宮頸病變中miR-34a、miR-199a表達水平及其與CIN分級、高危型HPV感染的相關性分析

袁洋

（南陽市第一人民醫院 核醫學科，河南 南陽 473010）

宮頸病變是一種發生于宮頸部位臨床較為常見的婦科疾病，其臨床表現主要是性交后出血、陰道分泌物增多等癥狀，且主要類型有炎癥、子宮內膜異位癥等［1］。若患者未能進行及時有效的治療，病情將進一步發展，出現宮頸癌及其他繼發癥，對其生活質量、生命安全等造成嚴重威脅［2］。微小RNA（miRNA）主要是指長度約為22 nt的非編碼RNA，其廣泛存在于機體中，且可與mRNA 結合、調控轉錄后的基因表達，從而發揮降低機體腫瘤細胞水平的作用［3］。經關于宮頸病變的臨床研究發現，宮頸miR-34a、miR-199a 表達與腫瘤的病情發展有密切關系，但其與宮頸上皮內瘤變（CIN）、高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染的相關論證文獻較少［4］。本研究旨在對宮頸病變者CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級及高危型HPV感染與宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平的相關性進行探討，以便后期尋找出更加有效的防治方案，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至2020 年12 月南陽市第一人民醫院收治的72 例宮頸病變患者作為研究對象，均使用TCT 檢查、HPV 基因分型檢測方式診斷，同時采用陰道鏡下活檢對采用TCT 檢查出現異常的受檢者實施病理診斷。依據其診斷結果分為宮頸癌組24 例和CIN 組48 例（CINⅠ級15 例、CINⅡ級18 例及CINⅢ級15 例），擇取同期該院72 例正常宮頸健康體檢者作為對照組。對照組年齡20～42 歲，平均（36.91±2.76）歲；體重指數（BMI）17～26 kg/m2，平 均（22.91±1.76）kg/m2；分娩方式：順產45 例，剖宮產27 例。宮頸癌組年齡21～43 歲，平均（36.92±2.66）歲；BMI 18～25 kg/m2，平均（22.81±1.66）kg/m2；分娩方式：順產16 例，剖宮產8 例。CIN 組年齡19～44 歲，平均（36.94±2.56）歲；BMI 18～26 kg/m2，平均（22.95±1.66）kg/m2；分娩方式：順產30 例，剖宮產18 例。診斷標準：參照《子宮頸病變篩查及處理指南（草案）》［5］中的相關診斷標準。納入標準：①有性生活史；②伴有性交后出血、陰道分泌物增多等癥狀；③具有如上診斷標準中的條件。排除標準：①有子宮、宮頸相關手術史；②心、腎等臟器功能嚴重異常；③嚴重免疫系統疾病；④妊娠期及哺乳期女性等。本研究通過醫院倫理委員會批準。患者及其家屬知情同意。3 組年齡、BMI、分娩方式等基線資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

各組研究對象均進行TCT、HPV 基因分型檢測，并進行miR-34a、miR-199a 表達檢測，此外TCT 檢查異常者增加陰道鏡下活檢。

1.2.1 TCT 研究對象于檢查前在無菌條件下取其宮頸細胞，并在采集管中觀察：陰性為不存在上皮內病變細胞；反之為陽性。

1.2.2 HPV 基因分型 樣本采集方法與TCT 檢查相同，檢測方法：微流控生物TE 片法，其中HPV基因共有24 型，其可分為高危型18 種和低危型6 種。

1.2.3 miR-34a、miR-199a 表達 受檢者的宮頸脫落細胞檢測采用SYBR Green 熒光定量PCR 法，計算方法采用2-ΔΔCt法。

1.2.4 陰道鏡下活檢 應用陰道鏡對實施TCT 檢查出現異常的受檢者進行病理學活檢。

1.3 觀察指標

①各組宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平比較。②宮頸病變者的CIN 各分級及高危型HPV 感染與宮頸miR 表達水平的相關性，各指標間的相關性采用Pearson 法進行分析。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 20.0 統計軟件。計量資料以均數±標準差（）表示，比較用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗；各指標間的相關性分析用Pearson 法，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平比較

CIN 組、宮頸癌組宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平較對照組降低，其中CIN Ⅰ～Ⅲ級組均逐漸降低，且均高于宮頸癌組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平比較（）

表1 各組宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平比較（）

注：1）與對照組比較，P＜0.05；2）與CIN Ⅰ級組比較，P＜0.05；3）與CIN Ⅱ級組比較，P＜0.05；4）與CIN Ⅲ級組比較，P＜0.05。

2.2 宮頸病變者miR 表達與CIN 分級及高危型HPV 感染相關性分析

各指標間的分析經Pearson 相關性分析，結果顯示宮頸病變者miR-34a 表達水平與CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級及高危型HPV 感染均呈負相關關系（P＜0.05）；miR-199a 表達水平與CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級及高危型HPV 感染亦呈負相關關系（P＜0.05）。見表2。

表2 宮頸病變者miR 表達與CIN 分級及高危型HPV 感染相關性分析

3 討論

宮頸病變主要是由HPV 感染、性傳播疾病等致病因素所引起的宮頸鱗狀上皮脫落，進而出現炎癥、損傷等一系列并發癥。近些年來，宮頸病變的發病率呈逐年升高趨勢［6］。宮頸病變中較為常見的繼發癥是CIN、HPV 感染，其中CIN 發病人群多為25～35 歲婦女，根據患者的病情發展可進行病理分級：輕度不典型增生為CINⅠ級；中度不典型增生為CINⅡ級；原位癌、重度不典型增生為CINⅢ級。同時，其還可反映機體發生宮頸癌的整個病變過程。HPV 感染是一種通過性傳播臨床較為常見的感染疾病，其包含120 多種亞型，可分為低危型（一般不誘發癌變）和高危型（可導致細胞周期異常引發癌變）［7］。

miR-34a、miR-199a 是miRNA 中較為常見的基因序列，可通過與機體細胞的靶基因mRNA 非翻譯區的序列相結合，參與其增殖、分化、凋亡等進程，進而調控靶基因表達，發揮降低病變細胞水平、阻止其遷移等作用［8］。本研究結果顯示，與對照組相比，CIN 組、宮頸癌組宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平均降低，CINⅠ～Ⅲ級組呈降低趨勢，且均高于宮頸癌組，比較有差異。表明在宮頸病變診斷中，機體的宮頸miR-34a、miR-199a表達水平可有效反映出患者病情的進展情況與嚴重程度，與聶潔［9］研究結果基本一致。p53 是一種抑癌基因，其可直接調控miR-34a 的表達，同時miR-34a 可提高p53 的活性，兩者相互作用可有效抑制病情進展［10］。miR-199a 可誘導細胞凋亡，抑制其增殖、分化等，故其水平越高表明機體的病變細胞水平越低，其宮頸功能越正常［11］。本研究結果還顯示，宮頸病變者的CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級及高危型HPV 感染與宮頸miR-34a、miR-199a 表達水平均呈負相關，表明宮頸病變中miR-34a、miR-199a 表達水平越低，患者的病情越嚴重，與危敏等［12］研究結果基本一致。

綜上所述，臨床通過檢測宮頸病變患者miR-34a、miR-199a 表達水平，可有效反映出其病情嚴重程度，且其與CIN 分級、高危型HPV 感染均呈負相關，可為患者病情的早期診斷、防治等提供一定的參考價值。但本研究采取的中心較為單一，且樣本量較少，故其具有一定的局限性，往后在臨床可進一步進行多中心、大樣本量的研究，以便后期實施推廣應用。