液相色譜-串聯質譜法測定蔬菜中吡蟲啉的不確定度

許秀琴， 江瀟瀟， 葉宇飛， 陳國， 趙健

(寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 315000)

中國加入WTO以來，由于蔬菜中農藥殘留超出標準而影響產品出口的事件時有發生，嚴重阻礙了我國對外貿易的發展；另外，農藥及其殘留對人畜具有積累性，慢性毒害的化學成分在動植物，甚至在人體內不斷積累，產生毒害作用。其中，吡蟲啉是煙堿類超高效殺蟲劑，通過選擇性抑制昆蟲中樞神經的鹽酸乙酰膽堿酯酶受體，從而破壞昆蟲中樞神經的正常傳導，使之神經麻痹后死亡，用于防治刺吸式口器害蟲[1-2]。吡蟲啉具有高效、低毒、低殘留、害蟲不易產生抗性、對植物和天敵安全等特點，并有觸殺、胃毒和內吸等多重作用。因此，在蔬菜、水果的種植過程中，吡蟲啉經常被用來作為殺蟲劑使用。所以，對于吡蟲啉的測定就顯得尤為重要。以往的研究[3-7]表明，經常會使用氣相色譜-質譜法和液相色譜法來測定蔬菜水果中的吡蟲啉，然而氣相色譜-質譜法和液相色譜法的檢出限往往較高，越來越不能適應檢測的要求。而液相色譜-串聯質譜LC/MS-MS具有更高準確度和更低的檢測限，被越來越多的實驗室廣泛地應用于蔬果中吡蟲啉的測定[8-11]。

在實驗過程中，樣品的稱量、稀釋以及儀器的測定等均會對結果造成誤差，所以實驗室經常會采用相對標準偏差等手段來表征實驗結果的準確度。而現在越來越多的實驗室認可機構推薦使用不確定度來表征實驗結果的可靠程度[12-15]。因為測量不確定度是實驗結果可能產生誤差的度量，所以在檢測、校準、合格評定中擁有非常重要的作用[16-17]。本實驗根據JJF 1059—1999《測量不確定度評定與表示》的相關要求，應用液相色譜-串聯質譜法測定了蔬菜中的吡蟲啉，并對測量結果的不確定度進行了評價。

1 材料與方法

1.1 材料

Waters Acquity UPLC/Xevo液相色譜串聯質譜儀；旋渦振蕩儀；超純水機；電子天平；移液器等。吡蟲啉標樣；乙腈；甲酸為色譜純；水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 樣品測定

蔬菜中的吡蟲啉藥物殘留按照GB/T 20769—2008的操作方法測定。

1.2.2 標準溶液的配制

取母液為1 000 mg·L-1的吡蟲啉標樣，依次稀釋為100、10、1 mg·L-1的中間液，最終稀釋為100 μg·L-1的上機液。

1.2.3 液相色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18 2.1 mm×100 mm，1.7 μm；流動相：甲醇+乙腈+0.1%甲酸水溶液(梯度洗脫)；流速：0.25 mL·L-1；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。

1.2.4 質譜條件

離子化模式：電噴霧離子源(ESI)，正離子模式；掃描方式：選擇反應監測(SRM)；離子源溫度：150 ℃；霧化溫度：500 ℃。

1.3 數學模型

根據測定方法，建立樣品中吡蟲啉殘留量的數學模型：

X=(c×v)/m。

式中：X為樣品中吡蟲啉的殘留量；c為回歸方程擬合得到的樣品溶液質量濃度；ν為稀釋倍數；m為樣品的稱樣量。

2 結果與分析

2.1 標準溶液引入的不確定度

根據標準證書提供的吡蟲啉標液的不確定度為8 μg·mL-1，其不確定度為0.000 4 μg·mL-1。

2.2 標準物質定容引入的不確定度

2.3 稀釋過程引入的不確定度

取母液為1 000 mg·L-1的吡蟲啉標樣，吸取1 mL到10 mL容量瓶中,得到100 mg·L-1的中間液；取母液為100 mg·L-1的吡蟲啉標樣，吸取0.5 mL到5 mL容量瓶中,得到10 mg·L-1的中間液；取母液為10 mg·L-1的吡蟲啉標樣，吸取0.1 mL到10 mL容量瓶中,得到100 μg·L-1的上機液。

用量程0～100 μL可調移液器移取100 μL標液至10 mL容量瓶，相對擴展不確定度0.3 μL，標準不確定度0.3/2=0.150 00 μg·mL-1，相對標準不確定度0.15/100=0.001 50。

用量程0～1 000 μL可調移液器移取500 μL標液至5 mL容量瓶，相對擴展不確定度0.15 μL，標準不確定度0.15/2=0.070 00 μg·mL-1，相對標準不確定度0.07/500=0.000 140 0。

用量程0～1 000 μL可調移液器移取1 000 μL標液至10 mL容量瓶，相對擴展不確定度0.15 μL，標準不確定度0.15/2=0.070 00 μg·mL-1，相對標準不確定度0.07/1 000=0.000 070。

2.4 測量重復性引入的不確定度

2.5 標準曲線擬合引入的不確定度

采用5個濃度水平的混合標準溶液，以標準溶液濃度Ci為橫坐標，以標準溶液峰面積Ai為縱坐標，采用最小二乘法擬合獲得線性回歸方程和相關系數：y=4 106x-1 939.9，R2=0.999 6，b=4 106,a=-1 939.9。

Sc=(10-76)2+(25-76)2+(50-76)2+(100-76)2+(150-76)2=39 840。

2.6 樣品稱量引入的不確定度

2.7 樣品定容引入的不確定度

2.8 合成標準不確定度

相對合成不確定度的計算公式如下：

結果表明，待測樣品中吡蟲啉含量的標準不確定度為3.16 μg·kg-1。一般情況下，取置信水平95%，包含因子k=2,則擴展不確定度U=U(p)×2=6.6 μg·kg-1。

3 小結

本實驗應用液相色譜-串聯質譜LC-MS/MS法測定了蔬菜中的吡蟲啉，并對其不確定度進行了評價。結果表明，在檢測過程中，標準溶液的配制與稀釋、樣品的稱量與定容以及由于儀器穩定性導致的測量重復性都對吡蟲啉的測量不確定度產生了重要影響。因此，在日常的檢測工作中，要使用經過計量檢定的標準器皿對標準溶液和樣品進行稀釋和定容，以降低實驗過程中產生的不確定度；另外，儀器的穩定性對樣品測量的不確定度產生了非常大的影響，所以提高儀器的穩定性對檢測結果的準確至關重要。總之，需要減少各測量不確定度分量的影響，來提高實驗結果的準確度。