膠體金快速檢測技術在中獸藥散劑中違法添加化學藥物檢測的應用

趙興鑫，田 梅，何立寧，蘇 青，張云霄、楊曉霞

（1.石家莊市畜產品和獸藥飼料質量檢測中心 050000；2.石家莊市農業綜合行政執法支隊 050000；3. 石家莊市藁城區畜產品質量監測站 050000；4. 行唐縣畜產品質量監測站 050000）

隨著我國養殖業的發展，抗生素殘留和耐藥問題也凸顯出來。中藥是我國的瑰寶，守護了華夏兒女幾千年，具有無殘留、副作用低等優點。減少抗生素殘留、耐藥以及副作用問題，中藥是最佳的解決辦法。但在農業農村部關于獸藥產品質量的通報中，時常發現有關于中獸藥散劑中非法添加化學藥物的不合格通報，給禽畜養殖業帶來了巨大的安全隱患和經濟損失。

目前中獸藥散劑中非法添加化學藥物檢測常用的方法主要有顯微鏡檢查法、薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色譜串聯質譜法等，這些方法雖然技術相對成熟，但操作較為復雜，需要專業性很強的技術人員。膠體金免疫層析法是近來年用于快速檢測及診斷的新技術，適用于現場快速篩查，具有操作簡單、省時省力、結果直觀等優點，更適用于基層檢測快速檢測工作。

本實驗采用膠體金免疫層析法對健胃散、白頭翁散和銀翹解散三種常見的中獸藥散劑進行研究，通過對不同濃度的磺胺類和氟喹諾酮類抗生素藥物的測定，證明該方法的可行性，為相關快速檢測方法的建立提供參考。

1 儀器和材料

膠體金檢測讀數儀（深圳市綠詩源生物技術有限公司），磺胺類、氟喹諾酮類膠體金快速檢測卡（深圳市綠詩源生物技術有限公司），漩渦混合儀（IKA），離心機（Sigma）。實驗用樣本提取液（深圳市綠詩源生物技術有限公司），磺胺類混合對照品（磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑混合對照品100μg/mL）、氟喹諾酮類混合對照品（氧氟沙星、諾氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星混合對照品100μg/mL）。

2 方法

取樣品1±0.01g，放入50mL離心管中，加入20mL樣本提取液，漩渦混合2min，室溫下4000r/min離心5min。取上清液200μL加入微孔條中，反復抽吸5次使樣品混勻，插入膠體金免疫層析檢測卡，計時5min后，直接目測結果。

3 結果與分析

3.1 基質干擾考察

膠體金免疫層析法對樣本的處理是有一定要求的，由于免疫反應是一種生物反應，最終滴加入檢測卡孔中的液體pH要在一定范圍內，一般在5～8之間，否則容易出現假陽性或無效的情況；而中獸藥散劑本身物質成分復雜，又具有較深的顏色，易造成干擾。所以在預實驗時針對樣本提取液（一定濃度的緩沖體系）和稀釋倍數做了大量的研究，最終確定了該方法。可以通過圖片清晰地看到健胃散、白頭翁散、銀翹解散在基質狀態下試紙條顯示明顯的陰性，偶有淡黃色背景，但不影響結果判斷。

3.2 加標實驗

健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散，分別稱取1g，至50mL離心管，取磺胺類混合標準品1～100mL的容量瓶中，用甲醇稀釋至定量得到濃度為1μg/mL的對照品溶液，取稀釋后的對照品溶液80μL加入已稱好樣品的離心管中心，相當于中藥散劑中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑的含量均為80ng，磺胺類總含量為400ng，同時做陰性對照實驗，按“2”方法處理后，待測液的磺胺類添加物的濃度為20ppb，插入磺胺類膠體金免疫層析檢測卡進行檢測，分別記錄結果，詳見圖1，各個加標樣品檢測結果均為陽性，表明方法準確性良好。

圖1 健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散的陰陽性檢測（磺胺類）

健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散，分別稱取1g，至50mL離心管，取氟喹諾酮類混合標準品1～100mL的容量瓶中，用甲醇稀釋至定量得到濃度為1μg/mL的對照品溶液，取稀釋后的對照品溶液20μL加入已稱好樣品的離心管中心，相當于中藥散劑中氧氟沙星、諾氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星的含量均為20ng，氟喹諾酮類總含量為80ng，同時做陰性對照實驗，按“2”方法處理后，待測液的氟喹諾酮類添加物的濃度為4ppb，插入氟喹諾酮類膠體金免疫層析檢測卡進行檢測，分別記錄結果，詳見圖2，各個加標樣品檢測結果均為陽性，表明方法準確性良好。

圖2 健胃散、白頭翁散、銀翹解毒散的陰陽性檢測（氟喹諾酮類）

4 討論

根據實驗結果來看，健胃散、白頭翁散、銀翹解散三種中獸藥散劑在本實驗方法下檢測未出現假陽性或無效的情況，說明該方法的提取溶劑和稀釋倍數適合，減少了色素及其他雜質的影響。同時，在加入的藥物對照品的樣品中，均有檢出，呈現明顯的陽性結果，且檢測限均達到痕量級別，更進一步確保檢測結果的準確性。

此方法的優勢十分明顯，各檢測項目的靈敏度可以與其他檢測手段媲美，可以對大量樣本的多個靶標物質進行提前檢測，初步確定違法行為。膠體金免疫層析法主要優勢在于操作簡單、省時省力，相對于傳統方法來說，儀器設備要求較少，檢測費用較低，結果直觀，適合基層使用，該方法推廣應用空間廣闊。

中獸藥散劑品類眾多，成分復雜，且在種植及炮制時有差異，而膠體金免疫技術易受樣本基質干擾，例如樣品本身色素較多、ph值過低或過高、相似結構的雜質成分等因素，易出現假陽性或無效情況。為解決此類問題，需要調配合適的提取溶劑和調整合適的稀釋倍數來降低基質干擾。本文只針對三種中獸藥散劑和八種化學藥物進行研究，對于其他中獸藥散劑的非法添加化藥的檢測，需進一步實驗研究。