葫蘆茶水提物鎮咳祛痰平喘作用的實驗研究*

蘇金妹，盧秋玉，唐愛存

1廣西國際壯醫醫院明秀分院，廣西 南寧530001；2廣西壯族自治區人民醫院藥學部；3廣西中醫藥大學第一附屬醫院藥學部

葫蘆茶為豆科植物葫蘆茶Tadehagi triquetrum（L.）Ohashi的枝葉，別名葫蘆葉、牛蟲草、咸魚草等，是壯族常用藥材，主要分布在廣西、江西、廣東、海南等地。葫蘆茶味苦澀、涼，具有清熱解毒，利濕退黃，消積殺蟲之功。臨床主要用于治療中暑煩渴、感冒發熱、咽喉腫痛、肺癰、黃疸肝炎、腎炎、腸炎、風濕關節痛、鉤蟲病、小兒疳積等［1］。前期研究表明葫蘆茶具有明顯的保肝抗炎作用［2-3］。目前未查到葫蘆茶水提物在鎮咳、平喘、化痰方面的藥理研究，而在臨床應用中葫蘆茶用于治療痰熱咳嗽、痰黃稠、咽喉不利、哮喘等［4-5］。因此，對葫蘆茶水提物進行鎮咳祛痰藥效學研究很有意義。

1 材料與方法

1.1 實驗動物昆明種小鼠，SPF級，雌雄各半，體質量（20±2）g；Wistar大鼠，SPF級，雌雄各半，體質量180～220 g；豚鼠，SPF級，雌雄各半，體質量200～250 g。均購自廣西醫科大學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK（桂）2009-0002，實驗動物使用許可證號：SYXK（桂）2009-0004。飼養環境：在具有負壓及過濾空氣裝置的動物房飼養，室溫20～25℃，相對濕度60%～70%，光照為12 h小時明暗交替，清潔喂養，自由飲食。

1.2 藥物與試劑葫蘆茶（廣西萬寶堂藥業有限公司），經廣西中醫藥大學第一附屬醫院黃敏主任藥師鑒定為豆科植物葫蘆茶；氨水（廣東光華化學廠有限公司，批號：20170306）；枸櫞酸（中國醫藥集團上海化學試劑公司，批號：20180516）；苯酚紅（上海試劑三廠，批號：990609）；磷酸組胺（中國科學院上海生物化學研究所，批號：990826）；氯化乙酰膽堿（上海試劑三廠，批號：991026）；磷酸可待因（青海制藥廠，批號：20170802）；氯化銨（西安化學試劑廠，批號：20181008）；氨茶堿（山西臨汾云鵬藥業有限公司，批號：20170206）。

1.3 實驗儀器WH-2000型超聲波霧化器（廣東粵華醫療器械廠有限公司）；722S型可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；毛細管（內徑0.8 mm，長度5 cm）。

1.4 實驗方法

1.4.1 試驗藥物制備 將葫蘆茶粉碎成粗粉，取干燥適量粗粉，加適量水浸泡30 min，按1∶10料液比加水，煎煮60 min，趁熱抽濾，收集濾液，濾渣加適量水煎煮45 min，合并兩次所得濾液并進行減壓濃縮，得到濃縮物后，再分別配成所需的相應濃度。

1.4.2 小鼠氨水引咳實驗 根據文獻［6-8］取昆明種小鼠50只，隨機分成模型組，磷酸可待因組（0.05 g/kg），葫蘆茶水提物低劑量（100 mg/kg）、中劑量（200 mg/kg）、高劑量（400 mg/kg）組，每組10只。各組給予對應藥物連續灌胃給藥3天，第3天給藥40 min，將小鼠放置密閉玻璃罩內，用超聲霧化器噴入氨水5 s激發小鼠咳嗽，以小鼠同時出現腹肌收縮、縮胸、張嘴（咳聲有無均可）為咳嗽標準，記錄引咳潛伏期和2 min內小鼠咳嗽次數。

1.4.3 豚鼠枸櫞酸引咳實驗 根據文獻［6-8］采用豚鼠枸櫞酸引咳法，將17.5%的枸櫞酸溶液盛于超聲霧化器霧化室的霧化杯內，向鐘罩內恒速噴入枸櫞酸溶液霧化氣1 min，記錄5 min內的咳嗽次數。以豚鼠咳嗽聲音響亮，聽到咳嗽聲音計1次咳嗽，咳嗽次數少于10次的棄除，將預選合格的50只豚鼠隨機分成模型組，磷酸可待因組（0.05 g/kg），葫蘆茶水提物低劑量（100 mg/kg）、中劑量（200 mg/kg）、高劑量（400 mg/kg）組，每組10只。各組給予對應藥物連續灌胃給藥3天，第3天給藥1 h后，將豚鼠扣于鐘罩內，按預選的條件，向鐘罩內恒速噴入枸櫞酸溶液霧化氣1 min，觀察豚鼠自噴霧開始至出現咳嗽的潛伏期及噴霧停止后5 min內的咳嗽次數。

1.4.4 小鼠酚紅祛痰實驗 根據文獻［6-8］取昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機分成模型組，氯化銨組（1.0 g/kg），葫蘆茶水提物低劑量（100 mg/kg）、中劑量（200 mg/kg）、高劑量（400 mg/kg）組，每組10只。第3天給藥30 min后，腹腔注射5%的酚紅溶液0.01 mL/g體質量，30 min后，脫頸處死小鼠，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入裝有2 mL生理鹽水的試管中，振蕩30 min，將沖洗液放入另一試管，加入0.1 mL的NaOH（1 mol/L），用722s型分光光度計，波長546 nm測OD值，根據酚紅標準曲線，將光密度值換算成酚紅含量。

1.4.5 大鼠毛細管祛痰實驗 根據文獻［6-8］取Wistar大鼠40只，隨機分成模型組，氯化銨組（1.0 g/kg），葫蘆茶水提物低劑量（100 mg/kg）、中劑量（200 mg/kg）、高劑量（400 mg/kg）組，每組8只。連續灌胃給藥3天，第3天給藥前禁食不禁水12 h，給藥后1 h，烏拉坦腹腔注射麻醉后，仰位固定。剪開頸正中部皮膚，分離出氣管。在甲狀軟骨下緣正中的軟骨環之間用尖銳的注射針頭扎一小孔，然后插入玻璃毛細管一根，使毛細管剛好接觸氣管底部表面，借以吸取氣管后部之痰液。當毛細管內痰液充滿時，立即另換一根。以毛細管吸取痰液長度作為評價藥物的祛痰效果。記錄給藥后2 h內的痰液分泌量。

1.4.6 豚鼠組胺引喘實驗 根據文獻［6-8］取健康豚鼠，雌雄兼用。將豚鼠放置密閉玻璃罩內，用超聲霧化器以400 mm Hg的恒壓噴入2%氯化乙酰膽和0.1%磷酸組胺的等量混合液，每只豚鼠恒壓恒速噴霧15 s，測定其引喘潛伏期，引喘潛伏期小于150 s為合格。將50只豚鼠隨機分成模型組，氨茶堿組（0.1 g/kg），葫蘆茶水提物低劑量（100 mg/kg）、中劑量（200 mg/kg）、高劑量（400 mg/kg）組，每組10只。連續灌胃給藥3天，第3天給藥1 h后，將豚鼠放置密閉玻璃罩內，按上述方法進行噴霧，測定其引喘潛伏期。

1.5統計學方法應用SPSS 19.0軟件進行統計學處理，計量資料采用±s表示，采用t檢驗，多組均數比較采用方差分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對濃氨水致小鼠咳嗽反應的影響與模型組比較，葫蘆茶水提物中、高劑量組能延長氨水引起小鼠咳嗽反應的潛伏期，同時減少咳嗽次數，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組濃氨水致小鼠咳嗽反應比較（±s）

表1 各組濃氨水致小鼠咳嗽反應比較（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示無數值

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2.2 對枸櫞酸致豚鼠咳嗽反應的影響與模型組比較，葫蘆茶水提物各劑量組能延長枸櫞酸引起豚鼠咳嗽反應的潛伏期，同時減少咳嗽次數，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 各組枸櫞酸致豚鼠咳嗽反應比較（±s）

表2 各組枸櫞酸致豚鼠咳嗽反應比較（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示無數值

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2.3 對小鼠酚紅祛痰作用的影響與模型組比較，葫蘆茶水提物各劑量組能增加小鼠的酚紅排泄量，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 各組小鼠氣管段酚紅排泄量比較（±s）

表3 各組小鼠氣管段酚紅排泄量比較（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示無數值

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2.4 對大鼠毛細管祛痰作用的影響葫蘆茶水提物各劑量組均可顯著增加大鼠的排痰量，與模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 各組大鼠排痰量比較（±s）

表4 各組大鼠排痰量比較（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；-表示無數值

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2.5對豚鼠組胺引喘作用的影響葫蘆茶水提物各劑量組對組胺誘發的豚鼠哮喘均有明顯的抑制作用，可顯著延長豚鼠引喘潛伏期，與模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 各組組胺致豚鼠哮喘反應比較（±s）

表5 各組組胺致豚鼠哮喘反應比較（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜00.05，**表示P＜00.01；-表示無數值

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3 討論

咳嗽、咳痰、氣喘是呼吸系統疾病的常見癥狀，嚴重影響患者的生活質量［9］。中醫藥是中國古代科學的瑰寶，在治療呼吸系統疾病方面具有獨特的理論和療效。

本實驗研究的關鍵是建立合適的動物模型。咳嗽動物模型常用的誘咳方法為機械刺激法和化學誘導法，由于機械刺激強度不能控制，故常選用化學誘導法。研究表明，常用的化學誘導物質有氨水、枸櫞酸、丙烯醛、二氧化硫等，由于二氧化硫引咳的個體差異較大，而丙烯醛引咳不穩定，因此本實驗采用氨水、枸櫞酸誘導建立咳嗽模型，常用的實驗動物有小鼠、豚鼠和大鼠，小鼠和豚鼠化學誘導刺激敏感性好，個體差異小，可靠性高，而大鼠個體差異較大，可靠性不高，因此本實驗選擇小鼠、豚鼠作為咳嗽動物模型。研究結果表明，葫蘆茶水提物能顯著減少小鼠因氨水所致的咳嗽次數及豚鼠因枸櫞酸所致的咳嗽次數，同時能延長咳嗽潛伏期。

痰是一種病理產物，當呼吸道發生炎癥病變時，呼吸道液體的成分就會發生改變，形成痰液［10］。祛痰藥的作用原理為增加呼吸道分泌液，使痰液變稀，降低痰液黏度，使痰液易于咳出，本實驗采用小鼠酚紅祛痰法和大鼠毛細管祛痰法觀察其祛痰作用，結果顯示葫蘆茶水提物能增加小鼠氣管酚紅排泌量及增加大鼠毛細管的排痰量，利于附著氣管黏膜的濃痰變稀從氣管壁脫落，起到祛痰作用。哮喘是由嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞等細胞組分參與的慢性氣道炎癥性疾病，這種慢性炎癥導致氣道高反應性的產生，通常出現廣泛多變的可逆性氣流受限，并引起反復發作的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀，嚴重者出現呼吸抑制或窒息，危及生命［11］。本實驗采用組胺引喘法，結果表明葫蘆茶水提物能延長組胺致豚鼠哮喘發作的潛伏期，提示葫蘆茶可對抗組胺、乙酰膽堿等引起的支氣管收縮。

綜上所述，葫蘆茶具有顯著的鎮咳祛痰平喘作用，本實驗為臨床應用葫蘆茶提供了實驗依據和理論基礎，但是其相關的藥理作用機制有待進一步研究。