TRPV1參與針和灸不同刺激方式對小鼠ghrelin和 GHSR-1α的影響

劉瓊 曹佳男 劉密 謝輝 常小榮

〔摘要〕 目的 通過觀察針刺或熱灸不同刺激方式干預足三里穴區對C57BL/6野生型小鼠和TRPV1-/-基因敲除小鼠血漿中腦腸肽（ghrelin）和大腦前額葉皮質中生長激素促分泌素受體-1α（GHSR-1α）含量的改變，探討辣椒素受體1（TRPV1）參與針、灸不同刺激方式對胃腸功能調控通路ghrelin-GHSR-1α調節的差異性。方法 24只C57BL/6野生型小鼠隨機分為C57BL/6空白組、C57BL/6針刺組和C57BL/6熱灸組，每組8只;24只TRPV1-/-基因敲除小鼠隨機分為TRPV1-/-空白組、TRPV1-/-針刺組和TRPV1-/-熱灸組，每組8只。C57BL/6空白組和TRPV1-/-空白組不予以處理;C57BL/6針刺組和TRPV1-/-針刺給予手針干預;C57BL/6熱灸組和TRPV1-/-熱灸組給予熱灸干預。采用ELISA檢測小鼠血漿中ghrelin含量和Western Blot法檢測小鼠大腦前額葉皮質中TRPV1和GHSR-1α表達水平的變化。結果 C57BL/6野生型小鼠中，與C57BL/6空白組相比，C57BL/6針刺組與熱灸組血漿ghrelin表達水平均顯著降低（P<0.05），前額葉皮層TRPV1含量表達增加（P<0.05）、GHSR-1α降低（P<0.05），但三者在針刺組和熱灸組間差異無統計學意義（P>0.05）。TRPV1-/-基因敲除小鼠中，與TRPV1-/-空白組對比，TRPV1-/-針刺組和熱灸組血漿ghrelin水平和前額葉皮質GHSR-1α表達水平差異均無統計學意義（P>0.05）。結論 針刺、熱灸均可通過激活TRPV1的生物活性，影響胃腸功能調控通路ghrelin-GHSR-1α的調節作用。

〔關鍵詞〕 針刺;熱灸;足三里;腦腸肽;生長激素促分泌素受體-1α;辣椒素受體1

〔中圖分類號〕R245.8? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.10.003

Effect of TRPV1 on ghrelin and GHSR-1α in Mice by Participating in Different Stimulation Methods of Acupuncture and Moxibustion

LIU Qiong1， CAO Jianan1， LIU Mi1， XIE Hui2*， CHANG Xiaorong1*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China;

2. West Hospital of Chenzhou First People's Hospital， Chenzhou， Hunan 423000， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effect of different stimulation modalities of acupuncture or pyretic moxibustion in the “Zusanli” （ST36） acupoint on changes of content of plasma ghrelin and growth hormone secretagogue receptor-1 （GHSR-1α） in the prefrontal cortex of C57BL/6 wild-type mice and TRPV1-/- knockout mice， and to explore the difference of capsaicin receptor 1 （TRPV1） involved in acupuncture and pyretic moxibustion stimulation on ghrelin-GHSR-1α regulation of gastrointestinal function pathway. Methods 24 C57BL/6 wild-type mice were randomly divided into C57BL/6 blank group， C57BL/6 acupuncture group and C57BL/6 hot pyretic moxibustion group， with 8 mice in each group. 24 TRPV1-/- knockout mice were randomly divided into TRPV1-/- blank group， TRPV1-/- acupuncture group and TRPV1-/- pyretic moxibustion group， with 8 mice in each group. C57BL/6 blank group and TRPV1-/- blank group were not treated; C57BL/6 acupuncture group and TRPV1-/- acupuncture group were given hand acupuncture intervention; C57BL/6 pyretic moxibustion group and TRPV1-/- pyretic moxibustion group were given pyretic moxibustion intervention. ELISA was used to detect the ghrelin content in mouse plasma， and Western blot was used to detect the changes of TRPV1 and GHSR-1α expression levels in mouse brain prefrontal cortex. Results In C57BL/6 wild-type mice， compared with the C57BL/6 blank group， plasma ghrelin level in C57BL/6 acupuncture group and pyretic moxibustion group was significantly decreased （P<0.05）， while the content of TRPV1 in prefrontal cortex was increased （P<0.05） and GHSR-1α was decreased （P<0.05）， but there was no statistically significant difference between the acupuncture group and pyretic moxibustion group （P>0.05）. In TRPV1-/- knockout mice， compared with the TRPV1-/- blank group， there was no statistically significant difference in plasma ghrelin level and prefrontal cortex GHSR-1α expression level in TRPV1-/- acupuncture group and pyretic moxibustion group （P>0.05）. Conclusion Both acupuncture and pyretic moxibustion can affect the regulation of gastrointestinal functional pathway ghrelin-GHSR-1α by activating the biological activity of TRPV1.

〔Keywords〕 acupuncture; pyretic moxibustion; “Zusanli” （ST36）; ghrelin; growth hormone secretagogue receptor-1; capsaicin receptor 1

針灸是中醫外治療法的重要組成部分，以中醫基礎理論為指導，經脈學說為依據，針刺和艾灸等方式為治療手段，具有適應癥廣泛、療效顯著、不良反應少、遠期效果穩定等特點。在針灸的眾多適應癥中，臨床上以胃腸疾病防治的療效較為突出，如功能性消化不良、消化道潰瘍、潰瘍性結腸炎、便秘等，且被大量臨床與基礎研究所證實[1-4]。隨著研究的不斷深入，針灸通過影響中樞神經系統中重要神經遞質的釋放，而實現對胃腸功能的調節作用已成為現階段研究的關注焦點[5-7]。大腦是中樞神經系統中最大和最復雜的組織結構，而皮質是大腦中最為高級和發達的結構，具有調節機體與周圍環境平衡的作用，尤其對胃腸機能的整體調控作用也是皮質的重要功能之一。相關研究[8-10]證實，針灸對胃腸道的保護作用是通過調節腦腸肽（ghrelin）及其受體蛋白生長激素促分泌素受體-1α（growth hormone secretagogue receptor-1α， GHSR-1α）的表達而起效，更有實驗[11]發現辣椒素受體1（transient receptor potential vanilloid 1， TRPV1）參與了這一起效的過程，而且發揮著重要的作用。

近年來，TRPV1參與胃腸道功能的調節作用已經成為研究熱點[12]。TRPV1有可能是通過影響外周和中樞神經系統中ghrelin受體GHSR-1α的含量，進而促進胃腸運動、調節胃酸分泌和保護胃腸黏膜等方面來實現對胃腸疾病的防治作用，也可能是實現腦腸互通的重要通路之一[8-11]。本研究以此為切入點，探討針刺、熱灸不同刺激方式干預足三里穴區對C57BL/6同源野生型小鼠和TRPV1-/-基因敲除小鼠血漿中ghrelin和前額葉皮質中GHSR-1α含量的改變，探討TRPV1是否介導針刺、熱灸對胃腸功能調控通路ghrelin-GHSR-1α的調節過程中。

1 材料與方法

1.1? 實驗動物與分組

健康雄性C57BL/6同源野生型小鼠24只，TRPV1-/-基因敲除小鼠24只，體質量20～25 g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供[清潔級，許可證號：SCXK-（軍）2012-004]。在中國中醫科學院針灸研究所動物房（SPF級）分籠喂養，自然照明，自由攝食、飲水。將24只C57BL/6同源野生型小鼠隨機分成3組，每組8只，分別為空白組、針刺組、熱灸組;24只TRPV1-/-基因敲除小鼠同樣隨機分成3組，每組8只，分別為空白組、針刺組、熱灸組。適應性喂養1周后進行實驗。整個實驗過程中對動物的各種處理均遵照中華人民共和國科技部2006年頒布的有關動物的使用及倫理學規定。

1.2? 主要試劑及儀器

0.9%氯化鈉注射液、10%水合氯醛、4%多聚甲醛（北京華興科諾生物技術有限公司，批號：H14020310;302-17-0;30525-89-4）;Tris、丙烯酰胺、甘氨酸、甲叉雙丙烯酰胺、麗春紅（美國Sigma，批號：77-86-1;122775-19-3;56-40-6;110-26-9/3761-53-3）;HRP goat anti-mouse IgG、HRP goat anti-rabbit IgG（美國Proteintech，批號：18166590）;蛋白酶抑制劑（德國Merck，批號：G106673）;蛋白磷酸酶抑制劑（瑞士Roche，批號：G101932-71-2）;顯影液（中國WellBiology，批號：BTH2601）;GHSR-1α（英國艾博抗貿易有限公司，批號：ab188986）。

電子天平（sartorius公司，型號：MSA36S）;小動物電子秤（上海佑科儀表有限公司，型號：YP10002）;生理溫度刺激儀（上海艾睿生物科技有限公司，型號：BME410C）;小動物專用吸入麻醉機（美國MATRX公司，型號：VMR）;LABOFUGE400R Thermo離心機（美國賽默飛世爾公司，型號：ST8）;酶標分析儀（芬蘭LabsystemsMultiskan MS，型號：MS-352）;臺式高速冷凍離心機（湘儀，型號：H1650R）;全自動酶標洗板機（匯松，型號：PW-812）;恒溫培養箱（光明，型號：DHP-500）;搖床（中國江蘇其林貝爾公司，型號：TS-92）;電泳儀（美國Bio-rad，型號：164-5050）;轉膜儀（中國北京六一儀器廠，型號：DYCZ-40A）;旋渦混合器（中國江蘇其林貝爾公司，型號：QL-901）;針灸針（蘇州針灸用品有限公司，型號：0.18 mm×13 mm）。

1.3? 干預方法

1.3.1? 腧穴選擇與定位及操作? 足三里穴參照李忠仁主編的《實驗針灸學》及擬人比照法[13]選取。足三里穴在大鼠膝關節外側、腓骨小頭下緣5 mm處脛腓骨間隙中，左右兩側各一。

1.3.2? 針刺方法? 用吸入性氣體（異氟烷）對各組小鼠進行麻醉后，剔除穴區局部皮膚的毛，確定小鼠穴位定位后，用75%的酒精消毒，選20號半寸毫針，直刺進針1 mm，行提插，持續5 min（針刺操作均由同一人完成）。

1.3.3? 熱灸方法? 用吸入性氣體麻醉（異氟烷）對小鼠進行麻醉后，剔除穴區局部皮膚的毛后，用75%的酒精對穴區進行消毒。采用生理溫度刺激儀進行穴位熱灸刺激，將溫度探頭直接放置在相應穴位皮膚之上，強度設置為43.5 ℃，每次熱灸持續30 min。

1.4? 實驗步驟

24只雄性C57BL/6同源野生型小鼠和24只雄性TRPV1-/-基因敲除小鼠適應性喂養1周后，分別隨機分成空白組、針刺組、熱灸組，正常喂食。空白組不予以處理;針刺組給予手針干預;熱灸組給予熱灸干預。實驗期間所有實驗小鼠給予異氟烷吸入性麻醉，干預完成后予以1%戊巴比妥鈉行腹腔麻醉，取血及大腦前額葉皮質。觀察血漿中ghrelin表達水平及其受體GHSR-1α在前額葉皮質中的表達變化。

1.5? ELISA法檢測小鼠血漿中ghrelin表達水平

將各種試劑移至室溫（18～25 ℃）平衡至少30 min，按前述方法配置試劑，備用。加樣，分別設標準孔和待測樣本孔，每孔分別加標準品或待測樣本50 μL，立即加入辣根過氧化物酶標記物工作液50 μL（空白孔不加）輕輕晃動混勻，覆上板貼，置37 ℃溫育40 min。棄去孔內液體，甩干，洗板5次。每次浸泡2 min，200 μL每孔，甩干。依序每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光顯色20 min。依序每孔加終止液50 μL，終止反應。在反應終止后5 min內，用酶標儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。

1.6? Western blot法檢測大腦前額葉皮質中TRPV1和GHSR-1α含量表達

剪取0.25 g組織，用冰預冷PBS洗組織，加入200 μL RIPA裂解液于勻漿器中反復研磨組織直至看不見組織塊;冰上裂解10 min后，4 ℃，12 000 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，取上清移至EP管中。采用BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白濃度。將TEMED加入配好的分離膠中混勻后開始灌膠，等分離膠凝結后再灌入含有TEMED的濃縮膠，插入梳子，等凝膠后取出梳子，將準備好樣品移液至空槽中，第一孔上maker，其他孔上已變性蛋白樣品，開始電泳，約2 h。再次，切膠TRPV1（95 kDa）、GRSH-1α（40 kDa），并準備1張與膠同樣大小的濾紙和1張NC膜，然后與濾紙一起放入轉膜緩沖液中，至完全浸透。蓋上儀器，接通電源，轉300 mA，GRSH-1α轉膜完畢后，用1×TBST配制5%脫脂奶粉，將膜浸入后，室溫封閉1.5 h。用1×TBST將一抗按照一定比例稀釋（TRPV1 1∶500，GRSH-1α 1∶1 000），膜與一抗一起孵育，4 ℃過夜。孵育結束，1×TBST洗3次，每次15 min。將稀釋后的二抗與膜共同孵育90 min，兔抗（R）稀釋比例1∶6 000，鼠抗（M）稀釋比例1∶5 000，孵育結束，1×TBST洗3次，每次15 min。最后ECL顯色曝光。

1.7? 統計學方法

統計學數據分析采用SPSS 24.0統計軟件。計量資料以“x±s”表示，先進行正態性檢驗與方差齊性檢驗：滿足正態性，使用單因素方差分析進行組間比較，方差齊用LSD法，方差不齊用Dunnett T3法;若正態性不滿足，則選擇秩和檢驗。以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1? C57BL/6小鼠針刺與熱灸前后前額葉皮層TRPV1表達變化

與C57BL/6空白組相比，C57BL/6小鼠針刺組與熱灸組前額葉皮質TRPV1表達水平升高，差異有統計學意義（P<0.05），但針刺組和熱灸組之間差異無統計學意義（P>0.05）。見圖1。

2.2? C57BL/6和TRPV1-/-小鼠針刺與熱灸前后血漿ghrelin水平變化

與C57BL/6空白組相比，C57BL/6針刺組與熱灸組血漿ghrelin水平顯著降低，差異有統計學意義（P<0.05），但針刺組和熱灸組對比差異無統計學意義（P>0.05）。與TRPV1-/-空白組對比，TRPV1-/-針刺組和熱灸組血漿ghrelin水平差異無統計學意義（P>0.05）;針刺組和熱灸組對比差異無統計學意義（P>0.05）。見圖2。

2.3? C57BL/6和TRPV1-/-小鼠針刺與熱灸前后前額葉皮層GHSR-1α表達變化

與C57BL/6空白組相比，C57BL/6針刺組與熱灸組前額葉皮質GHSR-1α表達水平顯著降低，差異有統計學意義（P<0.05），但針刺組和熱灸組之間差異無統計學意義（P>0.05）;與TRPV1-/-空白組對比，TRPV1-/-針刺組和熱灸組前額葉皮質GHSR-1α表達水平差異無統計學意義（P>0.05）。見圖3。

3 討論

足三里穴具有調理中焦胃腸氣血之功效，是針灸防治胃腸疾病的首選腧穴。針灸足三里穴可使中焦氣血充足、胃腸腐熟水谷和傳化糟粕的功能穩定。《靈樞·五邪第二十》中有記載：“邪在脾胃……陽氣有余，陰氣不足，則熱中善肌;陽氣不足，陰氣有余，則腸中寒鳴腹痛;陰陽俱有余，若俱不足，則有寒有熱，皆調于三里。”《外臺秘要·水病雜療方》言：“又水腹脹皮腫法，灸三里。”《席弘賦·璇璣三里消食方》曰：“胃中有積刺璇璣，三里功多人不知。”通過挖掘文獻發現，針灸足三里可調治胃腸諸證，且具有其他穴位不可替代的優勢[14-16]。

近年來，無論是臨床還是基礎研究[17-19]均表明，針灸治療胃腸疾病效果顯著，其作用機制主要是通過中樞神經系統和靶器官交互響應，激活腦腸軸實現腦腸互通，增強胃腸動力、調節胃酸分泌、促進胃腸激素釋放、介導免疫炎癥反應、改善機體代謝、協調腸道菌群來保持胃腸屏障完整而到達到防治作用。連林雨等[20]研究發現，電針可加速應激性胃潰瘍大鼠胃黏膜損傷修復過程，而這可能與胃黏膜損傷大鼠ghrelin含量的改變密切相關。李琳慧等[21]實驗證實，熱敏灸可調節下丘腦和海馬組織中ghrelin和GHSR-1α蛋白表達，來改善慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜損傷。所以說針灸足三里對胃腸疾病的防治作用，主要是影響了胃腸和中樞神經系統中ghrelin及其受體分泌，互通腦腸信號，繼而發揮整體調節胃腸運動和保護胃黏膜屏障完整的作用。

Ghrelin主要是由胃底黏膜的X/A樣細胞分泌，最早在胃腸道中被發現，隨后在胰腺、甲狀腺、肝臟等器官和大腦皮質、下丘腦、腦干等腦組織中被提取[22-23]。Ghrelin是一種多功能腦腸肽激素，并具有多種生物學活性，而對胃腸疾病影響的研究最為廣泛[24]。通過多方位實驗探索發現，ghrelin在胃腸疾病的防治中主要是通過改善胃腸動力、調節胃腸激素分泌、加速胃黏膜損傷修復等方面實現對胃腸疾病的防治作用[25-26]。而其生物學效應得以充分發揮與其受體GHSR-1α密不可分。GHSR-1α是G蛋白偶聯受體，在中樞與外周組織器官中均有分布[27]。Ghrelin先由胃底黏膜細胞分泌，一部分在外周與受體結合，發揮作用;另一部分通過血液循環，穿透血腦屏障，在高位中樞系統中發揮生物學效應，讓外周與中樞同時響應，是實現腦腸互通的重要途徑[28]。針灸可通過對穴位的干預而激活外周和中樞通路共同參與胃腸功能的調控，劉未艾[29]、吳穎琪[30]、唐雷[31]等均通過實驗發現，這與調節ghrelin分泌而影響其受體蛋白表達相關。本實驗通過對比針刺與熱灸足三里穴區小鼠血漿ghrelin和前額葉皮質GHSR-1α含量表達，發現針刺和熱灸均可降低小鼠ghrelin及其受體蛋白含量，證實針刺、熱灸對胃腸功能的調整均與ghrelin-GHSR-1α這一途徑關系密切。

TRPV1又稱瞬時受體電位香草酸亞型1，屬于離子通道TRP家族成員，分布于外周和中樞感覺神經纖維中，具有感知機械、物理和化學等刺激的特點，它是神經系統中具有整合多種傷害性刺激的感受器，可介導多種疼痛，如炎性痛、熱痛和慢性疼痛等[32-33]。參與機體炎癥和免疫反應的過程，TRPV1與胃腸疾病的發生、發展和調節作用關系密切[34]。TRPV1異常分泌和表達可導致胃潰瘍、腸易激綜合征和胃腸道癌等胃腸道疾病發生。劉瓊[35]、張曉卓[36]、李凱歌[37]等通過實驗發現，針灸可改善TRPV1異常表達，從胃黏膜修復、胃酸分泌調節、促胃腸動力等方面參與胃腸疾病的防治過程。本研究發現針刺、熱灸可促使小鼠前額葉皮質中TRPV1的釋放，而TRPV1基因被敲除后，針刺、熱灸后小鼠血漿ghrelin及前額葉皮質GHSR-1α的含量表達均無明顯改變。所以說TRPV1表達的改變可對胃腸功能調控通路ghrelin-GHSR-1α這一途徑產生影響。

本研究通過實驗驗證了針刺、熱灸均可影響TRPV1和ghrelin及其受體的表達，且ghrelin-GHSR-1α途徑的激活與TRPV1釋放與否關系密切。但針灸對胃腸疾病防治的作用機制復雜，而本實驗僅觀察小鼠在生理狀態下針刺、熱灸作用機制的差異，存在一定局限性，故針刺、熱灸對胃腸疾病模型小鼠作用機制的差異性有待進一步研究。

參考文獻

[1] 孫月華，李宛平.黃芪建中湯聯合針灸對虛寒型胃痙攣患者胃腸激素及TNF-α、hs-CRP水平的影響[J].光明中醫，2021，36（6）：889-891.

[2] 黃? 金，孫? 寧，張? 娜，等.不同針灸療法治療術后腸麻痹的臨床研究進展[J].時珍國醫國藥，2020，31（9）：2223-2225.

[3] 王文炎，梁鳳霞，陳? 瑞.針灸調節胃腸動力機制的研究進展與思考[J].針刺研究，2020，45（9）：771-775.

[4] 劉? 利，檀曉東，宋昱惠，等.針灸治療慢性功能性便秘的安全性及有效性評價[J].遼寧中醫雜志，2021，48（3）：159-162.

[5] GUO Y， WEI W， CHEN J D. Effects and mechanisms of acupuncture and electroacupuncture for functional dyspepsia： A systematic review[J]. World Journal of Gastroenterol， 2020， 26（19）： 2440-2457.

[6] NOGUCHI E. Acupuncture regulates gut motility and secretion via nerve reflexes[J]. Autonomic Neuroscience Basic And Clinical， 2010， 156（1-2）： 15-18.

[7] KOJIMA M， HOSODA H， DATE Y， et al. Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach[J]. Nature， 1999， 402（6762）： 656-660.

[8] BAEK J Y， TRINH T A， HUH W， et al. Electro-Acupuncture Alleviates Cisplatin-Induced Anorexia in Rats by Modulating Ghrelin and Monoamine Neurotransmitters[J]. Biomolecules， 2019， 9（10）： 624.

[9] JANG J H， LEE D J， BAE C H， et al. Changes in small intestinal motility and related hormones by acupuncture stimulation at Zusanli （ST36） in mice[J]. Chinese Journal of Integrative Medicine， 2017. 23（3）： 215-220.

[10] TANG L， ZENG Y， LI L， et al. Electroacupuncture Upregulated Ghrelin in Rats with Functional Dyspepsia via AMPK/TSC2/Rheb-Mediated mTOR Inhibition[J]. Digestive Diseases and Sciences， 2020， 65（6）： 1689-1699.

[11] MAO Y， LI Z， CHEN K， et al. Antinociceptive Effect of Ghrelin in a Rat Model of Irritable Bowel Syndrome Involves TRPV1/Opioid Systems[J]. Cell Physiol Biochem， 2017， 43（2）： 518-530.

[12] WANG S J， YANG H Y， XU G S. Acupuncture Alleviates Colorectal Hypersensitivity and Correlates with the Regulatory Mechanism of TrpV1 and p-ERK[J]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine， 2012， 10（1155）： 483123.

[13] 李忠仁，實驗針灸學[M].北京：中國中醫藥出版社，2007：311-314.

[14] 陳堅義，唐宏圖，王? 華，等.探議足三里[J].中醫學報，2020，35（12）： 2521-2524.

[15] 王寬宇，何巖濤，孔祥定，等.基于“肚腹三里留”理論探析足三里穴治療術后胃腸功能紊亂的研究進展[J].針灸臨床雜志，2019，35（10）：98-101.

[16] 揭麗樺，謝? 煜，徐振華.《針灸大成》足三里穴的臨床應用規律探析[J].環球中醫藥，2018，11（9）：1398-1401.

[17] WANG S J， YANG H Y， WANG F， et al. Acupoint Specificity on Colorectal Hypersensitivity Alleviated by Acupuncture and the Correlation with the Brain-Gut Axis[J]. Neurochem Research， 2015， 40（6）： 1274-82.

[18] YAKLAI K， PATTANAKUHAR S， CHATTIPAKOM N， et al. The Role of Acupuncture on the Gut-Brain-Microbiota Axis in Irritable Bowel Syndrome[J]. American Journal of Chinese Medicine， 2021， 49（2）： 285-314.

[19] FANG J， WANG D， ZHAN Q， et al. Brain-Gut Axis Modulation of Acupuncture in Functional Dyspepsia：A Preliminary Resting-State fcMRI Study[J]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine， 2015， 10（1155）： 860463.

[20] 連林宇，沈佳成，何其達，等.電針對胃黏膜損傷大鼠胃黏膜組織饑餓素與生存素動態表達的影響[J].中華中醫藥雜志，2020，35（1）： 141-145.

[21] 李琳慧，付? 勇，熊? 俊，等.熱敏灸對慢性萎縮性胃炎大鼠Ghrelin及GHSR的影響[J].中華中醫藥雜志，2020，35（11）：5480-5485.

[22] MIHALACHE L， ARHIRE L I， GIUSCA S E， et al. Ghrelin-producing cells distribution in the stomach and the relation with Helicobacter pylori in obese patients[J]. Romanian journal of morphology and embryology， 2019， 60（1）： 219-225.

[23] 楊? 垚，王玉珍.促生長激素釋放素在功能性消化不良中的研究進展[J].消化腫瘤雜志，2021，13（1）：21-24.

[24] TASI C， MILANI S. Functions of Ghrelin in Brain， Gut and Livers[J]. CNS & Neurological Disorders-Drug Targets， 2016， 15（8）： 956-963.

[25] CHEN C Y， ASAKAWA A， FUJIMIYA M， et al. Ghrelin gene products and the regulation of food intake and gut motility[J]. Pharmacol Reviews， 2009， 61（4）： 430-81.

[26] ENGLANDER E W， GOMEZ G A， GREELEY G H Jr. Alterations in stomach ghrelin production and in ghrelin-induced growth hormone secretion in the aged rat[J]. Mechanisms of ageing and development， 2004， 125（12）： 871-885.

[27] HUANG J， LIU W， DOUCHEVA D M， et al. Ghrelin attenuates oxidative stress and neuronal apoptosis via GHSR-1α/AMPK/Sirt1/PGC-1α/UCP2 pathway in a rat model of neonatal HIE[J]. Free Radical Biology and Medicine， 2019， 141： 322-337.

[28] 翁霞霞，陳朝元.Ghrelin在胃腸道中的作用及其與功能性消化不良的相關性研究[J].中國現代醫藥雜志，2020，22（2）：94-97.

[29] 劉未艾.從腦腸軸途徑探討隔藥餅灸對FGIDs肝郁脾虛模型大鼠胃腸動力障礙和感覺異常影響的作用機制[D].長沙：湖南中醫藥大學，2013.

[30] 吳穎琦.針刺“關元”“下巨虛”對應激性潰瘍模型大鼠Ghrelin、IL-1β和IL-4的影響[D].北京：北京中醫藥大學，2020：11-54.

[31] 唐? 雷.電針通過AMPK調節功能性消化不良大鼠Ghrelin的機制研究[D].武漢：湖北中醫藥大學，2019：58-153.

[32] JOSEPH J， QU L， WANG S， et al. Phosphorylation of TRPV1 S801 Contributes to Modality-Specific Hyperalgesia in Mice[J]. Journal of Neuroscience， 2019， 39（50）： 9954-9966.

[33] BUJAK J K， KOSMALA D， SZOPA I M， et al. Inflammation Cancer and Immunity-Implication of TRPV1 Channel[J]. Frontiers in Oncology， 2019， 9： 1087.

[34] 陳? 穎，趙? 妍，王? 路，等.TRP的磷酸肌醇、辣椒素受體在針刺緩解腹瀉型腸易激綜合征大鼠內臟高敏感中的作用[J].針刺研究.2021，46（4）：278-283.

[35] 劉? 瓊.TRPV1參與針、灸不同刺激方法對小鼠穴區局部效應和胃運動調節中樞響應差異的研究[D].長沙：湖南中醫藥大學，2018.

[36] 張曉卓.結腸TRPV1/CaMKⅡ信號介導電針足三里對IBS內臟痛小鼠調節作用的研究[D].上海：上海中醫藥大學，2019：10-79.

[37] 李凱歌，郭孟瑋，譚莉華，等.比較電針“大腸俞”“天樞”穴對腸易激綜合征模型大鼠內臟敏感性、Cajal間質細胞和辣椒素受體1的影響[J].中國針灸，2018，38（6）：625-629.