液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中吡蟲啉的不確定度

許秀琴， 江瀟瀟， 葉宇飛， 陳國(guó)， 趙健

(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315000)

中國(guó)加入WTO以來(lái)，由于蔬菜中農(nóng)藥殘留超出標(biāo)準(zhǔn)而影響產(chǎn)品出口的事件時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重阻礙了我國(guó)對(duì)外貿(mào)易的發(fā)展；另外，農(nóng)藥及其殘留對(duì)人畜具有積累性，慢性毒害的化學(xué)成分在動(dòng)植物，甚至在人體內(nèi)不斷積累，產(chǎn)生毒害作用。其中，吡蟲啉是煙堿類超高效殺蟲劑，通過(guò)選擇性抑制昆蟲中樞神經(jīng)的鹽酸乙酰膽堿酯酶受體，從而破壞昆蟲中樞神經(jīng)的正常傳導(dǎo)，使之神經(jīng)麻痹后死亡，用于防治刺吸式口器害蟲[1-2]。吡蟲啉具有高效、低毒、低殘留、害蟲不易產(chǎn)生抗性、對(duì)植物和天敵安全等特點(diǎn)，并有觸殺、胃毒和內(nèi)吸等多重作用。因此，在蔬菜、水果的種植過(guò)程中，吡蟲啉經(jīng)常被用來(lái)作為殺蟲劑使用。所以，對(duì)于吡蟲啉的測(cè)定就顯得尤為重要。以往的研究[3-7]表明，經(jīng)常會(huì)使用氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜法來(lái)測(cè)定蔬菜水果中的吡蟲啉，然而氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜法的檢出限往往較高，越來(lái)越不能適應(yīng)檢測(cè)的要求。而液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜LC/MS-MS具有更高準(zhǔn)確度和更低的檢測(cè)限，被越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室廣泛地應(yīng)用于蔬果中吡蟲啉的測(cè)定[8-11]。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，樣品的稱量、稀釋以及儀器的測(cè)定等均會(huì)對(duì)結(jié)果造成誤差，所以實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常會(huì)采用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差等手段來(lái)表征實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。而現(xiàn)在越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可機(jī)構(gòu)推薦使用不確定度來(lái)表征實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠程度[12-15]。因?yàn)闇y(cè)量不確定度是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能產(chǎn)生誤差的度量，所以在檢測(cè)、校準(zhǔn)、合格評(píng)定中擁有非常重要的作用[16-17]。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)JJF 1059—1999《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》的相關(guān)要求，應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了蔬菜中的吡蟲啉，并對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

Waters Acquity UPLC/Xevo液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀；旋渦振蕩儀；超純水機(jī)；電子天平；移液器等。吡蟲啉標(biāo)樣；乙腈；甲酸為色譜純；水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 樣品測(cè)定

蔬菜中的吡蟲啉藥物殘留按照GB/T 20769—2008的操作方法測(cè)定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取母液為1 000 mg·L-1的吡蟲啉標(biāo)樣，依次稀釋為100、10、1 mg·L-1的中間液，最終稀釋為100 μg·L-1的上機(jī)液。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18 2.1 mm×100 mm，1.7 μm；流動(dòng)相：甲醇+乙腈+0.1%甲酸水溶液(梯度洗脫)；流速：0.25 mL·L-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

1.2.4 質(zhì)譜條件

離子化模式：電噴霧離子源(ESI)，正離子模式；掃描方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)；離子源溫度：150 ℃；霧化溫度：500 ℃。

1.3 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)測(cè)定方法，建立樣品中吡蟲啉殘留量的數(shù)學(xué)模型：

X=(c×v)/m。

式中：X為樣品中吡蟲啉的殘留量；c為回歸方程擬合得到的樣品溶液質(zhì)量濃度；ν為稀釋倍數(shù)；m為樣品的稱樣量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)證書提供的吡蟲啉標(biāo)液的不確定度為8 μg·mL-1，其不確定度為0.000 4 μg·mL-1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定容引入的不確定度

2.3 稀釋過(guò)程引入的不確定度

取母液為1 000 mg·L-1的吡蟲啉標(biāo)樣，吸取1 mL到10 mL容量瓶中,得到100 mg·L-1的中間液；取母液為100 mg·L-1的吡蟲啉標(biāo)樣，吸取0.5 mL到5 mL容量瓶中,得到10 mg·L-1的中間液；取母液為10 mg·L-1的吡蟲啉標(biāo)樣，吸取0.1 mL到10 mL容量瓶中,得到100 μg·L-1的上機(jī)液。

用量程0～100 μL可調(diào)移液器移取100 μL標(biāo)液至10 mL容量瓶，相對(duì)擴(kuò)展不確定度0.3 μL，標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.3/2=0.150 00 μg·mL-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.15/100=0.001 50。

用量程0～1 000 μL可調(diào)移液器移取500 μL標(biāo)液至5 mL容量瓶，相對(duì)擴(kuò)展不確定度0.15 μL，標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.15/2=0.070 00 μg·mL-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.07/500=0.000 140 0。

用量程0～1 000 μL可調(diào)移液器移取1 000 μL標(biāo)液至10 mL容量瓶，相對(duì)擴(kuò)展不確定度0.15 μL，標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.15/2=0.070 00 μg·mL-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.07/1 000=0.000 070。

2.4 測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

采用5個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度Ci為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積Ai為縱坐標(biāo)，采用最小二乘法擬合獲得線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)：y=4 106x-1 939.9，R2=0.999 6，b=4 106,a=-1 939.9。

Sc=(10-76)2+(25-76)2+(50-76)2+(100-76)2+(150-76)2=39 840。

2.6 樣品稱量引入的不確定度

2.7 樣品定容引入的不確定度

2.8 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

相對(duì)合成不確定度的計(jì)算公式如下：

結(jié)果表明，待測(cè)樣品中吡蟲啉含量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為3.16 μg·kg-1。一般情況下，取置信水平95%，包含因子k=2,則擴(kuò)展不確定度U=U(p)×2=6.6 μg·kg-1。

3 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS法測(cè)定了蔬菜中的吡蟲啉，并對(duì)其不確定度進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，在檢測(cè)過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與稀釋、樣品的稱量與定容以及由于儀器穩(wěn)定性導(dǎo)致的測(cè)量重復(fù)性都對(duì)吡蟲啉的測(cè)量不確定度產(chǎn)生了重要影響。因此，在日常的檢測(cè)工作中，要使用經(jīng)過(guò)計(jì)量檢定的標(biāo)準(zhǔn)器皿對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品進(jìn)行稀釋和定容，以降低實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度；另外，儀器的穩(wěn)定性對(duì)樣品測(cè)量的不確定度產(chǎn)生了非常大的影響，所以提高儀器的穩(wěn)定性對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確至關(guān)重要。總之，需要減少各測(cè)量不確定度分量的影響，來(lái)提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。