靈芝栽培品種引選與培養(yǎng)基配方篩選

徐金晶， 李金輝， 鈄凌娟*， 方莉

(1.金華市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 金華 321017； 2.浙江菇爾康生物科技有限公司，浙江 金華 321304)

靈芝作為傳統(tǒng)的滋補(bǔ)珍品，我國(guó)最早的藥學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為有效無毒的“上上品”，也是《本草綱目》記載的唯一入五臟的本草，保健養(yǎng)生功效深入人心[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，靈芝在防治腫瘤、保肝護(hù)肝、改善睡眠等方面有良好的功效[2-5]。由于市場(chǎng)上靈芝種類和品種比較混亂，加上人為命名隨意，同名異種、同種異名的現(xiàn)象嚴(yán)重，為了永康靈芝產(chǎn)業(yè)的長(zhǎng)足發(fā)展，特開展適宜本地栽培的靈芝品種及配套培養(yǎng)基篩選的試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株為泰山仙芝、龍泉119、韓芝1號(hào)(引自浙江龍泉)。培養(yǎng)基材料有玉米粉、麥粒、棉籽殼、木屑、馬鈴薯、麩皮、葡萄糖、瓊脂、石膏。

1.2 方法

1.2.1 菌種篩選

將不同菌種接種在母種培養(yǎng)基上，考察其菌絲生長(zhǎng)情況，篩選三者中菌絲生長(zhǎng)速度快，長(zhǎng)勢(shì)好的品種。然后針對(duì)篩選出來的菌種，進(jìn)行原種培養(yǎng)基和栽培袋料培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)。

1.2.2 母種制作

母種培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，木屑100 g，玉米粉50 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，水1 000 mL。將馬鈴薯切片加水煮沸30 min，4層紗布過濾后定容至1 000 mL，在濾液中加入瓊脂、玉米粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和葡萄糖，調(diào)節(jié)pH至6.5，并不斷攪拌。分裝到18 mm×180 mm試管中，121 ℃滅菌0.5 h后擺斜面。分離接種3～5 d可見菌塊周圍長(zhǎng)出白色菌絲，并開始在培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)，去除雜菌污染的試管，10～15 h后可長(zhǎng)滿試管斜面，篩選出菌絲潔白濃密、氣生菌絲多的試管進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

菌株繼代培養(yǎng)基。棉籽殼培養(yǎng)基：棉籽殼100 g，麥麩10 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。將棉籽殼、麥麩文火煮50 min，用4層紗布過濾后定容至1 000 mL，其他步驟同PDA培養(yǎng)基。將篩選出的分離菌種無菌分割成5 mm×7 mm的菌塊，將其接種到繼代培養(yǎng)基上，于25 ℃恒溫培養(yǎng)7～10 d可長(zhǎng)滿試管斜面，如此繼代培養(yǎng)2～3次，每次都去除雜菌污染的菌種，篩選出長(zhǎng)勢(shì)好的菌種，可作為栽培用的母種。

1.2.3 原種制作

原種培養(yǎng)基。T1為棉籽殼78%、麥麩20%、蔗糖1%和石膏1%；T2為雜木屑78%、麥麩20%、蔗糖1%和石膏1%；T3為玉米粒97%、蔗糖1%、石膏1%和碳酸鈣1%；T4為麥粒97%、蔗糖1%、石膏1%和碳酸鈣1%。

T1和T2的制作。將培養(yǎng)料混勻，按料∶水(m/V)=1∶1.5加水拌勻后裝入500 mL罐頭瓶，用聚丙烯薄膜封口，121 ℃滅菌1.5 h。

T3和T4的制作。分別將玉米粒和麥粒煮至無白心撈出稍晾干后加入其他材料拌勻后裝入500 mL罐頭瓶，用聚丙烯薄膜封口，121 ℃滅菌1.5 h。

原種瓶滅菌冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接入靈芝母種，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

1.2.4 栽培袋配方試驗(yàn)

配方Ⅰ：棉籽殼83%，麥麩15%，蔗糖1%，石膏1%。

配方Ⅱ：雜木屑83%，麥麩15%，蔗糖1%，石膏1%。

配方Ⅲ：棉籽殼45%，雜木屑38%，麥麩15%，蔗糖1%，石膏1%。

配方Ⅳ：將含水量在38%～45%的直徑10 cm的闊葉樹干截成15 cm的木段。

栽培袋料可用33 cm×17 cm×0.05 cm的聚丙烯塑料袋裝袋，121 ℃滅菌2 h。冷卻后在超凈工作臺(tái)內(nèi)接入原種，25 ℃恒溫培養(yǎng)。

采用大棚覆土栽培，將發(fā)菌完全的菌袋轉(zhuǎn)移至大棚覆土栽培，用鐵鍬以間距40 cm開深度為35 cm、直徑為15 cm的栽培穴，在挖好的坑內(nèi)撒入辛硫磷防蟲，將菌袋塑料袋去除，取出菌棒豎直放入坑內(nèi)，露出部分覆土，全部完成后打開噴灌設(shè)備進(jìn)行噴霧，使菌棒吸足水分。后期管理與傳統(tǒng)大棚靈芝管理相同[6]。

1.3 測(cè)量和觀察指標(biāo)

分別在第7天母種和原種測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，并觀察菌絲生長(zhǎng)勢(shì)，菌絲的生長(zhǎng)勢(shì)用“+”號(hào)表示，記錄菌絲長(zhǎng)滿瓶的時(shí)間。每個(gè)配方隨機(jī)各選100袋菌包采集子實(shí)體曬干，隨機(jī)選100袋菌包收集孢子粉，稱取質(zhì)量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用Excel 2010統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同靈芝菌種母種培養(yǎng)過程中菌絲比較

由表1可知，不同菌種在相同培養(yǎng)基及28 ℃下繼代培養(yǎng)7 d后，日均長(zhǎng)速對(duì)比為龍泉119>泰山仙芝>韓芝1號(hào)，菌絲長(zhǎng)勢(shì)龍泉119>韓芝1號(hào)>泰山仙芝。由此可見，龍泉119靈芝生長(zhǎng)速度最快，日均長(zhǎng)速達(dá)0.47 cm，菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好，對(duì)應(yīng)的菌絲潔白、濃密、健壯。

表1 不同靈芝菌種母種培養(yǎng)過程中菌絲比較

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)龍泉119原種菌絲生長(zhǎng)的影響

由表2可知，不同配方培養(yǎng)基處理中，龍泉119原種菌絲日均長(zhǎng)速最快的是T4，為0.56 cm；其次是T3，而T1、T2較差。滿瓶時(shí)間最短的是T3，其次是T4，而T1、T2滿瓶時(shí)間較長(zhǎng)。在污染率方面，T4、T3高于T1、T2。

表2 不同原種培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)速度對(duì)比

2.3 不同栽培袋料配方對(duì)龍泉119產(chǎn)量的影響

由表3可知，4種栽培袋料生產(chǎn)配方的龍泉119靈芝子實(shí)體和孢子粉產(chǎn)量以配方Ⅳ為最高，其次是配方Ⅱ、Ⅲ，而配方Ⅰ最低。

表3 不同栽培袋料配方子實(shí)體、孢子粉產(chǎn)量比較

2.4 栽培袋料主料成本

當(dāng)前棉籽殼價(jià)格2.2元·kg-1，刨花、桑枝等廢棄木屑價(jià)格0.42元·kg-1，段木價(jià)格0.80元·kg-1，麩皮約2.2元·kg-1，糖約1.2元·kg-1，石膏約1元·kg-1。因此，栽培袋料主料成本排列順序?yàn)榕浞舰?Ⅲ>Ⅳ>Ⅱ。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)引進(jìn)泰山仙芝、龍泉119、韓芝1號(hào)3個(gè)靈芝菌種，龍泉119日均長(zhǎng)速和菌絲生長(zhǎng)勢(shì)都為三者中最好，菌絲潔白，濃密。針對(duì)龍泉119菌種，若生產(chǎn)原種數(shù)量不多，可用玉米粒培養(yǎng)基和麥粒培養(yǎng)基；若原種用量較多，建議采用棉籽殼和木屑作為培養(yǎng)基較適宜。栽培袋料配方隨著棉籽殼含量的減少，靈芝子實(shí)體和孢子粉產(chǎn)量逐漸提高，這可能與棉籽殼木質(zhì)素含量較低有關(guān)。棉籽殼83%+麥麩15%+蔗糖1%+石膏1%栽培成本最高，段木栽培產(chǎn)量最高，但是采用木屑作為袋料，成本最低，取材方便，可更好地利用農(nóng)業(yè)廢棄物，變廢為寶。因此，雜木屑83%+麥麩15%+蔗糖1%+石膏1%配方作為龍泉119栽培袋料配方適宜在本地推廣應(yīng)用。