Th1/Th2細胞因子譜對濾泡性淋巴瘤的臨床意義

陳月苗　翁珊珊　鄭翠蘋　蔡小平　吳圣豪　石岳堅　黃健

[關鍵詞] 淋巴瘤;濾泡性;細胞因子譜;白細胞介素類

[中圖分類號] R733.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）23-0025-05

Clinical significance of Th1/Th2 cytokine profiles in follicular lymphoma

CHEN Yuemiao? ?WENG Shanshan? ?ZHENG Cuiping? ?CAI Xiaoping? ?WU Shenghao? ?SHI Yuejian? ?HUANG Jian

Department of Blood Chemotherapy， Wenzhou Central Hospital in Zhejiang Province， Wenzhou? ?325000， China

[Abstract] Objective To study the levels of Th1/Th2 cytokine profiles in peripheral blood of patients with follicular lymphoma at initial diagnosis， and to understand their significance in the development of disease. Methods A total of 30 patients with follicular lymphoma diagnosed in our hospital from January 2015 to June 2019 were selected. The levels of peripheral blood Th1/Th2 cytokine profiles in selected patients at initial diagnosis and after treatment were determined by CBA technology， and compared with those in 30 healthy persons in our hospital. The clinical significance of cytokine profiles was discussed. Results ①The levels of IL-2， IL-6， IL-10 and TNF in 30 patients with follicular lymphoma at initial diagnosis were higher than those in healthy persons.②In patients with follicular lymphoma， the levels of IL-2， IL-10 and IFN-γ in the lactate dehydrogenase （LDH） increased group were higher than those in the normal LDH group（Wilcoxon W values? were 102.500， 89.000， 95.500， and P values were 0.021， 0.004， 0.009）. The levels of IL-2， IL-4， IL-10 and IFN-γ in the β2 microglobulin （β2-MG） increased group were higher than those in the normal β2-MG group（Wilcoxon W values? were 76.500， 77.500， 69.500， 63.500， and P values? were 0.026， 0.029， 0.011， and 0.005）. The level of IL-2 in the high-risk group [Follicular Lymphoma International Prognostic Index （FLIPI） score 3 to 5] was significantly higher than that in the low-and middle-risk group （score 0 to 2） （Wilcoxon W value was 125.000， P value was 0.010）.③After treatment， the levels of IL-2， IL-6， IL-10 and TNF in the 30 patients with follicular lymphoma were significantly lower than those at initial diagnosis. Conclusion The levels of IL-2， IL-6， IL-10 and TNF in peripheral blood of patients with follicular lymphoma at initial diagnosis are higher than those in normal physical exam. The expression levels of cytokines and clinical characteristics of patients with follicular lymphoma are correlated.

[Key words] Lymphoma; Follicular; Cytokine profile; Interleukins

濾泡性淋巴瘤（Follicular lymphoma，FL）由不同比例的中心細胞和中心母細胞構成其腫瘤性濾泡[1]，約占我國非霍奇金淋巴瘤（Non-hodgkin lymphoma，NHL）的8.1%～23.5%[2]，在西方國家占20%左右，居東南亞NHL第二位[3]。FL的臨床表現不一，以無痛性外周淋巴結腫大為主要癥狀，易引起骨髓侵犯。利妥昔單抗、氟達拉濱及苯達莫司汀[4-5]等藥物的使用使FL的治療效果明顯改善。但FL在臨床、遺傳和分子水平上表現出明顯的異質性[6]，且不可治愈，大部分患者經標準治療后最終仍復發，甚至部分患者短期內迅速進展。細胞因子是由腫瘤細胞及周圍的免疫細胞經刺激而產生分泌的小分子蛋白質，主要參與免疫應答調節、抗腫瘤、刺激造血功能及介導炎癥反應等。本文檢測初診FL患者的外周血細胞因子水平，并研究其與FL疾病發展的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2019年6月期間經病理學證實的在我院血液科初診的FL患者，排除標準：①免疫缺陷或免疫抑制的患者;②合并感染的患者。另外隨機選取30例我院體檢中心健康志愿者為對照組。FL組30例，其中男16例，女14例，年齡39～82歲，平均（65.27±12.33）歲;健康對照組30例，其中男20例，女10例，年齡34～82歲，平均（64.10±11.27）歲。兩組患者的性別、年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

采用標準治療R-CHOP方案化療，具體為：利妥昔單抗375 mg/m2 d1靜脈滴注+環磷酰胺750 mg/m2 d2靜脈滴注+長春新堿1.4 mg/m2 d2靜脈滴注（最大量2 mg）+多柔比星50 mg/m2 d2靜脈滴注+潑尼松100 mg d2～6口服。

1.3 觀察指標

抽取患者初診時、R-CHOP方案治療2個療程后和對照組的外周血，通過流式細胞微球陣列（Flow cytometric microsphere array，CBA）技術檢測其細胞因子水平，并抽取FL患者初診時的外周血檢測血常規及血生化。所有患者均已知情同意。

1.4 細胞因子檢測方法

檢測試劑為流式細胞微球陣列（CBA）人Th1/Th2/Th17 試劑盒（BD CBA Human Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit，BD Biosciences）。檢驗步驟如下：取2 mL外周血標本在無菌條件下置于37℃的水浴箱，2 h后分離備用。人Th1/Th2/Th17 試劑盒放置在室溫1 h后將白細胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）、白細胞介素-4（Interleukin-4，IL-4）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白細胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）、腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF）、干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）捕獲微球混合，200×g離心5 min后棄去上清液，并加入同體積的血清樣本增強緩沖液。重懸微球避光反應30 min，每FACS管加入50 μL待測血清，50 μL混合捕獲微球和標準品，50 μL藻紅蛋白（Phycoerythrin，PE）熒光抗體混勻。室溫下避光反應3 h，每管加1 mL洗液，200×g離心5 min，每管加300 μL洗液，于4 h內在流式細胞分析儀（BD FACS Calibur，美國）上進行檢測。用CBA軟件檢測分析獲取的數據，從而計算出樣本中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的含量。

1.5 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量數據采用[M（P25、P75）]表示，IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ各項指標的比較采用Wilcoxon秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 健康志愿者和初診濾泡性淋巴瘤患者的外周血細胞因子水平比較

健康志愿者血液中細胞因子 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF和IFN-γ的表達水平分別為2.91（2.05， 4.21）pg/mL、2.95（1.79，4.52）pg/mL、6.31（4.15，16.75）pg/mL、6.72（3.57，13.75）pg/mL、4.05（2.54，6.53）pg/mL、5.35（3.15， 16.65）pg/mL，初診FL患者外周血 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的表達水平分別為6.02（1.87， 19.65）pg/mL、3.49（2.05，8.95）pg/mL、13.15（9.98， 26.65）pg/mL、16.65（14.76，33.75）pg/mL、14.05（8.71， 31.65）pg/mL、9.17（5.35，18.34）pg/mL。初診FL 組患者血液中的 IL-2、IL-6、TNF、IL-10表達水平均明顯高于健康體檢者，差異均有統計學意義（Wilcoxon W值分別為776.000、695.000、533.500、626.000，P值分別為0.040、0.001、0.000、0.000）。

2.2 初診濾泡性淋巴瘤患者的外周血細胞因子表達水平和臨床特征的相關性

在不同的性別或者年齡段，初診FL 患者外周血的細胞因子水平與對照組比較，差異均統計學意義（P>0.05）。初診 FL 患者中，乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase，LDH）升高組 IL-2、IL-10、IFN-γ的表達水平高于LDH正常組（Wilcoxon W值分別為102.500、89.000、95.500，P值分別為0.021、0.004、0.009）;β2微球蛋白（β2 microglobulin，β2-MG）升高組 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平高于β2-MG正常組（Wilcoxon W值分別為76.500、77.500、69.500、63.500，P值分別為0.026、0.029、0.011、0.005）;高危組[濾泡性淋巴瘤國際預后指數（Follicular lymphoma international prognostic index，FLIPI）評分3～5分]IL-2水平明顯高于低中危組[評分0～2 分]（Wilcoxon W值為 125.000，P值為0.010），其余兩組細胞因子的差異比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.3 初診FL患者治療前與治療后外周血細胞因子水平比較

FL 患者治療前外周血IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的表達水平分別為6.02（1.87，19.65）pg/mL、3.49（2.05，8.95）pg/mL、13.15（9.98，26.65）pg/mL、16.65（14.76，33.75）pg/mL、14.05（8.71，31.65）pg/mL、9.17（5.35， 18.34）pg/mL。FL 患者治療后外周血 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF及IFN-γ的表達水平分別為2.02（1.98， 4.95）pg/mL、3.75（1.94，8.05）pg/mL、8.55（5.32，22.65）pg/mL、8.05（4.17，19.25）pg/mL、4.53（2.45，10.05）pg/mL、5.21（3.24， 33.75）pg/mL。初診FL患者經RCHOP方案治療2個療程后外周血 IL-2、IL-6、TNF、IL-10 的表達水平較治療前下降，治療前后兩組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

細胞因子的表達失調被發現于各種血液系統惡性腫瘤。已有許多研究表明，免疫功能的改變與NHL發生的風險相關[7]。亦有報道顯示，血液細胞因子水平的升高和彌漫大B細胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）的發生存在一定相關性。Rambaldi等[8]的研究發現部分細胞因子水平的升高對發現侵襲性淋巴瘤有幫助。

TNF-α的細胞來源廣泛，主要包括受激活的單核吞噬細胞、自然殺傷細胞及T細胞等。它作為IL-10分泌的誘導劑以促進疾病的進展，并在免疫應答過程中起中心作用。Lech-Maranda等[9]報道106例采用蒽環類藥物治療的DLBCL患者，IL-10和TNF-α聯合升高組的完全緩解及總生存率明顯降低，無進展生存期縮短，提示IL-10和TNF-α水平指數可作為國際預后指數（International prognostic index，IPI）預測DLBCL患者生存率的附加模型。本研究僅顯示初診FL患者外周血TNF-α的水平高于健康體檢者。

IFN-γ的生物學活性具有高度種屬特異性，主要來源于活化的T細胞及NK細胞。它除免疫調節外，還可促進巨噬細胞、細胞毒性T淋巴細胞的激活及功能，促進B細胞分化產生抗體，抗病毒等。有學者發現>60歲的淋巴瘤患者外周血IFN-γ水平較對照組明顯降低，這可能與老年患者免疫力低下有關。IFN-γ作為最主要的抗腫瘤細胞因子成員被大量報道[10]后，Markovic等[11]研究結果顯示，IFN-γ在腫瘤的發生與發展中起促進作用。部分學者認為惡性淋巴瘤患者的IFN-γ表達水平升高，與筆者在FL中的檢測結果類似，但機制尚不明確[12-13]。

白介素-2又稱為T細胞生長因子，來源于活化的T細胞、NK細胞等。IL-2R是IL-2膜受體的一部分，其可在淋巴瘤細胞表面表達。其促進NK細胞胞毒活性及T、B細胞增殖并產生細胞因子、抗體，激活單核/巨噬細胞。IL-2R由α、β及γ這3種多肽鏈形成，而可溶性IL-2Rα由IL-2R與IL-2水解產生。因其可反映T細胞的活性，常用于噬血細胞綜合征的診斷。Charbonneau等[14]報道sIL-2Rα表達水平的升高和DLBCL及FL的發生有相關性。IL-2R是體現DLBCL腫瘤負荷的一項重要指標，在DLBCL患者中IPI評分高危組、存在B癥狀組、LDH升高組、β2-MG升高組和臨床分期Ⅲ～Ⅳ組，IL-2R的表達水平均明顯升高。徐海濤等[15]亦報道相似結論，但FL暫無相關報道。本結果顯示，FLIPI評分中高危組、LDH及β2-MG升高組，IL-2水平高于對照組。

白介素-4是致敏的Th2細胞產生，它可抑制單核巨噬細胞產生TNF-α、白介素-1、白介素-6和白介素-8，抑制單核巨噬細胞內的核因子-κB的轉位抑制II型白介素-1受體的表達，但目前對惡性腫瘤特別是惡性淋巴瘤的白介素-4水平變化研究較少。

白介素-6來源于單核/巨噬細胞、T淋巴細胞（主要是Th2）、B細胞、成纖維細胞及血管內皮細胞，多數正常人的白介素-6水平極低，目前臨床在感染方面應用較廣。Duletic-Nacinovic等[16]等研究顯示，IL-6升高是彌漫大B細胞淋巴瘤患者CR率和DFS率的獨立預后因素，本研究結果亦發現治療后的FL患者IL-6表達水平相比治療前有所下降。周建堯等[17]亦發現彌漫大B細胞淋巴瘤患者外周血的IL-6水平較正常人升高。Dlouhy等[18]發現sIL2-R、IL-6和TNF-α與DLBCL的臨床特征及預后不良有關。

白介素-10是一種雙抑制的反饋因子，主要來源于活化的單核/巨噬細胞分泌，T淋巴細胞、肥大細胞也可分泌，對Th1細胞及Th2細胞增殖有雙向調節作用。IL-10在腫瘤逃逸中起重要作用，重組IL-10使腫瘤細胞避免被特異性細胞毒T淋巴細胞攻擊，抑制各種免疫細胞及其分泌細胞因子。同樣，IL-10也可經以上機制使惡性淋巴瘤進展。Silva等[19]認為在霍奇金淋巴瘤患者中，IL-6、IL-10、TNF-α和sCD25水平高于健康對照組，治療后IL-6、IL-10和sCD25水平逐漸降低。大量文獻[20]顯示IL-10水平的升高同惡性淋巴瘤的進展存在相關性，本研究顯示，初診FL患者LDH及β2-MG升高組IL-10表達水平升高，經治療后下降，IL-10可能與FL不良預后有關。

細胞因子失衡已成為NHL發生及發展的重要機制，但升高的具體模式因NHL的分型不同存在差異。本研究數據表明，初診濾泡性淋巴瘤患者血液中的大部分細胞因子表達水平均明顯高于健康對照組，而且細胞因子的表達水平高低和濾泡性淋巴瘤患者的臨床特征具有相關性，這可能有助于識別高危患者，進一步完善預后評估指數，為他們提供更準確、更適合風險的治療建議。

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（收稿日期：2021-03-31）