HPV-DNA 和RNA 狀態與宮頸癌前病變患者病情變化的關系分析

楊志峰

高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk liuman papillomavirus，HR-HPV)的持續感染是宮頸癌發生的重要危險因素［1］，通過檢測HPV 可以對患者宮頸癌起到一定的預測作用。目前臨床上廣泛應用的HPV 檢測方法是HPV-DNA 檢測，其預測病變風險的效果好于細胞學檢測［2］。不過單純的病毒載量檢測無法具體分辨HPV 病毒型別，且多數患者為HPV 一過性感染，HPV-DNA 檢測在宮頸癌早期病變以及患者病情進展的診斷價值不高。研究發現［3］，機體中HPV 病毒的復制極有可能與高危型HPV 中的E6、E7 編碼的癌蛋白有關，微小核糖核酸(miRNA)失調在宮頸癌變及進展的早期階段較常出現，可以反映宿主對HPV 感染的反應，從而用于宮頸癌的早期診斷。本次研究對HPVDNA 與RNA 狀態與宮頸癌前病變患者病情變化的相關性進行了分析討論，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選擇2019 年1～12 月在本院經組織病理學檢驗后確診為宮頸疾病的100 例患者，根據病情分為A 組(宮頸癌患者，33 例)與B 組(宮頸癌前病變患者，67 例)，另選擇100 例同期在本院進行宮頸癌篩查的健康女性作為C 組。A 組年齡27～48 歲，平均年齡(35.47±4.63)歲；孕次0～5 次，產次0～3 次。B 組年齡26～47 歲，平均年齡(35.25±4.15)歲；孕次0～4 次，產次0～3 次；分型：CIN Ⅰ型34 例，CIN Ⅱ型20 例，CIN Ⅲ型13 例。C 組年齡25～49 歲，平均年齡(35.33±4.56)歲；孕次0～3 次，產次0～2 次。三組年齡、孕次、產次等一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本次研究經倫理委員會批準。宮頸疾病患者納入標準：①年齡≥18 歲；②患者經病理學檢查明確病情；③符合《中國宮頸癌及癌前病變規范化診療指南(試行)》中宮頸疾病診斷標準［4］；④配合檢查者；⑤了解研究內容，自愿參加并簽訂知情同意書。宮頸疾病患者排除標準：①有子宮手術史；②幼稚子宮；③合并其他惡性腫瘤；④臨床資料不全；⑤中途退出者。健康女性納入標準：①年齡≥18 歲；②因外陰瘙癢、陰道流血、陰道分泌物增多、白帶異常等癥狀進行宮頸癌篩查；③配合檢查進行；④了解研究內容，自愿參加并簽訂知情同意書。健康女性排除標準：①妊娠期和哺乳期患者；②有子宮手術史；③幼稚子宮；④臨床資料不全；⑤中途退出者。

1.2 方法 所有研究對象均進行HPV-DNA 和HPV E6/E7 mRNA 檢測。檢測方法：檢查前3 d 禁止性生活，取膀胱截石位，陰窺充分暴露宮頸，用棉簽拭擦宮頸表面分泌物，用無菌宮頸采樣器緊貼宮頸表面順時針旋轉3 周取樣。將取樣后的刷頭浸入細胞保存液并充分漂洗，洗脫標本然后沿刷柄折痕處折斷保留刷頭，旋緊管蓋，貼好標簽后送檢。①HPV-DNA：應用聚合酶鏈式擴增(PCR)反向點雜交技術檢測高危HPV-DNA，包 括HPV16、18、31、33、35、39、45、S1、52、56、58、59、66、68、73。陽性標準：檢出任一型高危HPV-DNA 含量＞1 pg/ml。②HPV E6/E7 mRNA：采用APTIMA HPV 實驗進行檢測，將提取的mRNA 應用轉錄介導擴增(TMA)法擴增，使用HPA法對擴增后的產物進行檢測，通過選擇劑淬滅未雜交探針上的熒光區分雜交和未雜交探針，然后使用光度計測量雜交混合物熒光光量子，分析信號與截點比值(S/CO)進行結果判定。陽性標準：檢測值≥1。HPV-DNA 和HPV E6/E7 mRNA 檢測任一結果陽性的患者進行鏡下組織病理學活檢。其中檢驗結果為宮頸癌前病變的患者按照進行CINⅠ～Ⅲ分型。

1.3 觀察指標 ①比較各組HPV 感染情況及其亞型分布；②比較各組HPV-DNA 負荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達量情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS21.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示，采用t檢驗；計數資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組HPV 感染情況及其亞型分布比較 B 組單一感染率低于A 組，多重感染率高于A 組，差異有統計學意義(P＜0.05)；C 組所有受檢者無感染發生。在亞型分布上，A 組、B 組中HPV16 占比高于其他型，B 組HPV16 占比高于A 組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組HPV 感染情況及其亞型分布比較 ［n(%)］

2.2 各組HPV-DNA 負荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達量情況比較 A、C 組HPV-DNA 負荷量低于B 組，差異有統計學意義(P＜0.05)；B 組中HPV-DNA 負荷量CIN Ⅲ型＞CIN Ⅱ型＞CINⅠ型，差異無統計學意義(P＞0.05)。在HPV E6/E7 mRNA 表達量上，A 組＞B 組＞C 組，差異有統計學意義(P＜0.05)；B 組中HPV E6/E7 mRNA 表達量CIN Ⅲ型＞CIN Ⅱ型＞CINⅠ型，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 各組HPV-DNA 負荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達量情況比較()

表2 各組HPV-DNA 負荷量、HPV E6/E7 mRNA 表達量情況比較()

注：與C 組比較，aP＜0.05；與A 組比較，bP＜0.05

3 討論

HPV 感染宮頸細胞后會將其DNA 通過非同源重組方式與宿主細胞基因進行整合，進而大量轉錄致癌基因E6、E7 的mRNA，引起HPV E6/E7 癌蛋白高表達［5］。然后癌蛋白分別與人體P53 蛋白和pRb 蛋白結合，使腫瘤抑制基因p53 與pRb 失活，損傷細胞DNA，激活端粒酶活性，最終引起細胞過度增殖，觸發細胞永生化及惡性轉化，造成惡性腫瘤發生［6］。因此，臨床上通過檢測HPV E6/E7 mRNA 的表達狀況可以對患者HPV DNA 與宿主細胞基因的整合情況進行判斷，從而分析患者是否為一過性HPV 感染或宮頸癌前病變，有利于臨床上對宮頸癌前病變患者的診斷以及病情進展的判斷。

本次研究中對HPV-DNA 和RNA 狀態對宮頸癌前病變患者的病情變化的關系進行分析，結果顯示，B 組單一感染率55.22%低于A 組的75.76%，多重感染率44.78%高于A 組的24.24%，差異有統計學意義(P＜0.05)；C 組所有受檢者無感染發生。有研究顯示［7］HPV-DNA 負荷高低與患者的病情顯著相關，即 HPVDNA 負荷高病變的風險遞增，HPV-DNA 與宮頸疾病患者病情相關性還有待進一步研究證實。HPV E6/E7 mRNA 表達量檢測情況則顯示隨宮頸患者病情進展，表達量呈明顯上升趨勢，B 組中HPV E6/E7 mRNA 表達量CIN Ⅲ型＞CIN Ⅱ型＞CINⅠ型，差異有統計學意義(P＜0.05)。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA 檢測相較于HPVDNA 檢測在判斷宮頸癌前病變患者疾病進展情況上有著更好的應用價值，臨床上通過綜合應用相關檢測方法進行宮頸癌篩查可以更好的實現對疾病的早期診斷、早期治療，從而為女性宮頸健康提供過更好的保障。