正常的抵御反應(yīng)。而低濃度組和對(duì)照組的克氏原螯蝦則表現(xiàn)出正常狀態(tài)，身體緊貼箱壁趴臥在箱底。高濃度組的蝦在6h后活動(dòng)減弱，螯足附肢收縮、僵硬。部分蝦仍有爬行能力，但是移動(dòng)的非常緩慢。有的蝦則喪失運(yùn)動(dòng)能力，仰臥在箱底，步足無(wú)規(guī)律的抽動(dòng)，還有一些蝦則側(cè)躺在箱底。此時(shí)用玻璃棒觸碰蝦體時(shí)不表現(xiàn)任何的抵御反應(yīng)；除了高濃度組的蝦在24h內(nèi)全部死亡外，其他組的死亡率也有不同程度的增加，中毒死亡蝦的身體僵硬呈現(xiàn)收縮狀，和缺氧死亡蝦的癥狀有很大的區(qū)別。

5 討論

5.1 強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦的毒性強(qiáng)度

根據(jù)本試驗(yàn)的研究結(jié)果，強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦24h、48h、72h、96h的半致死濃度分別為1923.1mg/L、1770.1mg/L、1721.9mg/L、1721.9mg/L。強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦的安全濃度為449.9mg/L，根據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》中農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的毒性等級(jí)的劃分(劇毒,96h LC50≤0.1mg/L；高毒,96h LC50≤1.0mg/L；中毒，1.0mg/L＜96h LC50≤10.0mg/L；低毒，96h LC50＞10.0mg/L)[6]，可判定強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦為低毒。高曉華等的研究中聚維酮碘對(duì)克氏原螯蝦的96h的LC50為13.89mg/L，安全濃度為1.39mg/L[7]，但高曉華選用的克氏原螯蝦規(guī)格較大，藥品的純度及生產(chǎn)廠家不同，試驗(yàn)進(jìn)行時(shí)的水溫較此次試驗(yàn)高，說(shuō)明不同環(huán)境下聚維酮碘對(duì)蝦的安全濃度有較大差異，不同廠家生產(chǎn)的藥品對(duì)蝦的毒性大小不同，不同規(guī)格的的蝦對(duì)聚維酮碘的敏感度也有較大區(qū)別。

5.2 強(qiáng)力碘在克氏原螯蝦生產(chǎn)中的使用注意事項(xiàng)

強(qiáng)力碘是一種新型的碘的化合物，作為水產(chǎn)上常用的一種水體消毒藥物，不僅能用于預(yù)防疾病,還有治療作用[7]，因養(yǎng)殖戶們的養(yǎng)殖觀念的不同，養(yǎng)殖戶在使用時(shí)經(jīng)常加量甚至超量，但超劑量使用該藥物容易產(chǎn)生耐藥性,甚至對(duì)水生動(dòng)物產(chǎn)生毒害作用,引起死亡,更嚴(yán)重的是還會(huì)給位于食物鏈頂端的人類(lèi)帶來(lái)健康隱患[8]。本試驗(yàn)中強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦的安全濃度為449.9mg/L，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和試驗(yàn)結(jié)果表明強(qiáng)力碘對(duì)克氏原螯蝦是安全的。盡管克氏原螯蝦具有很強(qiáng)的生理適應(yīng)性，但在其養(yǎng)殖過(guò)程中強(qiáng)力碘還是不宜多用的，為了達(dá)到高效、精準(zhǔn)用藥的目的，在用藥之前可以進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。

有些養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖過(guò)程中把強(qiáng)力碘作為一種常用藥物進(jìn)行使用，但是強(qiáng)力碘對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的病害有時(shí)不產(chǎn)生效果的情況時(shí)有發(fā)生。原因很多，有時(shí)是養(yǎng)殖戶自身原因，養(yǎng)殖戶的使用方法不對(duì)，養(yǎng)殖戶在使用時(shí)用藥加量或者減量；有時(shí)是藥物本身的原因，養(yǎng)殖戶買(mǎi)到假藥或者過(guò)期藥品，還有就是保存不當(dāng)造成的藥物藥效減小甚至消失。以上這些因素都會(huì)造成強(qiáng)力碘對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的病害無(wú)效。為了在克氏原螯蝦的養(yǎng)殖過(guò)程中使藥物達(dá)到應(yīng)有的效果，在此提醒使用者注意三個(gè)方面的問(wèn)題。首先是藥物用量，可以在使用強(qiáng)力碘之前進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)以確定準(zhǔn)確用量。其次是使用方法，因強(qiáng)力碘內(nèi)含聚維酮碘，具有易升華、易揮發(fā)的特性，在使用時(shí)要注意溫度和光照的問(wèn)題，溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致碘的升華繼而使藥物失效，光照也會(huì)影響藥物藥效，因此在配置藥物時(shí)溫度不宜過(guò)高，施用此藥時(shí)盡量選在日出前或日落后等光照不強(qiáng)的時(shí)間段。在堿性環(huán)境下碘制劑非常不穩(wěn)定，有效碘的含量和酸堿度成反比，在使用強(qiáng)力碘時(shí)不要與生石灰等強(qiáng)堿物質(zhì)合用。同樣是因?yàn)楹劬S酮碘，對(duì)二價(jià)金屬制品會(huì)有腐蝕作用，所以在配置和保存時(shí)不要選用金屬容器，盡量選用玻璃瓶等，保存在避光陰涼處。最后一定要選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的通過(guò)獸藥GMP認(rèn)證的藥品。