市售蜂蜜中花粉粒總數(shù)測定

徐姍娜，盧 軍，侯鴻飛，唐 蕾，金菊萍

（漢中市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)檢測中心，陜西漢中 723000）

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜，與自身分泌物結(jié)合后，經(jīng)充分釀造而成的天然甜物質(zhì)[1]。蜜蜂采集花蜜時(shí)會(huì)吸入一部分花粉到蜜囊中，花蜜中不可避免地混入了蜜源植物的花粉，而每種花粉都有自己特有的形態(tài)特征，所以花粉是天然蜂蜜具有確定性、穩(wěn)定性和追溯性的天然標(biāo)識(shí)物。根據(jù)蜂蜜中花粉的種類和含量可區(qū)分蜂蜜的品種、辨別優(yōu)劣蜂蜜。

陜西省漢中市北依秦嶺，南屏巴山，氣候溫和濕潤、干濕有度，造就了物種的多樣性。森林覆蓋率為52%，林草的植被率達(dá)60%，境內(nèi)的兩大水系（漢江和嘉陵江）均為長江一級(jí)支流，是國家“南水北調(diào)”中線工程的水源地。漢中具有良好的蜂養(yǎng)殖自然生態(tài)環(huán)境資源，土蜂養(yǎng)殖歷史悠久，主要生產(chǎn)的蜜種是油菜花蜜和百花蜜。漢中是傳統(tǒng)的油菜種植生產(chǎn)基地，全市有7.5 億m2的油菜花田，為當(dāng)?shù)胤淙禾峁┝顺渥忝墼础６匕蜕矫}花草資源豐富，大量的野生山花以及野生或人工栽培的中草藥資源，如黨參、山茱萸、大黃、天麻、杜仲、厚樸、五味子等，都是本地產(chǎn)百花蜜的重要蜜源。近年來，漢中市蜂蜜產(chǎn)業(yè)得到突飛猛進(jìn)發(fā)展，2020年7 月20 日實(shí)施的優(yōu)質(zhì)漢中蜂蜜（T/HZSBX 02—2020）[1]和優(yōu)質(zhì)漢中土蜂蜜（T/HZSBX 03—2020）[2]中均將蜂蜜中花粉濃度列為特征指標(biāo)，參考限量值分別為≥10 000 個(gè)/mL和≥14 000 個(gè)/mL。

本研究隨機(jī)抽取了13 批漢中市市面上銷售的蜂蜜，根據(jù)《蜂蜜中植物花粉的測定方法》（GB/T 23194—2008）[3]，分別測定其全部花粉粒含量，以對其品質(zhì)優(yōu)劣進(jìn)行初步判定。

1 材料與方法

1.1 材料

13 批蜂蜜，購于漢中市市場。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑

硫酸，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；乙酸，天津市天力化學(xué)試劑有限公司；乙酸酐，天津市天力化學(xué)試劑有限公司；甘油，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；苯酚，天津市天力化學(xué)試劑有限公司。

1.2.2 儀器

冷凍離心機(jī)H2100R，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-8，國華電器有限公司；光學(xué)顯微鏡Ci-L，尼康儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試樣的制備

未結(jié)晶的樣品，攪拌均勻備用。有結(jié)晶的樣品，在密閉情況下，置于55 ℃左右的水浴中溫?zé)幔袷帲龢悠啡咳诨髷噭颍鋮s至室溫備用。稱取均勻蜜樣25 g，加入40 ℃的50 mL 蒸餾水，使蜂蜜均勻溶解。

1.3.2 花粉粒總數(shù)測定

將試樣溶液倒入離心管中，以2 000 r/min 的速度離心10 min，棄去55 mL 的上清液，加入5 mL 乙酸并拌勻，浸泡2 h。進(jìn)行離心（2 000 r/min，10 min），棄去10 mL 上清液，加入新鮮配制的乙酸酐和硫酸的混合液6 mL，并拌勻，然后將離心管放入80～90 ℃水浴中加熱7 min。停止加熱后，迅速離心（2 000 r/min，10 min），棄去5 mL 上清液，加10 mL 蒸餾水洗滌，離心水洗3 次后，棄去上清液，使試樣溶液留下約5 mL 的樣液。加入1 mL 50%的甘油保存，并加入2～3 滴苯酚作為防腐劑。

利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板制片，靜置5 min后，于顯微鏡下計(jì)數(shù)，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。本次采用的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板為25 中方格、16 小方格款。

1.4 不同離心轉(zhuǎn)速對每個(gè)計(jì)數(shù)室花粉粒總數(shù)的影響測定

以6 號(hào)蜂蜜為樣本，按照1.3.1 和1.3.2 方法將步驟中所使用的離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間依次設(shè)定為4 000 r/min 10 min、6 000 r/min 10min、8 000 r/min 10 min、10 000 r/min 10 min、10 000 r/min 5 min，分別計(jì)數(shù)花粉粒總數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 13 批蜂蜜花粉粒總數(shù)的測定

按照1 mL 樣液中的總花粉粒數(shù)=25 個(gè)中方格總花粉粒數(shù)×104計(jì)算，全部13 批蜂蜜花粉粒總數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。由表1 可知，不同品牌、不同批次的蜂蜜中花粉粒總量差距較大，其中2、4、7 號(hào)樣品中花粉粒數(shù)量為0，均購自本地超市，屬大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)品。導(dǎo)致花粉粒數(shù)為0 的原因有可能是這些品牌的蜂蜜在經(jīng)過高密度過濾，移除了花粉在內(nèi)的各種雜質(zhì)[4]，花粉一方面會(huì)影響到蜂蜜的營養(yǎng)價(jià)值，另一方面大規(guī)模生產(chǎn)中的高溫加熱也會(huì)直接影響蜂蜜的口感和風(fēng)味。因此，選擇小規(guī)模生產(chǎn)的土蜂蜜，可以最大程度地品嘗到蜂蜜的原始風(fēng)味。廣大消費(fèi)者在購買時(shí)可以根據(jù)自己的需求選購。

表1 13 批蜂蜜花粉粒總數(shù)測定結(jié)果

2.2 不同離心轉(zhuǎn)速對每個(gè)計(jì)數(shù)室花粉粒總數(shù)的影響

以6 號(hào)蜂蜜為樣本，測定不同離心轉(zhuǎn)速對每個(gè)計(jì)數(shù)室花粉粒總數(shù)的影響（見表2），由表2 可知，增大離心轉(zhuǎn)速后所得花粉粒總數(shù)與國標(biāo)要求的2 000 r/min 比較并無顯著差異(P＞0.05)，而將轉(zhuǎn)速提高至10 000 r/min，時(shí)間縮短至5 min 時(shí)所得花粉粒總數(shù)與國標(biāo)要求的2 000 r/min 離心10 min 比較無顯著性差異（P＞0.05），因此在實(shí)驗(yàn)室大批量測定蜂蜜中花粉濃度且條件允許時(shí)，可以采用提高轉(zhuǎn)速縮短時(shí)間的方式加快試驗(yàn)進(jìn)度。

表2 不同離心轉(zhuǎn)速對每個(gè)計(jì)數(shù)室花粉粒總數(shù)的影響

3 討論

本研究以13 批漢中市市售蜂蜜為研究對象，采用國標(biāo)方法進(jìn)行了測定，因本次試驗(yàn)所采樣品多數(shù)為本地生產(chǎn)的百花蜜，所以并未測定單一種類花粉的含量和濃度，而是測定總花粉粒數(shù)量。結(jié)果顯示，不同品牌、批次的蜂蜜中花粉含量差異較大。其中兩種高山棒棒蜜所含花粉含量最高，可能與取蜜方式、過濾效率有直接關(guān)系，因高山棒棒蜜多采用壓榨取蜜法，會(huì)混入更多蜂脾和花粉，也帶來了更高的營養(yǎng)價(jià)值。有研究顯示壓榨蜂蜜中的花粉含量可比分離蜂蜜高出4、5 倍之多[5]。本次試驗(yàn)顯示不同蜂蜜的花粉粒測定的確可以反映蜂蜜的品質(zhì)高低，國標(biāo)并沒有將蜂蜜中花粉粒含量作為判定蜂蜜真假的依據(jù)，但筆者認(rèn)為蜂蜜中花粉粒含量的測定試驗(yàn)操作簡單、耗時(shí)短、成本低，可以作為一種判斷蜂蜜真?zhèn)蔚某鹾Y手段，經(jīng)檢測不含花粉粒或者所含花粉粒種類與標(biāo)示蜜源不吻合者，再通過蛋白質(zhì)為“內(nèi)標(biāo)”的同位素檢測法或高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行真假的鑒定。