精制新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體效果研究

任培森，楊 燚，呂文靜，朱秀同，陳紅秀，尤永君

（天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司，天津 300381）

新型鴨呼腸孤病毒（novel duck reovirus，NDRV）是一種RNA病毒，能造成鴨法氏囊出血、肝臟不規(guī)則出血斑或塊狀壞死，可引起番鴨、半番鴨、麻鴨和北京鴨等水禽發(fā)病[1-5]。該病被命名為“新肝病”或“鴨出血性壞死性肝炎”。該病可導(dǎo)致雛鴨出雛率低、免疫抑制和生長(zhǎng)遲緩，從而降低鴨飼料的利用率。該病無明顯季節(jié)性，感染有明顯的日齡依賴性，發(fā)病鴨一般在30日齡內(nèi)。鴨的日齡越小，發(fā)病率和病死率越高[6-7]。

2017年以來，我國(guó)山東、河南、江蘇等地區(qū)暴發(fā)新型鴨呼腸孤病毒病，發(fā)病率為5.0%～32.5%，病死率達(dá)4%～20%[8-11]。研究表明，新型鴨呼腸孤病毒不僅可水平傳播，還可以經(jīng)卵垂直傳播[12-13]。有報(bào)道稱，新型鴨呼腸孤病毒能經(jīng)過內(nèi)部基因組節(jié)段的重組和進(jìn)化使病毒出現(xiàn)新的遺傳和抗原變異，且給鴨群接種商品化滅活苗也不能完全預(yù)防病毒的感染和傳播[14-15]。國(guó)內(nèi)目前尚無商品化的疫苗。為了有效控制該病的發(fā)生，本試驗(yàn)使用卵黃抗體做緊急預(yù)防和治療，為該病的預(yù)防和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 卵黃抗體

新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體（250 mL/瓶），批號(hào)為210701、210702，AGP 效價(jià)均為1∶4，由天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司空港經(jīng)濟(jì)區(qū)分公司制備。

1.1.2 新型鴨呼腸孤病毒

RPVA 1301-Z株為凍干毒，毒種批號(hào)為NDRV-Q-01，規(guī)格為2.0 mL/瓶，由天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司分離，鑒定，保管和供應(yīng)。

1.1.3 雛鴨

雛鴨購(gòu)自聊城市東昌府區(qū)恒康養(yǎng)殖專業(yè)合作社，雛鴨未進(jìn)行疫苗免疫，抗體檢測(cè)陰性，未發(fā)生過鴨出血壞死性肝炎。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

取3、5、7 日齡健康易感雛鴨各100 只，其中90 只肌肉注射新型鴨呼腸孤病毒強(qiáng)毒RPVA1301-Z 株強(qiáng)毒1.0 mL（含100 ID50）。攻毒24 h 后，取其中3、5、7 日齡分別80 只肌肉注射210701 批新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體進(jìn)行治療，3 日齡鴨注射劑量為0.2、0.3、0.5、1.0 mL/只，不同劑量組分別20 只雛鴨；5、7 日齡鴨為0.3、0.5、1.0、1.5 mL/只，不同劑量組分別20 只雛鴨。取同批3、5、7 日齡雛鴨各10 只不注射抗體作為攻毒對(duì)照，10 只作為健康對(duì)照，不攻毒也不接種卵黃抗體，同條件下隔離飼養(yǎng)觀察5 日。使用210702 批新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體重復(fù)試驗(yàn)1 次。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

每日記錄觀察期內(nèi)各組雛鴨的發(fā)病、存活情況，統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況、治愈率。每次觀察期結(jié)束后均剖殺所有組的雛鴨，重點(diǎn)檢查肝臟、脾臟、法氏囊病變情況，以攻毒對(duì)照組至少80%雛鴨出現(xiàn)新型呼腸孤病毒感染導(dǎo)致的肝臟或脾臟有典型壞死癥狀，健康對(duì)照組應(yīng)100%健康，為試驗(yàn)成立，計(jì)算抗體治愈率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同劑量卵黃抗體治療試驗(yàn)結(jié)果（210701 批次）（見表1）

表1 不同劑量卵黃抗體治療試驗(yàn)結(jié)果（210701批次）Tab.1 Therapeutic results of different dose of yolk antibody（210701 batch）

由表1可知，剖檢發(fā)病雛鴨，攻毒對(duì)照組90%～100%雛鴨有典型病變；健康對(duì)照組雛鴨100%健活且無異常，說明前期處理滿足后續(xù)試驗(yàn)要求。隨著卵黃抗體劑量的增大，雛鴨的治愈率隨之增加。3日齡雛鴨以0.2 mL卵黃抗體治療，治愈率為50%；以0.3 mL治療，治愈率為85%；以0.5、1.0 mL治療，治愈率為100%。5、7日齡雛鴨，以0.3 mL卵黃抗體治療，治愈率為40%～50%；以0.5 mL治療，治愈率為85%～90%；以1.0、1.5 mL治療，治愈率為100%。

2.2 不同療劑量卵黃抗體治療試驗(yàn)結(jié)果（210702 批次）（見表2）

表2 不同療劑量卵黃抗體治療試驗(yàn)結(jié)果（210702批次）Tab.2 Therapeutic results of different dose of yolk antibody（210702 batch）

由表2 可知，剖檢發(fā)病雛鴨，攻毒對(duì)照組90%～100%發(fā)病，有典型病變；健康對(duì)照組100%健活且剖檢無異常。3 日齡雛鴨，以0.2 mL 卵黃抗體治療，治愈率為55%；以0.3 mL 治療，治愈率為80%；以0.5、1.0mL 治療，治愈率為100%。5、7日齡雛鴨，以0.3 mL 卵黃抗體治療，治愈率為40%～50%，以0.5 mL 治療，治愈率為85%；以1.0、1.5 mL治療，治愈率為100%。

2.3 卵黃抗體治愈效果

由表1、表2 可知，攻毒對(duì)照組均為90%～100%發(fā)病；健康對(duì)照組100%健活，說明兩個(gè)批次卵黃抗體試驗(yàn)結(jié)果均可靠。3 日齡雛鴨，以0.2 mL 卵黃抗體治療，治愈率為52.5%；0.3 mL治療，治愈率為82.5%；0.5、1.0 mL治療，治愈率為100%。5、7日齡雛鴨，以0.3 mL卵黃抗體治療，治愈率為37.5%～42.5%；0.5 mL治療，治愈率為85%～87.5%；1.0、1.5 mL治療，治愈率為100%。

3 討論

近年來，新型鴨呼腸孤病毒病在全國(guó)各地區(qū)流行趨勢(shì)增強(qiáng)，同一養(yǎng)殖企業(yè)不同年份分離的病毒毒株之間生物學(xué)特性也存在一定的差異，因此對(duì)該病的預(yù)防已經(jīng)逐漸成為水禽養(yǎng)殖戶的防控重點(diǎn)[16-17]。新型鴨呼腸孤病毒病可導(dǎo)致肝臟、脾臟和法氏囊的淋巴細(xì)胞變性壞死，從而引起免疫抑制[18]，使疫苗免疫失敗，同時(shí)可能導(dǎo)致患鴨繼發(fā)感染，造成水禽養(yǎng)殖業(yè)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。新型鴨呼腸孤病毒病發(fā)病日齡低，雛鴨即使免疫疫苗，但可能疫苗尚未產(chǎn)生有效抗體，雛鴨已經(jīng)發(fā)病，新型鴨呼腸孤病毒抗體對(duì)于緊急預(yù)防、治療有著重要的意義。卵黃抗體注射雛鴨后，抗體在體內(nèi)能持續(xù)存在一段時(shí)間，并產(chǎn)生被動(dòng)免疫保護(hù)作用。

本研究中，不同日齡雛鴨人為感染新型鴨呼腸孤病毒24 h后，進(jìn)行注射卵黃抗體治療，重復(fù)試驗(yàn)2次。3日齡雛鴨0.5 mL/只，治愈率均可達(dá)到100%；5、7 日齡鴨1.0 mL/只，治愈率均可達(dá)到100%；3～7 日齡的雛鴨0.3 mL/只，均有不同程度的治療效果。抗體試驗(yàn)組存活雛鴨剖檢無病理變化；攻毒對(duì)照組雛鴨90%～100%發(fā)病。攻毒對(duì)照組發(fā)病的雛鴨，肝臟、脾臟均可見典型的出血、壞死，部分法氏囊可見出血性病理變化；健康對(duì)照組雛鴨均100%健活，剖檢無病理變化。本試驗(yàn)僅對(duì)人為感染24 h后的雛鴨進(jìn)行卵黃抗體治療，未進(jìn)行更長(zhǎng)感染時(shí)間后的治療，主要是想模擬臨床感染初期，確認(rèn)抗體的治療效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，在鴨群感染初期，對(duì)已感染新型鴨呼腸孤病毒但未出現(xiàn)臨床癥狀的雛鴨及時(shí)注射抗體進(jìn)行治療，新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體效果良好。因此，建議在臨床上治療新型鴨呼腸孤病毒引起的鴨出血壞死性肝炎，應(yīng)早診斷早治療，推薦新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體臨床預(yù)防治療使用劑量為5 日齡以下雛鴨，0.5 mL/只；5～7 日齡雛鴨，1.0 mL/只。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，新型鴨呼腸孤病毒卵黃抗體對(duì)于感染初期的雛鴨有確切的治療效果，且不同批次卵黃抗體治療結(jié)果具有可重復(fù)性，具有臨床應(yīng)用推廣的價(jià)值。