基于高效液相色譜法蔬果中滅多威及異丙威的殘留檢測

李智臻，徐 冬，李顯波

（1.諾安實力可商品檢測（青島）有限公司，山東青島 266012；2.青島大學(xué)，山東青島 266071）

農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題已被國家和公眾高度關(guān)注和重視，成為影響消費者“菜籃子”安全的焦點問題。特別是蔬菜水果類產(chǎn)品為了防治病蟲害、雜草及其他有害生物的破壞生長，在種植過程中添加殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、促生劑等農(nóng)藥，所以蔬果中不可避免地存在對人體健康有害的農(nóng)藥殘留[1]。而判斷農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)，檢測監(jiān)管是重要的關(guān)口，農(nóng)殘定量分析的色譜檢測法可為農(nóng)殘精準(zhǔn)把控提供依據(jù)，為消費者提供放心蔬果[2]。本文基于食品安全國標(biāo)GB 23200.112—2018，優(yōu)化的高效液相色譜法，準(zhǔn)確測量出蔬果中滅多威及異丙威的農(nóng)藥殘留物的含量[3]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

配有柱后衍生反應(yīng)裝置和熒光檢測器的液相色譜儀（Waters Alliance 2695 FD）；高速勻漿機（POLYTRON PT3100D）；低速離心機(LXJ-ILB)、振蕩混勻器（SPEX Geno/Grinder 2010）。

乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、二氯甲烷（分析純）、氯化鈉、鄰苯二甲醛（CAS 號：643-79-8）、氫氧化鈉、十水四硼酸鈉、四氫呋喃、巰基乙醇和固相萃取柱（石墨化炭黑填料500 mg，氨基填料500 mg，6 mL）。

滅多威標(biāo)準(zhǔn)品（CAS 號16752-77-5，純度99.90%）、異丙威標(biāo)準(zhǔn)品（CAS 號2631-40-5，純度99.4%）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品處理

稱取攪拌打碎試樣20 g（精確至0.01 g）至200 mL 玻璃勻漿瓶中，加入40 mL 乙腈，用高速勻漿機勻漿提取2 min，提取液過濾至裝有5 g 氯化鈉的50 mL 塑料離心管中，旋緊瓶蓋劇烈振蕩1 min 后裝入離心機（3 000 r/min）中離心5 min。準(zhǔn)確吸取20 mL 上清液至旋蒸雞心瓶中，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)近干，加入2 mL 甲醇溶解殘余物，待凈化[4]。

1.2.2 樣品凈化

將固相萃取柱用4 mL 甲醇與二氯甲烷混合溶液（體積比1 ∶99）預(yù)淋洗，當(dāng)液面達(dá)到柱吸附層頂時，加入處理好的樣品，用15 mL 離心管收集洗脫液，用3 mL 甲醇二氯甲烷混合液清洗旋蒸雞心瓶后過柱，并重復(fù)2 次，收集的洗脫液與40 ℃水浴中氮吹蒸發(fā)近干，準(zhǔn)確加入2 mL 甲醇溶液，渦旋超聲混勻，用0.22 μm 微孔濾膜過濾，待測。

1.2.3 液相色譜儀器條件

流動相加入四氫呋喃，其中A 相為10%甲醇水溶液+1%四氫呋喃，B 相為90%甲醇水溶液+1%四氫呋喃，色譜柱Waters Symmetryshield RP C18柱（粒徑5 μm，250 mm×4.6 mm），柱溫42 ℃，熒光檢測器激發(fā)波長330 nm，發(fā)射波長465 nm[5]。流動相梯度設(shè)置如表1 所示。

表1 流流動相梯度設(shè)置表

1.2.4 柱后衍生系統(tǒng)條件

溫度95 ℃，衍生溶液A 為0.05 mol/L 氫氧化鈉；衍生溶液B 為鄰苯二甲醛/硼酸緩沖液（OPA 試劑），其溶液制備為10.4 g 十水四硼酸鈉和0.4 g 氫氧化鈉溶于800 mL 純水中，加入100 mL 溶有30 mg 鄰苯二甲醛的甲醇溶液，將兩種溶液充分混合后加入25 μL 巰基乙醇混勻即可。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理優(yōu)化

該檢測方法基于GB 23200.112—2018，在樣本提取方面將國家標(biāo)準(zhǔn)方法的振蕩后靜置30 min 等待鹽析分層，優(yōu)化為振蕩后離心加速鹽析分層，從而使上清液更加澄清，同時減少不必要的等待時間。在樣品濃縮方面，國家標(biāo)準(zhǔn)方法采用高溫水浴氮吹的方式，會導(dǎo)致提取液飛濺至氮吹針上，使實驗結(jié)果降低且蒸發(fā)效率低，同時高溫會增加實驗室環(huán)境危險性。該實驗優(yōu)化為40 ℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸干，溫和操作避免提取液飛濺、污染和成分損失，減壓蒸發(fā)的效率高于傳統(tǒng)的高溫氮吹形式，縮短實驗前處理時間，提高效率。

2.2 液相色譜條件優(yōu)化

GB 23200.112—2018 方法的流動相為純水和甲醇，本方法在流動相加入了少量的1%四氫呋喃。經(jīng)對比試驗驗證表明，四氫呋喃在反相色譜中具有很強的洗脫能力，加入1%四氫呋喃的流動相提升農(nóng)藥的分離度，峰型得到改善。不過由于四氫呋喃的自身不穩(wěn)定性，應(yīng)避免使用生產(chǎn)日期過久的試劑，同時四氫呋喃本身需在干燥避光條件下保存，流動相也應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.3 樣品分析及回收率

在蔬果樣品中加入不同濃度的滅多威及異丙威進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)添加檢測。其濃度分別為0.05 mg/kg、0.20 mg/kg。試樣分析獲得的蔬果（菠菜、蘋果）中農(nóng)藥添加回收率及精密度結(jié)果見表2。由表2 結(jié)果可知，對于菠菜全部農(nóng)藥回收率最低為73.3%，最高為74.7%，對于蘋果全部農(nóng)藥回收率最低為80.2%，最高為87.7%。精密度均未超過10%，證明該方法有較高的精密度，且各水平回收率基本一致，具備比較穩(wěn)定的前處理和儀器條件，能夠分析樣品中農(nóng)藥殘留的情況。

表2 回收率及精密度

3 結(jié)論

因異丙威和滅多威均為廣譜速效殺蟲劑，因殘存期短的特點被廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品種植中，但不合理使用會存在農(nóng)殘超標(biāo)問題，影響食品的安全性。該檢測方法選取菠菜為代表性蔬菜，蘋果為代表性水果，采用振蕩離心分層澄清、40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)減壓蒸干的樣品處理，通過液相色譜流動相添加1%四氫呋喃的定量檢測，能夠同時獲得精準(zhǔn)的兩種農(nóng)藥的殘留數(shù)值，具有良好的穩(wěn)定性和精密度。并且該方法相對國標(biāo)前處理操作更加簡便實用，且改善了部分實驗操作中的不穩(wěn)定性因素。