兩種冷沉淀凝血因子制備方法的比較

趙艷梅 李丹慧 祝凱捷

冷沉淀凝血因子是采用特定的方法將保存期限內的新鮮冰凍血漿在1～6℃的密閉條件下融化后,分離出大部分血漿,并將剩余的冷不溶解物質在1 h 內速凍呈固態的成分血［1］。冷沉淀的功能是用來補充Ⅷ因子、因子、血管性血友病因子(vWF)、Fgb 和纖維結合蛋白,主要適用于Fgb 缺乏引起的出血,也可用于無特異性濃縮制劑使用時的Ⅷ因子缺乏癥、因子缺乏癥、血管性血友病、纖維蛋白異常及Fgb 缺乏癥；也可用于大量輸血、DIC 以及其他治療方法無效的尿毒癥出血［2］。隨著臨床輸血技術的不斷發展,冷沉淀制品已經在臨床多個學科中應用,其臨床價值愈顯重要,其臨床使用量呈現明顯增多趨勢［3-6］。手工制備冷沉淀凝血因子在融化、分離、稱重、熱合、工作效率的個體差異等諸多環節存在無法控制的人為因素,易造成冷沉淀凝血因子制備過程冷鏈不穩定和時間鏈過長,從而導致冷沉淀凝血因子質量不符合標準［7］。2017 年本站引進了ZBK-LCD-A1 型冷沉淀凝血因子制備儀,采用全自動水浴融化虹吸法制備冷沉淀凝血因子,與2～6 ℃儲血冷藏箱過夜融化離心法進行分析比較,現將情況報告如下。

1 材料與方法

1.1材料 選取本血站于2017 年6 月～2020 年4 月,用400 ml 去白細胞采血袋采集的符合《獻血者健康檢查要求》的400 ml 全血244 袋,按照新鮮冰凍血漿制備操作規程制備而成。將新鮮冰凍血漿隨機分為冷藏箱過夜融化離心法組與全自動水浴融化虹吸法組,各122 袋。

1.2方法

1.2.1試劑與儀器 F Ⅷ因子(批號/效期：N0972303/201910),活化部分凝血活酶時間(APTT)液體試劑(批號/效期：N0972597/201909),CaCl2(批號/效期：N0972432/201909),凝血酶試劑(批號/效期：N1072925/201910)；質控品(批號/效期：N0972598/202009),以上試劑由Instrumentation Laboratory Company 提供,均在有效期內使用。2～6℃儲血冷藏箱(青島海爾,HXC-936)、冷沉淀凝血因子制備儀(山東中保康醫療器具有限公司,ZBK-LCD-A1 型),全自動血凝分析儀(Instrumentation Laboratory Company,ACL ELITE PRO,美國)。

1.2.2冷藏箱過夜融化離心法制備冷沉淀 將新鮮冰凍血漿置2～6℃儲血冷藏箱過夜融化。當血漿基本融化時,在離心力為4303 g、4℃的條件下離心10 min。將大部分上層冷上清移至空袋,將留下的30～40 ml 血漿與沉淀物混合,制成冷沉淀凝血因子。

1.2.3全自動水浴融化虹吸法制備冷沉淀 使用前設置制備儀水浴溫度5℃和開機時間。將新鮮冰凍血漿袋置于冷沉淀凝血因子制備儀的水浴裝置中,另一空袋懸于水浴裝置外,位置低于血漿袋,兩袋之間形成的高度落差約20 cm。血漿融化后隨時被虹吸至空袋中,當融化至剩下40～50 ml 血漿與沉淀物時儀器自動閉合導管,阻斷虹吸。將血漿與沉淀物混合,制成冷沉淀凝血因子。

1.2.4檢測 用全自動血凝分析儀檢測凝血因子Ⅷ活性(F Ⅷ ∶C) 和Fgb 濃度,分別乘以其容量得Ⅷ因子含量和Fgb 含量。

1.3觀察指標 觀察比較兩組冷沉淀凝血因子的F Ⅷ、Fgb 含量及合格率。

1.4統計學方法 采用SPSS26.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

全自動水浴融化虹吸法組F Ⅷ含量高于冷藏箱過夜融化離心法組,Fgb 含量低于冷藏箱過夜融化離心法組,差異有統計學意義(P<0.05)。兩組F Ⅷ、Fgb 合格率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組冷沉淀凝血因子的F Ⅷ、Fgb 含量及合格率比較［,n(%)］

表1 兩組冷沉淀凝血因子的F Ⅷ、Fgb 含量及合格率比較［,n(%)］

注：與冷藏箱過夜融化離心法比較,aP<0.05

3 討論

目前臨床已廣泛應用成分輸血,其中冷沉淀凝血因子為常用成分血。冷沉淀內含凝血成分較多,可有效治療甲型血友病、血管性血友病及先天性或獲得性Fgb 缺乏癥等,還可有效預防血友病手術出血情況。因此,冷沉淀制備自采集至臨床輸注均需最大程度減少活性凝血成分,以免破壞Fgb、凝血因子F Ⅷ。其中,Fgb 較為穩定,為凝血過程中具備蛋白水解活性的一連串凝血因子相繼激活的最終底物,即凝血酶形成作用于Fgb 使其轉為纖維蛋白,其含量升高可改變血小板聚集情況,還可經多種方式結合生物組織,起到止血、填充作用。凝血因子F Ⅷ即抗血友病球蛋白,為冷沉淀內最主要凝血因子,主要功能為參與因子Ⅸa 對因子X 的激活,進而促使凝血酶原轉為凝血酶,使纖維蛋白經交聯成為穩固血栓而起到止血作用,其較不穩定,半衰期約為8～12 h,較易失活,即含量可隨制備時間延長而不斷降低,有數據統計顯示,制備時間在12 h 其含量可減少約40%,制備時間在24 h 其含量可減少約42%,因此在制備時更需要注意制備方法的選擇,以提高凝血因子F Ⅷ含量與合格率。

本文結果顯示,全自動水浴融化虹吸法制備冷沉淀凝血因子的Ⅷ因子含量高于冷藏箱過夜融化離心法,其含量提高了32.5%,而Fgb 含量卻降低了17.0%。分析其原因,冷沉淀從開始制備到速凍成固態,采用冷藏箱過夜融化離心法制備冷沉淀大約要18～19 h,全自動水浴融化虹吸法制備時間大約為1.5 h,兩種方法的制備時間相差約17 h。Ⅷ因子為不穩定的凝血因子,其活性極易衰減,有文獻報道,體外4℃條件下保存,24 h 衰減情況從33.3%～58.1%［8,9］。Fgb 為穩定的凝血因子,在1～6℃以不溶物狀態存在時其含量受制備時間的影響小,而受分離方法的影響大。王飛等［7］研究顯示在相同的水浴融化條件下,離心法制備的Fgb 含量比虹吸法提高了20.0%。

全自動水浴融化虹吸法的特點為［10］：①可預約開機時間,自動注水、排水,制備時間短；②每個袋子均有稱重盒智能稱重,制備效率高,冷鏈穩定,冷沉淀凝血因子容量變異系數小；③制備過程信息化,可追溯。冷藏箱過夜融化離心法的特點為：①可批量制備,但制備的冷沉淀凝血因子的質量受冷鏈、時間鏈、分離、稱重、工作效率、工作人員業務素質等因素影響而不穩定；②冷沉淀凝血因子容量變異系數大；③制備過程只有離心部分信息化。此外,在行冷沉淀凝血因子制備時還需要注意以下幾點,即：確保靜脈穿刺順利,整個采血過程快且無誤,以便血液及抗凝劑盡早充分混合,從而確保冷沉淀內F Ⅷ呈高度活性狀態。同時,在完成血液采集后,應立即存儲至冰箱,并經專用血液運輸箱運輸血液,行制備時須以低溫工作臺進行操作,確保血液采集后存儲、運輸及制備均處于2～8℃下,以防凝血因子降解而影響成分血質量。此外,應于4～6 h內完成新鮮冰凍血漿制備,且宜越短越好,以提高F Ⅷ因子回收率。行冷沉淀凝血因子制備時應確保新鮮冰凍血漿澄清、無異常顏色、無蛋白、乳糜析出等。本站從2018 年1 月開始使用冷沉淀凝血因子制備儀至今,儀器運行性能和穩定性方面表現為偶爾出現血漿融化后虹吸速度過快或不虹吸。

綜上所述,全自動冷沉淀凝血因子制備儀制備冷沉淀具有便捷、高效、冷鏈穩定、時間鏈短、可信息化等特點,但是制備儀的性能、穩定性有待提高。冷沉淀凝血因子的質量受影響因素較多,除了配備更專業的設備外,還需要有完善的流程,工作人員需具備較強的業務素質,嚴格執行操作規程,才能制備出高質量的冷沉淀凝血因子。