犬貓膿皮病調(diào)查及毛太好抗細(xì)菌香波的體內(nèi)外效果評價

柳項，雷鎰妃，肖雅夫，胡長敏

（1.肽澤（武漢）生物科技有限公司，武漢 430075；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070）

膿皮病又稱細(xì)菌性毛囊炎，由化膿性細(xì)菌感染犬貓皮膚后引發(fā)，是犬貓常見皮膚病之一［1，2］。據(jù)調(diào)查顯示，貓皮膚病占貓類疾病的10.1%，其中細(xì)菌性皮膚病占2.72%［3］；犬皮膚病占犬類疾病的29.26%，其中膿皮病占到了28.33%［4］。研究表明，偽中間型葡萄球菌是犬膿皮病的主要致病菌［5］，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌等也可造成犬膿皮病的發(fā)生，且單一菌種感染較少見，混合性感染多見［6］。貓膿皮病多繼發(fā)于真菌性感染引起的皮膚病，膿皮病致病菌多為芽孢桿菌。偽中間型葡萄球菌（Staphylococcus pseudintermedius）是一種革蘭氏陽性菌，具有兼性厭氧、凝固酶陽性、β溶血等特征［7］。當(dāng)動物免疫力低下，或因溫度、濕度、pH、機械損傷等因素打破表皮常在菌群平衡后，皮膚受損導(dǎo)致表皮結(jié)構(gòu)改變，黏膜處的偽中間型葡萄球菌就會通過犬舔舐轉(zhuǎn)移到患處，滲出的血清及表皮脫落物成了這些細(xì)菌良好的培養(yǎng)基，細(xì)菌即在患處大量繁殖，常引起膿皮病、傷口感染等。

毛太好抗細(xì)菌香波是一款專為膿皮病動物研發(fā)的產(chǎn)品，有效成分主要有兩種：首先是細(xì)胞穿膜肽（Cell penetrating peptides，CPPs），其最早于人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）中的反式轉(zhuǎn)錄激活子（Transactivator，TAT）中發(fā)現(xiàn)，這段小分子短肽可以被周圍細(xì)胞所吸收，跨膜進入細(xì)胞內(nèi)，因而被稱為細(xì)胞穿膜肽［8］。其在進入細(xì)胞后能夠被正常分解，有較好組織相容性，且細(xì)胞毒性小，已成為藥物靶向治療的理想載體。其次是粉防己，它是一種常用的傳統(tǒng)中草藥，主要有效成分是來自干燥根的粉防已堿（Tetrandrine，TET）、防己諾林堿等，二者均屬于雙芐基異喹啉類生物堿，其中TET活性最強，具有抗病原微生物、抗腫瘤、抗炎等作用。有研究結(jié)果表明粉防己提取物可通過影響acrR和maeR基因突變來逆轉(zhuǎn)大腸桿菌AcrAB-TolC外排泵的多重耐藥性［9］。

膿皮病是犬、貓的重要疾病，患病動物皮損狀態(tài)下的清潔需求難以得到保障，而治療膿皮病導(dǎo)致的抗生素濫用則可能導(dǎo)致超級耐藥菌存在，對動物和人類的生命健康造成威脅。本研究對武漢地區(qū)犬膿皮病發(fā)病情況進行了調(diào)查，并對毛太好抗細(xì)菌香波進行了體內(nèi)外效果評價，以期為推動寵物功能性洗護產(chǎn)品的推廣與應(yīng)用及高效防控犬貓膿皮病奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗病例來源于武漢地區(qū)10家采樣點。10家店中包括寵物店5家，貓舍4家，貓咖1家，共15個病例。15個病例中犬貓比2∶13，犬中比熊犬1例，古典牧羊犬1例；貓中英國短毛貓6例，布偶貓5例、俄羅斯藍(lán)貓1例，曼基康貓1例。選用毛太好抗細(xì)菌香波原液、市場同類型香波2種（樣品1、樣品2）進行藥敏試驗，以生理鹽水（與無菌水進行1∶10稀釋）作對照。

1.2 方法

1.2.1 采樣皮膚刮片：在患病皮膚與健康皮膚交界處反復(fù)刮擦至輕微滲血后，將刮下的組織碎屑用無菌膠布粘取后固定在載玻片上。皮膚粘片：直接用無菌膠布粘取皮膚碎屑、皮屑、滲出液體等病料，之后固定在載玻片上。毛囊采樣：直接將毛發(fā)連根拔起，保留毛根部分，用膠布粘取后固定在無菌載玻片上。

1.2.2 病原菌接種用移液器吸取EP管中預(yù)處理的菌液200μL轉(zhuǎn)移至TSA培養(yǎng)皿中，接菌完畢后倒置平板，在37℃恒溫箱中過夜培養(yǎng)。用接種環(huán)粘取單個菌落后三區(qū)劃線接種至另一板TSA培養(yǎng)皿中，倒置后繼續(xù)放37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h。

1.2.3 鏡檢用乙醇消毒載玻片，接種環(huán)挑取少量細(xì)菌用畫圈方式于玻片中央均勻的涂布成適當(dāng)大小的薄層，火焰快速固定后進行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)并做好記錄。

1.2.4 藥敏實驗首先對超凈臺紫外消毒。分別吸取4種處理液置于平板；將濾紙剪成直徑10 mm的小濾紙片，并分成4份；將4組濾紙片分別放入4個平板中浸濕備用。接種環(huán)滅菌后將培養(yǎng)皿上的菌液在平板上涂布均勻，涂好的平板做好標(biāo)記倒置。所有樣品重復(fù)上述步驟，同時設(shè)置空白對照。接種之后，每天觀察記錄細(xì)菌生長情況。

1.2.5 抗細(xì)菌香波的體內(nèi)外效果評價方法對患病動物精神狀態(tài)、病灶清潔度與嚴(yán)重度、主要臨床表現(xiàn)等情況做觀察記錄。在初次采樣后，將患病動物用抗細(xì)菌香波原液涂抹全身，按摩皮膚患處5~10 min后用溫清水沖洗干凈，每3 d使用1次，連續(xù)使用3次。完畢后再次采樣，采樣部位同初次采樣方法、部位一致，樣品帶回實驗室做細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗細(xì)菌香波的體外效果評價

2.1.1 分離菌株的菌落形態(tài)與鏡檢結(jié)果金黃色葡萄球菌菌落為直徑1~2 mm的圓形或類圓形，呈單個或成串排列，菌落邊緣光滑濕潤，呈黃色或黃白色（圖1a）；革蘭氏染色鏡檢觀察均為陽性球菌，著色不深，呈單個、成對或短鏈狀排列（圖2a）。大腸桿菌為直徑不到1 mm的圓形菌落，單個散在，菌落邊緣光滑濕潤，呈白色（圖1b），革蘭氏染色鏡檢觀察為陰性桿菌，著色良好，多呈單個排列（圖2b）。枯草芽孢桿菌菌落直徑較大，為3~5 mm，菌落表面似有一層凹凸不平膜，菌落邊緣光滑不平整，周圍滲出大量乳白色黏液（圖1c），革蘭氏染色鏡檢觀察為陽性短桿菌，著色良好，呈單個或成對排列（圖2c）。

圖1 TSA平板37℃培養(yǎng)24 h的菌落形態(tài)

圖2 菌落革蘭氏染色鏡檢結(jié)果

2.1.2 藥敏試驗結(jié)果由表1可見，毛太好抗細(xì)菌香波、樣品1、樣品2藥敏紙片周圍均出現(xiàn)抑菌圈，生理鹽水周圍則沒有出現(xiàn)抑菌圈。

表1 毛太好抗細(xì)菌香波對皮膚癬菌的抑菌效果

由圖3可見，毛太好抗細(xì)菌香波對偽中間型葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、臨床菌株C55的體外抑菌效果顯著優(yōu)于對照組，樣品1和樣品2對這3種菌的抑菌效果差異均不顯著。與樣品1、樣品2相比，毛太好抗細(xì)菌香波對金黃色葡萄球菌的抑菌效果差異不顯著；而對偽中間型葡萄球菌、臨床菌株C55的抑菌效果明顯更強。因此，綜合認(rèn)為毛太好抗細(xì)菌香波具有較好的抑菌效果。

圖3 毛太好抗細(xì)菌香波對3種菌抑菌效果

2.2 抗細(xì)菌香波的體內(nèi)效果評價

2.2.1 香波使用前后情況對比表2所示為使用香波前后的膿皮病動物癥狀表現(xiàn)對比情況。可以看出，使用毛太好抗細(xì)菌香波后，患病動物病灶紅腫、化膿癥狀都有明顯好轉(zhuǎn)，直觀表現(xiàn)為紅腫面積縮小甚至痊愈，膿性分泌物減少或消失（圖4c）。脫毛癥狀也得到改善，表現(xiàn)為脫毛區(qū)域皮膚狀態(tài)好轉(zhuǎn)，肉眼可見長出新生毛發(fā)。此外，病灶瘙癢與清潔度也得到很大改善，具體表現(xiàn)為病灶表面分泌物減少、小動物抓撓患處的頻率減少以及清洗后清潔度明顯提高。

表2 膿皮病臨床癥狀評分

圖4 一例患膿皮病泰迪犬使用毛太好抗細(xì)菌香波前后對比

2.2.2 抗菌效果評價由表3可知，使用抗菌液香波前在病灶處共檢測出17株細(xì)菌，而使用抗菌液香波治療后僅發(fā)現(xiàn)5株。經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)這5株細(xì)菌分別為：金黃色葡萄球菌1株，枯草芽孢桿菌2株，蠟樣芽孢桿菌2株。與治療前相比，金黃色葡萄球菌株數(shù)減少5株，偽中間型葡萄球菌株數(shù)減少2株，枯草芽孢桿菌株數(shù)減少3株，蠟樣芽孢桿菌株數(shù)減少1株，大腸桿菌株數(shù)減少1株（表4）。使用毛太好抗細(xì)菌香波后病灶處細(xì)菌數(shù)目明顯變少，抑菌效果顯著。

表3 使用香波前后病灶處細(xì)菌情況

3 小結(jié)與討論

毛太好抗細(xì)菌香波的體內(nèi)外效果評價結(jié)果表明，毛太好抗細(xì)菌香波對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌都有一定抗菌效果。治療后病灶紅腫、化膿、脫毛情況明顯改善，瘙癢得到緩解，清潔度大大增加，說明毛太好在皮損情況下能做到溫和不刺激、有效清潔和修復(fù)皮膚屏障；藥敏試驗結(jié)果也說明了其對偽中間型葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、臨床菌株C55有明顯抑菌效果，且毛太好抗細(xì)菌香波的抑菌效果相較于樣品1與樣品2更好，這對于臨床犬貓膿皮病的治療具有一定推廣意義。