消痔洗劑提取工藝研究

丁美林 宗陽 徐玲玲 周建華 蔣勇 江建國

【摘要】目的：優(yōu)選消痔洗劑的提取工藝，為該制劑制備工藝提供參考。方法：采用揮發(fā)油測定法，提取魚腥草揮發(fā)油，通過單因素考察試驗，優(yōu)選魚腥草提取工藝。以君藥中鹽酸小檗堿的含量、干膏率的綜合評分為評價指標，采用正交試驗法，考察水提取最佳工藝。結果：魚腥草揮發(fā)油最佳提取工藝為：加入14倍量的水，浸泡2h，提取5h。水提取最佳工藝為：加入12倍量的水，浸泡1.5h，提取1.5h，煎煮2次。結論：該提取工藝穩(wěn)定、合理、可行，適用于消痔洗劑的制備。

【關鍵詞】消痔洗劑;揮發(fā)油;鹽酸小檗堿;正交試驗

【中圖分類號】R94【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2021）18-0042-05

Study on Extraction Technology of Xiaozhi LotionDING Meilin1ZONG Yang2XU Lingling3ZHOU Jianhua1JIANG Yong1JIANG Jianguo1*

1.Rudong County Hospital of Traditional Chinese Medicine，Rudong 226400，China;

2.Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Suzhou 215000，China;

3.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200120，ChinaAbstract：Objective To optimize the extraction process of Xiaozhi Lotion，and to provide reference for the preparation process of this preparation.Methods The volatile oil of Houttuynia cordata was extracted by the determination of volatile oil，and the extraction process was optimized by single factor test. With the content of berberine hydrochloride and the comprehensive score of dry paste rate as evaluation indexes，orthogonal extraction was used to investigate the optimal process of water extraction.Results The optimal extraction process of volatile oil from Houttuynia cordata was as follows：adding 14 times amount of water，soaking for 2h and extracting for 5h. The optimal process of water extraction was as follows：adding 12 times of water，soaking for 1.5 h，extracting for 1.5 h，decocting for 2 times.Conclusion The extraction process is stable，reasonable and feasible. It is suitable for the preparation of Xiaozhi lotion.

Keywords：Xiaozhi Lotion; Volatile Oil; Berberine Hydrochloride;Orthogonal Extraction

消痔洗劑為江蘇省如東中醫(yī)院的外用經(jīng)驗方，由黃柏、虎杖、敗醬草、魚腥草等六味藥組成，具有清熱利濕解毒、散瘀止痛、去腐消腫的功效，臨床用于肛腸病術后創(chuàng)面疼痛、出血、肛緣水腫、創(chuàng)面恢復。經(jīng)多年臨床應用并驗證，該洗劑使用方便、療效良好，尚未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應，年使用量大于12000瓶。方中黃柏為君藥，魚腥草為臣藥。現(xiàn)代藥理研究[1-3]表明黃柏對皮膚有抗菌、抗炎、抗氧化等作用，其中鹽酸小檗堿抗炎作用研究較多。魚腥草揮發(fā)油是發(fā)揮抗炎、抗菌作用重要成分[4-5]。

研究根據(jù)《中國藥典》（2020年版）四部項下?lián)]發(fā)油測定法[6]，以揮發(fā)油提取體積、提取量為考察指標，通過單因素考察，確定魚腥草揮發(fā)油最佳提取工藝。水提取工藝提取，根據(jù)處方分析以君藥黃柏中鹽酸小檗堿為指標成分，采用高效液相色譜法（HPLC）法結合正交試驗，以鹽酸小檗堿含量、干膏率的綜合評價為指標，考察加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)對消痔洗劑指標成分含量的影響，優(yōu)選出最佳提取工藝，以期為醫(yī)院制劑的質量控制和制備工藝提供參考。

1儀器與材料

1.1儀器LC-20AT島津高效液相色譜儀（日本島津公司）;AE-240電子分析天平（上海賽多利斯科學儀器有限公司）;QCD3120超聲波清洗器（天津旗美科技有限公司）;HN101-1A鼓風干燥箱（南通滬南科學儀器有限公司）;HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國宇儀器制造有限公司）。

1.2材料鹽酸小檗堿（批號：110713-202015，中國食品藥品鑒定研究院）。高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為去離子水，其他試劑為分析純。所用中藥飲片均購自南通市三越飲片有限公司，并由本院主任中藥師鑒定。

2方法與結果

2.1魚腥草揮發(fā)油的提取

2.1.1浸泡時間與吸水率的考察稱取處方量藥材2份，置于燒杯中，分別加入12倍量的水，用保鮮膜封住燒杯口，分別在室溫下靜置0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，并稱量重量，每次分別倒出被藥材吸收剩下的藥液體積，計算吸水率[7]，最終確定藥材的浸泡時間為2 h，藥材吸水率為393%。

2.1.2加水量的考察取4份藥材，分別加入10、12、14、16倍處方量水，浸泡2 h后，加熱提取5 h，收集揮發(fā)油，計算揮發(fā)油提取率，確定加水量為14倍處方量。結果見表1。

2.1.3提取時間的考察取4份藥材，分別加入14倍處方量水，浸泡2 h后，分別加熱提取揮發(fā)油3、4、5、6 h，收集揮發(fā)油，計算魚腥草揮發(fā)油提取率，確定提取時間為5 h。結果見表2。

2.1.4驗證試驗對魚腥草浸泡時間、加水量、提取時間進行考察，最終確定魚腥草揮發(fā)油提取工藝，即加入14倍處方量的水，浸泡2 h，提取5h。按照確定最佳提取工藝，稱取3份魚腥草平行操作，結果表明此工藝合理可行，具有較好的穩(wěn)定性。結果見表3。

2.2水提取工藝優(yōu)選

2.2.1浸泡時間與吸水率的考察稱取處方量藥材，置于燒杯中，分別加入7倍量的水，用保鮮膜封住燒杯口，分別在室溫下靜置0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，量取體積，稱取重量，計算吸水率，最終確定浸泡時間為1.5 h，藥材吸水率為156%。

2.2.2溶液配制對照品溶液：精密稱取鹽酸小檗堿10.26 mg，用流動相溶液定容于10 mL容量瓶，即得。

供試品溶液的制備：按處方量稱取藥材，加入8倍量的水，浸泡2 h，煎煮1 h后，精密吸取10 mL提取液，水浴蒸干后，用流動相定容10 mL容量瓶中，即得。

陰性供試品溶液的制備：按處方量稱取除黃柏外的藥材，按“供試品溶液”項下的方法制備，即得。

2.2.3色譜條件色譜柱：Inertrustain C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（每100 mL加入十二烷基硫酸鈉0.1 g），柱溫30 ℃，流速1 mL/min;對照品進樣量5 μL，供試品進樣量20 μL。

2.2.4專屬性分別吸取對照品溶液、供試品溶液、缺黃柏的陰性供試品溶液，按色譜條件進樣分析，陰性供試品溶液在對照品相應位置無吸收，表明鹽酸小檗堿無陰性干擾。色譜圖見圖1。

2.2.5線性關系考察精密量取適量的對照品溶液，加入流動相進行稀釋至123.39、105.76、83.76、70.51、52.88、32.25、17.63 μg/mL的濃度對照品溶液。分別吸取各濃度的對照品溶液5μL，注入高效液相色譜儀中測定。得到現(xiàn)性方程為y=2440.76x+44273，（r=0.999），鹽酸小檗堿在17.63～123.39 μg/mL間現(xiàn)性關系良好。

2.2.6精密度實驗精密吸取同一對照品溶液，按色譜條件進樣檢測，重復測定6次，以峰面積計算，RSD為0.06%，表明儀器精密度良好。

2.2.7重復性實驗取同一批樣品，按“供試品溶液”制備方法平行制備6份，按色譜條件進樣檢測，測定鹽酸小檗堿含量的RSD為0.91%（n=6），表明該方法重復性良好。

2.2.8穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h分別進樣，測定色譜峰面積，RSD為0.11%，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。

2.2.9加樣回收率精密吸取已知含量的同一批供試品溶液共6份，加入適量鹽酸小檗堿對照品溶液，按“供試品溶液”制備方法制備供試品溶液，測定鹽酸小檗堿的含量，平均回收率為101.98%，RSD為1.59%（n=6）。

2.3正交試驗試驗根據(jù)臨床用藥方法，確定采用水提方法進行提取，影響水提主要因素為A加水量（倍）、B煎煮時間（h）、C煎煮次數(shù)（次）。采用L9（34）正交試驗設計優(yōu)選最佳提取工藝參數(shù)。因素與水平見表4，正交試驗結果見表5，方差分析見表6。

分析表明，在中藥水提過程中，煎煮時間為顯著性影響因素（P<0.05），可根據(jù)生產(chǎn)實際情況適當調整。因此本實驗結果表明正交試驗優(yōu)選的最佳提取工藝為A3B2C2，即加12倍量的水，煎煮1.5h，提取2次。

2.4驗證試驗稱取與正交試驗等量飲片3份，按優(yōu)選的提取工藝提取，結果見表7，表明優(yōu)化水提工藝提取率較高，工藝穩(wěn)定。

3討論

肛腸疾病的基本病因病機一般受風濕熱燥等外邪的作用、情志內傷、飲食起居等因素的影響，濕熱下注于大腸，經(jīng)絡阻滯，氣血不暢，淤血濁氣留滯肛門大腸而衍生諸多病癥[8-9]。西醫(yī)治療多采用高錳酸鉀等坐浴方式，但治療效果并不理想[10]。消痔洗劑為如東縣中醫(yī)院肛腸科臨床經(jīng)驗方，具有清熱利濕解毒、散瘀止痛、去腐消腫等功效，臨床上有消除痔瘡炎癥腫脹脫出、嵌頓、抗菌等作用，促進痔瘡術后創(chuàng)面愈合作用，臨床使用超過十年，臨床研究[11-12]表明患者使用效果良好，值得應用推廣，表明該制劑制備工藝可以深入開發(fā)。

采用單因素試驗考察揮發(fā)油提取工藝時，曾考察魚腥草、敗醬草、魚腥草和敗醬草三組揮發(fā)油提取，在實驗的1 h內可清晰看到魚腥草黃色揮發(fā)油，而敗醬草在實驗的4 h后看到少量的聚集物顯紅色，且聚集物呈白色無定形粉末狀漂浮于油面，敗醬草的揮發(fā)性成分極其少。魚腥草和敗醬草共同提取得到棕紅色的揮發(fā)油且油內夾雜著白色無定形粉末。實驗采用的敗醬草為黃花敗醬草，現(xiàn)代研究[13]表明，黃花敗醬草雖含揮發(fā)性成分，但未發(fā)現(xiàn)相關大量的研究敗醬草中揮發(fā)油，且藥理作用尚未清晰，加之黃花敗醬草提取出難容于水油的白色粉末狀物質[14]，為不影響后期的實驗研究，本實驗去除黃花敗醬草的揮發(fā)性成分提取。最終確定魚腥草揮發(fā)油提取工藝加入14倍量的水，浸泡2 h，提取5 h，該工藝合理可行。

黃柏為方中君藥，具有瀉火解毒，清熱燥濕，除骨蒸、退虛熱等功效，其化學成分主要有生物堿類、酚酸類、黃酮類、多糖類等，具有抗菌、抗炎、消腫、止痛等藥理作用[15-16]。水提工藝考察過程中，根據(jù)處方分析，將君藥黃柏中鹽酸小檗堿、干膏率作為考察指標[17-18]，設計正交試驗。參照文獻[19-20]對色譜條件多次考察，最終確定色譜條件參照2020版《中國藥典》一部黃柏項下含量測定[21]，實驗表明該色譜條件分離度良好，陰性供試品對本法測定無干擾。最終確定水提工藝為加入12倍量的水，浸泡1.5 h，提取1.5 h，煎煮2次，該工藝穩(wěn)定可行。

綜上所述，消痔洗劑的提取工藝分兩步提取。第一步考察魚腥草揮發(fā)油提取工藝，由于魚腥草揮發(fā)油抗菌抗炎活性較好[22-23]，增強消痔洗劑抗菌抗炎效果，將魚腥草揮發(fā)油充分得到應用。第二步考察魚腥草藥渣、黃柏、虎杖、芒硝、敗醬草等中藥的提取工藝，采用水提工藝合理可行。結果表明消痔洗劑提取工藝合理穩(wěn)定可行，后續(xù)開發(fā)將繼續(xù)按照外用中藥洗劑的要求，結合現(xiàn)代化技術對該洗劑進一步考察開發(fā)。

參考文獻

[1]李嘉誠，吳嵐，蔡同凱，等. 黃柏化學成分及其藥理作用研究進展[J].藥學實踐雜志，2018，36（5）：389-391，398.

[2]楊磊，張延英，李卉，等.黃柏煎劑的抗炎、抗菌作用研究[J].實驗動物科學，2014，31（4）：14-17.

[3]童曉東，姜曉燕.痔安洗劑的質量標準研究[J].山西中醫(yī)，2016（8）：54-57.

[4]陳婧，方建國，吳方建，等.魚腥草抗炎藥理作用機制的研究進展[J].中草藥，2014，45（2）：284-289.

[5]麥明朗，余林中，劉俊珊.“中藥抗生素”魚腥草抗炎作用研究及臨床應用進展[J].中藥藥理與臨床，2018，34（5）：172-176.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：203

[7]何蕊.肺心清膠囊制備工藝和質量標準研究[D].昆明：云南中醫(yī)學院，2013.

[8]郭海燕.芳香化濕法對濕熱下注型混合痔術后患者痔組織細胞因子VEGF、CD68、MMP9及免疫球蛋白的影響[J].社區(qū)醫(yī)學雜志，2017（5）：59-62.

[9]李杉.老年肛腸疾病住院患者術后譫妄發(fā)生率及危險因素的回顧性研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2015.

[10]廖勇.中藥熏洗療法用于痔瘡治療臨床療效分析[J].臨床醫(yī)藥文獻電子雜志，2014（13）：2395.

[11]顧建華，陳新龍.消痔洗劑治療嵌頓性混合痔70例療效觀察[J].中成藥，2011，33（7）：1275-1276.

[12]王金雙，顧建華.消痔洗劑配合電腦熏洗治療肛腸病術后創(chuàng)面愈合療效觀察[J].航空航天醫(yī)學雜志，2013（3）：351-352.

[13]楊柳，姜海，王雪瑩，等. 黃花敗醬草化學成分和藥理作用的研究進展[J].中醫(yī)藥信息，2012（4）：169-172.

[14]鄭昌杰，崔文燕，王潤玲，等. 黃花敗醬草的化學成分研究[J].中草藥，2019（8）：1890-1897.

[15]李先，馮杉，鄭艷超，等. 黃柏與關黃柏的化學成分及生物活性研究進展[J].藥物評價研究，2019（5）：1033-1037.

[16]李嘉誠，吳嵐，蔡同凱，等. 黃柏化學成分及其藥理作用研究進展[J].藥學實踐雜志，2018（5）：389-398.

[17]陳卉，施之琪，王洛臨.參柏洗劑的制備工藝[J].中國實驗方劑學雜志，2015，21（13）：9-12.

[18]王洛臨，施之琪，張建軍，等. 清熱祛濕洗劑提取工藝研究[J].江西中醫(yī)藥，2011（6）：66-68.

[19]蔡君龍.艾舒陰洗劑的制備工藝與質量標準研究[D].武漢：湖北中醫(yī)藥大學，2016.

[20]蔡勇科，吳俊賢，黎曉曲.高效液相色譜法測定外科舒筋洗劑中鹽酸小檗堿的含量[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2019（13）：233-236.

[21]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：318.

[22]陳清賠，楊輝.魚腥草不同部位揮發(fā)油組分與抗菌活性分析[J].臨床合理用藥雜志，2018，11（32）：112-114.

[23]陳婧.基于魚腥草抗炎活性的質量評價及其作用機制研究[D].武漢：華中科技大學，2014.（收稿日期：2021-02-25編輯：劉斌）

基金項目：

作者簡介：丁美林（1993-），女，漢族，碩士研究生，中藥師，研究方向為中藥制劑研究。E-mail：18621831936@163.com

通信作者：江建國（1972-），男，漢族，本科，主任中藥師，研究方向為中藥制劑研究。E-mail：1621576957@qq.com