針刺抗抑郁動(dòng)物模型使用規(guī)律探討

高靜 寧百樂(lè) 符文彬

【摘要】目的：對(duì)近20年（2000～2020年）使用動(dòng)物抑郁模型的針刺抗抑郁文獻(xiàn)進(jìn)行總結(jié)，探討針刺抗抑郁相關(guān)研究中動(dòng)物模型使用的規(guī)律。方法：采用計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（CBM）、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)（CNKI）、中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)（VIP）、Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)符合要求的文獻(xiàn)建立數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：在針刺抗抑郁的研究中，較為常用的動(dòng)物模型有慢性不可預(yù)測(cè)溫和應(yīng)激（CUMS）抑郁模型、慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激（CUS）抑郁模型、慢性束縛應(yīng)激（CRS）抑郁模型、強(qiáng)迫游泳（FST）應(yīng)激模型等，其中CUMS抑郁模型、CUS抑郁模型、CRS抑郁模型造模時(shí)間較長(zhǎng)，F(xiàn)ST應(yīng)激模型造模時(shí)間較短;在動(dòng)物種屬的選擇上，大鼠、小鼠最為常用;造模方法上，CUMS因其造模方法復(fù)雜，具體操作上存在較多變異。結(jié)論：在針刺抗抑郁的研究中，動(dòng)物模型的使用多種多樣，但是針刺抗抑郁的效果仍需在更多的模型中得以驗(yàn)證，在模型的使用上應(yīng)根據(jù)研究目的及實(shí)驗(yàn)室的客觀條件選擇合適的模型。

【關(guān)鍵詞】針刺;抑郁動(dòng)物模型;基礎(chǔ)研究;應(yīng)用規(guī)律

【中圖分類(lèi)號(hào)】R246【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）18-0057-06

Study on the Application Rules of Animal models of Depression in AcupunctureGAO Jing1，2NING Baile2，3FU Wenbin2，3*

1.Rehabilitation Center，The First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 45000，China;

2.Second Clinical College，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China;

3.Department of Acupuncture and Moxibustion，Guangdong Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510006，ChinaAbstract：Objective Reviewed the research about anti-depression of acupuncture since 2000 to 2020，to explore the application rules of animal model of depression. Method? The lecture and the documents which met the enrolling requirement were retrieved with computer in CBM，CNKI，VIP，Pubmed，Medline database，statistic analysis was conducted on these lectures.Result? In these research，the most commonly used animal models of depression were Chronic Unpredictable Mild Stress（CUMS） model，Chronic Unpredictable Stress （CUS） model，Chronic Restraint Stress（CRS）model，F(xiàn)orced Swimming Test （FST） model and so on. CUMS，CUS and CRS models were conducted for a long time，therefore FST was the shortest in time. The species of animals commonly used in these models were rats and mice. On the modeling method，because of the complex modeling method，there were more differences in CUMS. Conclusion Although various models were used，the antidepression effect of acupuncture still needs to be tested in more models. And the appropriate model should be selected according to the objective of the research and laboratory conditions.

Keywords：Acupuncture; Animal Model of Depression; Basic Research; Application Rules

抑郁障礙是指各種原因引起的以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征的一類(lèi)心境障礙，是最常見(jiàn)的精神障礙之一[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織在2017年發(fā)布的調(diào)查報(bào)告顯示，全球抑郁障礙病人約有3.22億，患病率為4.4%[2]。中國(guó)精神衛(wèi)生調(diào)查最新公布，我國(guó)抑郁障礙患病率發(fā)病率達(dá)6.8%[3]。據(jù)預(yù)測(cè)，到2030年抑郁障礙造成的疾病負(fù)擔(dān)將位居全球疾病負(fù)擔(dān)之首[4]。抑郁障礙已經(jīng)成為全球研究熱點(diǎn)[5]，針刺作為一種中醫(yī)傳統(tǒng)治療方法，自古以來(lái)對(duì)抑郁障礙的治療上顯示出較好的療效[6-9]。近年來(lái)，針刺抗抑郁的機(jī)制研究日益豐富[10-12]，抑郁障礙動(dòng)物模型作為載體在其相關(guān)研究中廣泛應(yīng)用[13-14]。本文研究了近二十年來(lái)應(yīng)用抑郁動(dòng)物模型的針刺抗抑郁文獻(xiàn)，對(duì)抑郁模型使用規(guī)律進(jìn)行探討，為以后針刺抗抑郁基礎(chǔ)研究提供借鑒。

1研究方法

1.1檢索策略檢索式：中文以“抑郁癥”“抑郁障礙”“郁證”為主題詞或關(guān)鍵詞進(jìn)行第一次檢索，再以“針刺”為主題詞或關(guān)鍵詞進(jìn)行第二次檢索。英文以“depression”“acupuncture”為檢索關(guān)鍵詞檢索;文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)：中文數(shù)據(jù)庫(kù)為中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（CBM）、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)（CNKI）、中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)（VIP），外文（語(yǔ)言限制為英文）：Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)。檢索時(shí)間范圍2000年至2020年。

1.2納入文獻(xiàn)篩選檢索后對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行手工篩選，剔除臨床研究、個(gè)案報(bào)道、綜述等，以抑郁動(dòng)物模型為研究對(duì)象的針刺抗抑郁研究作為最終篩選目標(biāo)（不包含抑郁共病模型的相關(guān)研究，如卒中后抑郁、產(chǎn)后抑郁等）。文獻(xiàn)篩選由兩位研究人員同時(shí)進(jìn)行，以免漏選或多選。

1.3統(tǒng)計(jì)分析將符合要求的文獻(xiàn)建立數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)模型的運(yùn)用規(guī)律如模型類(lèi)別、動(dòng)物使用、造模時(shí)長(zhǎng)、造模方法等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2研究結(jié)果

根據(jù)上述關(guān)鍵詞，共檢索出2701篇相關(guān)文獻(xiàn)。對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行閱讀篩選，剔除臨床研究、綜述、個(gè)案報(bào)道等，共篩選出162篇運(yùn)用抑郁動(dòng)物模型的針刺抗抑郁相關(guān)文獻(xiàn)，共包含165項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

2.1抑郁模型類(lèi)別研究結(jié)果顯示，在165項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中涉及的動(dòng)物模型共有11種，包括慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型（CUMS）、慢性不可預(yù)知應(yīng)激模型（CUS）、慢性束縛應(yīng)激模型（CRS）、強(qiáng)迫游泳應(yīng)激模型（FST）、母嬰分離模型（MS）、習(xí)得性無(wú)助模型（LH）、藥物誘導(dǎo)抑郁模型，其他類(lèi)別的模型還有社會(huì)孤立模型、WKY模型、浸水模型等。

2.2抑郁模型使用情況研究結(jié)果顯示，納入的研究中，應(yīng)用CUMS模型的研究118項(xiàng)，CUS模型的研究11項(xiàng)，CRS模型的研究10項(xiàng)，F(xiàn)ST應(yīng)激模型的研究7項(xiàng);MS抑郁模型的研究5項(xiàng);LH模型的研究4項(xiàng);藥物誘導(dǎo)抑郁模型的研究5項(xiàng)。見(jiàn)表1。

2.3各種抑郁模型的造模時(shí)長(zhǎng)分析研究結(jié)果顯示，CUMS模型造模時(shí)長(zhǎng)多為21 d，最長(zhǎng)為60 d;CUS模型造模時(shí)長(zhǎng)多為21 d;CRS模型造模時(shí)長(zhǎng)多為21 d;FST應(yīng)激模型造模時(shí)長(zhǎng)為2 d;MS抑郁模型造模時(shí)長(zhǎng)為5 d;LH模型造模時(shí)長(zhǎng)多為7 d;藥物誘導(dǎo)抑郁模型造模時(shí)長(zhǎng)則小于2 d。見(jiàn)表2。

2.4抑郁模型動(dòng)物使用情況研究結(jié)果顯示，研究中所使用的動(dòng)物主要為大鼠、小鼠，其中使用大鼠的研究占96.97%，使用小鼠的研究占3.03%;動(dòng)物種屬涉及SD大鼠、Wistar大鼠、C57BL/6小鼠、B ALB/C小鼠、昆明小鼠等。在動(dòng)物性別的選擇方面，使用雄性動(dòng)物的研究占86.67%，使用雌性動(dòng)物的研究占1.21%，使用雌雄各半動(dòng)物的研究占12.12%。見(jiàn)表3、4。

2.5各種抑郁模型造模方法分析

2.5.1CUS模型CUS模型是通過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間給予動(dòng)物不同的刺激因子，而造成對(duì)其的長(zhǎng)期壓力。在使用CUS模型的研究中，使用頻次較高的刺激因子為禁水、冰水游泳、晃籠、晝夜顛倒、禁食、熱應(yīng)激、夾尾等。其中，50%的研究聯(lián)合孤養(yǎng)方法。見(jiàn)表5。

2.5.2CUMS模型CUMS模型是使用頻率最高的抑郁模型。CUMS模型是由CUS模型改良而成，是通過(guò)每日給予動(dòng)物不同的較溫和的刺激因子，從而造成對(duì)動(dòng)物的長(zhǎng)時(shí)間壓力。具體的造模方法為，使用7～10種刺激因子，每日1～2種，為避免適應(yīng)性，隨機(jī)分配刺激因子，至少連續(xù)兩日內(nèi)的應(yīng)激不重復(fù)，持續(xù)應(yīng)激21 d或更長(zhǎng)時(shí)間。將118項(xiàng)使用CUMS造模的研究中所使用的刺激因子進(jìn)行頻次分析，其中禁水、禁食、夾尾、冰水游泳、晝夜顛倒、晃籠、束縛、熱應(yīng)激、潮濕墊料、電擊足底等10項(xiàng)刺激因子有較高頻次出現(xiàn)。另外，65.25%的研究還聯(lián)合孤養(yǎng)的方法。見(jiàn)表6，圖1。

2.5.3CRS模型CRS模型是將束縛作為單一刺激因子，經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間刺激構(gòu)建而成。在使用CRS模型的研究中，80%的研究造模時(shí)聯(lián)合孤養(yǎng)方法。該模型構(gòu)建的具體方法為，每日將動(dòng)物放置在一定大小的瓶子或金屬網(wǎng)袋內(nèi)，以限制其活動(dòng)，每日刺激4 h，連續(xù)進(jìn)行28 d。如圖2所示。

限制行為，每日4 h，持續(xù)28 d

2.5.4FST應(yīng)激模型FST應(yīng)激模型屬行為絕望模型的一種。其操作方法為，先將動(dòng)物放進(jìn)一定規(guī)格的容器內(nèi)進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練15 min，使其適應(yīng)環(huán)境并誘導(dǎo)絕望行為，24 h后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，持續(xù)6 min游泳，觀察期間動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，不動(dòng)時(shí)間代表了動(dòng)物的絕望行為的持續(xù)時(shí)間。如圖3所示。

2.5.5MS抑郁模型MS抑郁模型是將出生不久的幼鼠與其母鼠分離，等其成熟后，而出現(xiàn)快感缺失、活動(dòng)減少、興趣降低等抑郁樣行為。具體操作方法為，在幼鼠出生15 d后，將其與母鼠分離孤養(yǎng)一段時(shí)間，通過(guò)行行為學(xué)檢測(cè)其抑郁樣行為。

2.5.6LH模型當(dāng)機(jī)體遭受到不可逃避的厭惡性刺激（如足電休克）時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一種絕望行為，表現(xiàn)為對(duì)刺激的不再逃避，即使在可逃避的環(huán)境下也呈現(xiàn)出逃避行為障礙及自發(fā)活動(dòng)減少。LH模型既是根據(jù)該原理構(gòu)建的，具體操作方法為，將動(dòng)物置于不可逃避的籠內(nèi)給予不可預(yù)知的電擊刺激，持續(xù)2～3 d后，將其置于可逃避的籠內(nèi)再次給予電刺激時(shí)，動(dòng)物出現(xiàn)逃避不能的行為，其中逃避延遲時(shí)間和成功逃避次數(shù)代表了其抑郁樣行為。

2.5.7藥物誘導(dǎo)抑郁模型藥物誘導(dǎo)抑郁模型時(shí)通過(guò)給藥，而誘發(fā)動(dòng)物的抑郁樣行為。常運(yùn)用的藥物有LPS、皮質(zhì)醇、利血平等，給藥方式有腦立體定位注射、腹腔注射等。

3討論

研究結(jié)果顯示，在針刺抗抑郁的研究中，較為常用的動(dòng)物模型有CUMS模型、CUS模型、CRS模型、FST應(yīng)激模型，其中CUMS、CUS、CRS模型的造模時(shí)間在21 d以上，而FST應(yīng)激模型造模時(shí)長(zhǎng)為2 d。在抑郁動(dòng)物模型的相關(guān)研究中，CUMS模型亦是目前應(yīng)用最廣泛的研究，該模型源于Katz提出[15]的CUS模型，后由Willner改良而成[16]，很好地模擬了抑郁障礙發(fā)生發(fā)展的過(guò)程[14]。其優(yōu)點(diǎn)在于多種應(yīng)激因子交替出現(xiàn)，可避免動(dòng)物習(xí)慣。而CRS模型與CUMS、CUS模型同樣為慢性抑郁模型，造模時(shí)長(zhǎng)較長(zhǎng)，但較兩者刺激因子單一，有造模簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，亦為當(dāng)前研究中常用模型[17]。FST應(yīng)激模型與懸尾實(shí)驗(yàn)（Tail suspension test）一樣，均屬行為絕望模型，該模型造模時(shí)長(zhǎng)短，操作簡(jiǎn)便，在快速抗抑郁的藥理研究中常用[18]。MS抑郁模型、LH模型和藥物誘導(dǎo)抑郁模型在針刺抗抑郁中較少使用。另外，抑郁模型還有嗅球切除抑郁模型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型等，但在針刺抗抑郁研究中使用較少。隨著抑郁相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)，遺傳學(xué)及表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物將成為針刺抗抑郁研究的重要載體。

各類(lèi)抑郁模型中動(dòng)物的使用上，鼠類(lèi)是最常使用的動(dòng)物，以SD雄性大鼠最為常用，未涉及鳥(niǎo)類(lèi)、豬、雞等動(dòng)物的使用。不同的模型所使用的動(dòng)物具有選擇性，不同種動(dòng)物對(duì)造模的效果影響較大[14]。因大鼠行為表現(xiàn)多樣，情緒反應(yīng)敏感，常用以高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)的研究[19]。但在不同的種屬的選擇上亦應(yīng)注意，應(yīng)參考既往研究來(lái)確定動(dòng)物的種屬。同時(shí)，性別是抑郁障礙的發(fā)生重要的影響因素[3，20]。其中，雌性動(dòng)物存在明顯的生理周期，由于機(jī)體激素水平的波動(dòng)性變化，可能會(huì)對(duì)造模的效果產(chǎn)生一定的影響[21]。因此，多選用雄性動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可避免性別及生理周期因素的影響，以保證模型的穩(wěn)定性和一致性。

在針刺抗抑郁的研究中，各類(lèi)抑郁模型的造模方法大致保持可重復(fù)性，在較復(fù)雜的模型中有較多的可變空間。運(yùn)用CUMS和CUS抑郁模型造模時(shí)，較多的研究參考Katz和Willner等人[15-16]的方法改良實(shí)驗(yàn)方案，因而出現(xiàn)多種多樣的刺激因子。根據(jù)刺激因子出現(xiàn)的頻次所呈現(xiàn)的規(guī)律，至少約50%的研究中，使用了禁水、禁食、夾尾、冰水游泳、晝夜顛倒、晃籠、束縛、熱應(yīng)激、潮濕墊料、電擊足底，這對(duì)今后的相關(guān)研究有參考意義。其他模型造模時(shí)涉及操作種類(lèi)較少，因而在這些研究中造模方法一致性較好，便于重復(fù)。

針灸對(duì)抑郁障礙的治療在臨床上表現(xiàn)出有效、安全、綠色的優(yōu)勢(shì)，揭示針刺抗抑郁的作用機(jī)制對(duì)指導(dǎo)針灸臨床具有重要意義。抑郁動(dòng)物模型的應(yīng)用，對(duì)于抑郁障礙分子機(jī)制的研究和針刺抗抑郁機(jī)制研究都有著至關(guān)重要的意義。當(dāng)前，抑郁模型多種多樣，除上述幾種抑郁模型外，針刺的抗抑郁效應(yīng)還應(yīng)在更多種模型中得以驗(yàn)證。另外，每種模型都有優(yōu)點(diǎn)與適用范圍，同時(shí)也存在一定的缺點(diǎn)與不足。因此，應(yīng)該根據(jù)研究目的以及實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際條件選擇合適的動(dòng)物模型開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

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