通心降脂滴丸對異丙腎上腺素致大鼠急性心肌缺血的保護作用

張夢迪，呂曉麗，3，白圖雅，3，常福厚，3，高峰，張秀慧

（1.內蒙古醫科大學新藥安全評價研究中心，內蒙古呼和浩特010010；2.內蒙古自治區新藥篩選工程研究中心，內蒙古呼和浩特010010；3.內蒙古醫科大學藥學院藥理教研室，內蒙古呼和浩特010010）

通心降脂滴丸對異丙腎上腺素致大鼠急性心肌缺血的保護作用

張夢迪1，2，呂曉麗1，2，3，白圖雅1，2，3，常福厚1，2，3，高峰2，3，張秀慧2，3

（1.內蒙古醫科大學新藥安全評價研究中心，內蒙古呼和浩特010010；2.內蒙古自治區新藥篩選工程研究中心，內蒙古呼和浩特010010；3.內蒙古醫科大學藥學院藥理教研室，內蒙古呼和浩特010010）

目的探討通心降脂滴丸對異丙腎上腺素（ISO）致急性心肌缺血的保護作用，為通心降脂滴丸的臨床試驗及臨床應用提供藥效學依據。方法取健康Wistar大鼠80只，烏拉坦麻醉，背位固定，測定標準肢體二導聯心電圖，篩選出心電圖（ECG）正常動物60只。將60只大鼠隨機均分為空白對照組，缺血模型組，普萘洛爾組，通心降脂滴丸低、中、高劑量組。通過皮下注射異丙腎上腺素建立大鼠心肌缺血損傷模型，檢測各組大鼠血清中肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）、丙二醛（MDA）的含量和心肌組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力，以及對異丙腎上腺素致心肌缺血后心電圖的影響，評價通心降脂滴丸對異丙腎上腺素引起的心肌缺血的改善作用。結果缺血模型組大鼠心電圖S-T段明顯抬高，與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸低、高劑量組大鼠的心電圖S-T段均有明顯下降。與空白對照組比較，缺血模型組LDH、CK活力、MDA含量均顯著增高（P＜0.05）；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸中劑量組MDA含量顯著降低（P＜0.05），SOD活力顯著增高（P＜0.05）；通心降脂滴丸高劑量組LDH、CK活力及MDA含量顯著降低（P＜0.05），SOD活力顯著增高（P＜0.05）。結論通心降脂滴丸可使心肌缺血大鼠心電圖S-T段降低，緩解心肌缺血程度，減少心肌缺血后血清中LDH、CK的釋放，以及心肌組織中MDA的產生，提高SOD活力，降低心肌損傷程度，對缺血心肌有保護作用。

通心降脂滴丸；異丙腎上腺素；急性心肌缺血

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（簡稱冠心病），又稱缺血性心臟病，主要是由于心肌供氧供血不足，冠狀動脈痙攣，從而導致心肌代謝異常［1］。通心降脂滴丸的主要成分為丹參、三七、降香、山楂、冰片等藥材［2-4］。本試驗中通過制備急性心肌缺血動物模型，研究通心降脂滴丸對冠心病的治療價值，為通心降脂滴丸的臨床試驗及臨床應用提供充分的藥效學依據。現報道如下。

1　儀器、動物與材料

1.1儀器

BL-420s型生物機能試驗系統（成都泰盟科技有限公司）；分析天平（美國丹佛儀器公司）；3K15型低溫離心機（Sigma公司）；水浴箱（上海梅香儀器有限公司）；TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.2動物

清潔級Wistar大鼠，體重180～220 g，雌雄各半，購自內蒙古大學動物中心，實驗動物質量合格證編號為SCXK（蒙）2002-0001。動物飼養于聚碳酸酯大鼠飼養籠，每籠飼養同劑量組的5只同性別大鼠；飼養環境溫度20～24℃，濕度40%～70%；由內蒙古大學動物中心提供標準大鼠顆粒飼料，自由攝取純凈水。

1.3試藥

通心降脂滴丸（內蒙古醫科大學藥學院研制，批號為20120125，規格為每丸27 mg）；鹽酸普萘洛爾片（山西云鵬制藥有限公司，批號為A100102，規格為每片10 mg）；鹽酸異丙腎上腺素（ISO，西南藥業股份有限公司，批號為20120322）；0.9%氯化鈉注射液（生理鹽水，河北天成藥業有限公司，批號為09122510）；無水乙醇（天津市北聯精細化學品開發有限公司，批號為20101127）；丙二醛試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號為20110315）；乳酸脫氫酶試劑盒（批號為20110315），肌酸激酶試劑盒（批號為20110315）均由南京建成生物工程研究所提供。

2　方法與結果

2.1試驗方法

2.1.1分組及給藥

取健康Wistar大鼠60只，隨機分為空白對照組，缺血模型組，普萘洛爾組，通心降脂滴丸低、中、高劑量組（分別按0.242，0.726，2.180 g/kg［5］灌胃給藥），各10只。灌胃給藥，每天灌胃1次，空白對照組與缺血模型組給予生理鹽水，普萘洛爾組給予鹽酸普奈洛爾混懸藥液，給藥劑量均為1 mL/100 g，連續灌胃7 d。

2.1.2建立急性心肌缺血模型及心電圖測量

取健康Wistar大鼠80只，烏拉坦麻醉，背位固定，測定標準肢體二導聯心電圖，篩選出心電圖正常動物60只。按簡化分層隨機法將60只Wistar大鼠分為空白對照組，缺血模型組，普萘洛爾組，通心降脂滴丸低（0.242 g/kg）、中（0.726 g/kg）、高（2.180 g/kg）劑量組，各10只。試驗前用標準肢體Ⅱ導聯測定所有大鼠的正常心電圖。測完心電圖次日開始灌胃給藥，每天灌胃1次，空白對照組與缺血模型組給予生理鹽水，普萘洛爾組給予鹽酸普奈洛爾混懸藥液。給藥劑量均為1 mL/100 g，連續灌胃7 d。灌胃第6天時，空白對照組皮下注射生理鹽水（1 mL/100 g），缺血模型組、普萘洛爾組、通心降脂滴丸低、中、高劑量組皮下注射ISO（5 mg/kg），連續注射3 d，建立大鼠急性心肌缺血模型。全部動物在末次皮下注射ISO后，作心電圖檢查，觀察S-T段變化情況。

2.1.3測定乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活力及丙二醛（MDA）含量

全部動物在末次皮下注射ISO 24 h后麻醉，主動脈取血，分離血清，按試劑盒測定方法測定各樣本LDH和CK活力。剖取心臟，用生理鹽水沖洗，剪去血管和結締組織，濾紙吸干后稱重，制備10%心臟組織勻漿，使用MDA和SOD試劑盒測定各組大鼠心臟組織勻漿中MDA含量及SOD活力。

2.1.4統計學處理

2.2試驗結果

2.2.1對心肌缺血大鼠心電圖S-T段的影響

缺血模型組大鼠心電圖S-T段明顯抬高，與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），通心降脂滴丸中、高劑量組心電圖與缺血模型組比較，S-T段均有明顯下降（P＜0.05），表明通心降脂滴丸可改善心肌梗死程度。詳見表1。

表1　對心肌缺血大鼠心電圖S-T的影響（±s，n=10）

表1　對心肌缺血大鼠心電圖S-T的影響（±s，n=10）

注：NS為生理鹽水；括號內為變化百分率；與缺血模型組相比， P＜0.05。下表同。

組別空白對照組缺血模型組普萘洛爾組通心降脂滴丸低劑量組中劑量組高劑量組劑量N S N S 1 8 . 5 0 0 m g / k g 0 . 2 4 2 g / k g 0 . 7 2 6 g / k g 2 . 1 8 0 g / k g造模前0 . 2 8 ± 0 . 1 8（1 0 0 ± 0）0 . 2 8 ± 0 . 1 8（1 0 0 ± 0）0 . 3 8 ± 0 . 2 6（1 0 0 ± 0）0 . 2 9 ± 0 . 1 8（1 0 0 ± 0）0 . 3 4 ± 0 . 2 2（1 0 0 ± 0）0 . 4 7 ± 0 . 2 3（1 0 0 ± 0）造模后0 . 3 0 ± 0 . 2 1（1 0 6 . 3 7 ± 2 1 . 3 7）0 . 4 7 ± 0 . 2 0（2 0 5 . 1 1 ± 7 7 . 8 4）0 . 4 0 ± 0 . 2 5（1 1 6 . 0 2 ± 4 8 . 5 0）0 . 4 2 ± 0 . 1 7（1 6 0 . 0 1 ± 2 7 . 5 2）0 . 4 4 ± 0 . 2 3（1 4 0 . 7 0 ± 4 4 . 1 6）0 . 5 3 ± 0 . 2 3（1 1 6 . 2 4 ± 2 4 . 2 8）

2.2.2對急性心肌缺血大鼠LDH活力的影響

與空白對照組比較，缺血模型組LDH活力顯著升高（P＜0.05）；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸高劑量組LDH活力顯著降低（P＜0.05）。詳見表2。

2.2.3對急性心肌缺血大鼠CK和SOD活力的影響

表2　對急性心肌缺血大鼠LDH活力的影響（±s，n=10）

表2　對急性心肌缺血大鼠LDH活力的影響（±s，n=10）

組別空白對照組缺血模型組普萘洛爾組通心降脂滴丸低劑量組中劑量組高劑量組劑量N S N S 1 8 . 5 0 0 m g / k g 0 . 2 4 2 g / k g 0 . 7 2 6 g / k g 2 . 1 8 0 g / k g L D H（U / L）4 2 4 5 . 1 3 ± 5 5 2 . 6 4 5 2 0 4 . 6 6 ± 2 4 7 . 2 5 4 3 3 2 . 1 4 ± 6 8 9 . 0 8 4 9 8 9 . 6 5 ± 2 2 2 . 1 0 4 7 9 3 . 6 5 ± 3 6 4 . 7 1 4 2 8 3 . 3 6 ± 7 8 1 . 2 9

與空白對照組比較，缺血模型組CK活力顯著增高（P＜0.05）；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸高劑量組CK活力顯著降低（P＜0.05）。與缺血模型組比較，通心降脂滴丸中劑量組SOD活力顯著增高（P＜0.05），高劑量組MDA含量顯著降低（P＜0.05），SOD活力顯著增高（P＜0.05）。與空白對照組比較，缺血模型組MDA含量顯著增高（P＜0.05）；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸中劑量組MDA含量顯著降低（P＜0.05），高劑量組MDA含量顯著降低（P＜0.05）。詳見表3。

表3　對急性心肌缺血CK、SOD活力及MDA含量的影響（±s，n=10）

表3　對急性心肌缺血CK、SOD活力及MDA含量的影響（±s，n=10）

組別空白對照組缺血模型組普萘洛爾組通心降脂滴丸低劑量組中劑量組高劑量組劑量N S N S 1 8 . 5 0 0 m g / k g 0 . 2 4 2 g / k g 0 . 7 2 6 g / k g 2 . 1 8 0 g / k g C K（U / L）0 . 7 5 ± 0 . 1 4 1 . 3 4 ± 0 . 3 0 0 . 7 9 ± 0 . 1 5 1 . 1 8 ± 0 . 1 9 1 . 1 4 ± 0 . 3 1 0 . 7 9 ± 0 . 2 3 S O D（U / m L）1 1 8 . 8 7 ± 7 . 6 9 7 8 . 6 7 ± 8 . 6 8 1 1 5 . 2 6 ± 6 . 4 6 1 0 0 . 7 9 ± 7 . 8 9 1 2 1 . 4 9 ± 7 . 0 5 1 1 9 . 8 7 ± 6 . 6 7 M D A（ m o l / m L）8 . 6 8 ± 0 . 4 9 1 3 . 8 8 ± 1 . 8 7 9 . 1 9 ± 1 . 5 0 1 0 . 1 6 ± 1 . 3 4 8 . 8 7 ± 1 . 5 0 9 . 0 3 ± 0 . 6 8

3　討論

ISO為β-受體激動劑，作用于支氣管β腎上腺素受體，使支氣管平滑肌松弛，增強心肌收縮力，縮短收縮期和舒張期。大劑量注射ISO可顯著降低心肌血和氧的供給量，促使心肌結構及功能嚴重損傷，最終導致心肌細胞壞死，這種急性心肌缺血損傷，人與大鼠較相似，故這種簡便易行的試驗方法常用于國內外復制心肌缺血的試驗動物疾病模型［6-7］。

LDH是參與糖酵解和糖異生工程中催化乳酸和丙酮酸之間氧化還原反應的重要酶類，CK通常存在于動物的心臟、肌肉及腦等組織的細胞漿和線粒體中，是一個與細胞內能量運轉、肌肉收縮、三磷酸腺苷（ATP）再生有直接關系的重要激酶1和2，其可逆地催化肌酸與ATP之間的轉磷酰基反應。當少量組織壞死時，LDH及CK即可大量釋放入血，以升高其在血液中的活力［8-9］。

SOD是一種源于生命體的重要抗氧化酶，能消除生物體在新陳代謝過程中產生的有害物質。心肌缺血會造成體循環缺氧，導致體內氧自由基增多，促進MDA的含量增加，而SOD可對抗與阻斷因氧自由基對細胞造成的損害，并及時修復受損細胞，復原因自由基造成的細胞傷害［10］。

高劑量通心降脂滴丸對冠脈結扎引起的局部缺血心肌有保護作用［11］，但對ISO致大鼠急性心肌缺血保護作用的試驗還未見報道。本試驗中通過皮下注射ISO建立大鼠心肌缺血損傷模型，檢測各組大鼠血清中CK，LDH，MDA的含量和心肌組織中SOD的活力，以及對ISO致心肌缺血后心電圖的影響。結果顯示，通心降脂滴丸可使心肌梗死大鼠抬高的心電圖S-T段降低，緩解心肌梗死程度，減少心肌缺血、梗死后血清中LDH和CK的釋放及心肌組織中MDA的產生，提高SOD活力，減弱心肌缺血程度，在一定程度上提高了心肌組織的耐缺血耐缺氧能力，對缺血、梗死心肌起到一定保護作用，為通心降脂滴丸臨床試驗及臨床應用提供了充分的藥效學依據。

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Protective Effect of Tongxin Jiangzhi Drops on Isoproterenol Induced Acute Myocardial Ischemia in Rats

Zhang Mengdi1，2，Lyu Xiaoli1，2，3，Bai Tuya1，2，3，Chang Fuhou1，2，3，Gao Feng2，3，Zhang Xiuhui2，3
（1.Research Center for New Drug Safety Evaluation of Inner Mongolia University，Huhehaote，Neimenggu，China010010；2.Inner Mongolia Research Center for Drug Screening，Huhehaote，Neimenggu，China010010；3.Department of Pharmacology，Medical University of Inner Mongolia，Huhehaote，Neimenggu，China010010）

ObjectiveToexploretheprotectiveeffectsof TongxinJiangzhiDropsonisoproterenol（ISO）induced acutemyocardial ischemia，providing its pharmacodynamic evidence for clinical trials and clinical application.MethodsTaking 80 healthy Wistar rats were chosen and given urethane anesthesia and supine position fixing，the determination of limb standard two-lead ECG were conducted to screen out 60 normal animals.Totally 60 healthy Wistar rats were randomly divided into control group，ischemia model group，propranolol group，Tongxin Jiangzhi Drops low dose group，middle dose group and high dose group.Acute myocardial ischemia model in rats was established by subcutaneous injection of isoproterenol.Content of creatine kinase（CK）lactate dehydrogenase（LDH）and content of malondialdehyde（MDA）in serum and activity of the super oxide dismutase（SOD）in myocardial tissue homogenate were detected. ResultsCompared with the control group，the ischemia group′s LDH，CK vitality，MDA content were significantly increased（P＜0.05）；Compared with the ischemia group，MDA content in the Tongxin Jiangzhi drops middle dose group was significantly lower（P＜0.05），SOD activity was significantly increased（P＜0.05）；LDH，CK activity and MDA of the Tongxin Jiangzhi drops high dose group were significantly decreased（P＜0.05），SOD activity was significantly increased（P＜0.05）.ConclusionTongxin Jiangzhi Drops can reduce the release of LDH and CK in serum，reduce the production of myocardial tissue MDA，increase SOD activity and decrease the degree of myocardial injury，have a protective effect on acute ischemic myocardium.

Tongxin Jiangzhi Drops；isoproterenol；acute myocardial ischemia

R285.5；R286

A

1006-4931（2016）12-0025-03

張夢迪，女，碩士研究生，研究方向為藥理學，（電子信箱）zhangmd1108@163.com；常福厚，男，教授，研究方向為生化與分子藥理學，本文通訊作者，（電子信箱）changfh@163.com。

（2016-01-10）