透骨草不同溶劑提取物對蚜蟲的殺蟲效果研究

□文/邢浩春 魏娜 李同慶 葉嘉 楊明建 昝立峰 李偉偉 丁岐峰

透骨草（Phryma leptostachya L.）是我國傳統中藥材，有鎮痛抗菌、抗過敏、抗搔癢等作用，且有一定毒性，據記載透骨草全株煎水去渣后噴灑菜青蟲、蛆等害蟲，殺蟲率可達100%。在我國分布廣泛，河北是產地之一（別名為藥曲草）。近年來，國內外學者陸續研究了透骨草全株、根、地上部分提取物對家蠅、黏蟲、淡色庫蚊、菇蠅、黏蟲和小菜蛾幼蟲等的殺蟲活性，表明透骨草對上述害蟲均有明顯的殺蟲活性，但對豆蚜、無翅成蚜、蘋果黃蚜、白粉虱、葉螨沒有明顯效果。本實驗通過超聲波提取、萃取透骨草，得到的有效成分進行蚜蟲體外殺蟲活性測定，為透骨草在新型植物源農藥研制方面提供參考依據。

一、材料與方法

1.實驗材料

（1）植物：透骨草（Phryma leptostachya L.）干燥全草，購于藥店。

（2）設備：電子天平、AS系列超聲波清洗機、粉碎機、旋轉蒸發儀、循環水式多用真空泵、電熱恒溫鼓風干燥箱、冰箱、智能編程人工氣候箱。

（3）試蟲：桃蚜（Myzus persicae S.）采于校園未噴灑農藥的桃樹樹葉上，為自然種群。

2.實驗方法

（1）透骨草提取物的制備

將全株透骨草干品打粉過60目篩。準確稱取透骨草干燥粉末與90%甲醇溶液混合冷漬1天，60℃條件下超聲波輔助提取，再抽濾，完成后收集濾液，用旋轉蒸發儀減壓濃縮成浸膏，干燥后收集稱重計算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即為透骨草甲醇提取物。

（2）三種溶劑對透骨草提取物的萃取

將透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解，加入等量石油醚溶液，超聲波輔助萃取，分離水相和石油醚相。繼續向水相中加入同等體積乙酸乙酯和正丁醇，進行萃取，分離得乙酸乙酯相和正丁醇相。分離后石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相分別用旋轉蒸發儀減壓濃縮成浸膏，稱重計算得萃取率。

（3）透骨草甲醇提取物不同溶劑萃取相對蚜蟲生物活性測定

將得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，分別配成0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升、4毫克/毫升濃度進行蚜蟲的觸殺活性測定，比較不同溶劑萃取物對蚜蟲的生物活性效果。載毒葉片法：選取大小相同、新鮮程度一樣的樹葉浸入藥液中，20秒后取出風干，對照組以丙酮溶液做相同處理。于培養皿底部墊上濕潤濾紙，待葉片上溶劑揮發后將葉片放入培養皿中，每個培養皿中接入20頭個體大小相同、健康活波的無翅蚜蟲，重復3次。放置于人工氣候箱中培養。24小時后觀察記錄中毒癥狀，計算死亡率與校正死亡率。

二、結果討論

1.甲醇對透骨草的提取率

300克透骨草得到提取物37.38克，可知甲醇對透骨草有效成分的提取率為12.46%。

2.三種有機溶劑對透骨草甲醇提取物的萃取率

石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后得到萃取物質量分別為0.93克、2.34克、3.84克，萃取率分別為0.31%、0.78%、1.28%。可以看出，乙酸乙酯和正丁醇比較適合透骨草提取物的進一步萃取純化。

3.透骨草不同溶劑萃取物對蚜蟲的生物活性測定

（1）三種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺效果

結果表明：不同濃度3種萃取物對蚜蟲的毒殺活性有顯著差異（p＜0.05）。4毫克/毫升石油醚萃取物對蚜蟲的校正死亡率顯著高于其它處理組；4毫克/毫升、2毫克/毫升、1毫克/毫升的乙酸乙酯萃取物對蚜蟲的校正死亡率均顯著高于0.5毫克/毫升組；4毫克/毫升、2毫克/毫升的正丁醇萃取物對蚜蟲校正死亡率顯著高于1毫克/毫升、0.5毫克/毫升處理組。說明高濃度的溶劑萃取物毒殺蚜蟲活性明顯高于低濃度組，乙酸乙酯萃取物毒殺活性總體最好，在濃度為4毫克/毫升時矯正死亡率達85.07%，其次是石油醚萃取物。

（2）三種溶劑萃取物對蚜蟲毒殺作用的回歸分析

通過對比不同濃度3種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺活性回歸方程及LC50分析，在相同處理時間內，不同提取物和萃取物處理濃度與毒殺蚜蟲的校正死亡率之間均呈現正相關關系。乙酸乙酯萃取物的致死中濃度（LC50）值最低，說明其對蚜蟲的毒殺活性最強，其次是石油醚萃取物和正丁醇萃取物。因此從這個角度分析可以說明，對蚜蟲的毒殺活性依次為乙酸乙酯萃取物＞石油醚萃取物＞正丁醇萃取物。

表1 三種溶劑萃取物對蚜蟲毒殺效果的方差分析和多重比較（S±M）

表2 三種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺作用回歸方程及LC50

三、結論

本試驗測定了不同濃度提取物和萃取物對蚜蟲的毒殺效果。結果顯示，乙酸乙酯對透骨草有效殺蟲成分萃取效果較好。在4毫克/毫升濃度處理下，各組分萃取物均有明顯的毒殺活性效果，但乙酸乙酯的毒殺活性效果最強達到85.07%，且在處理濃度為0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升時，乙酸乙酯的毒殺作用效果均比其它萃取物效果好。因此綜合不同溶劑對透骨草提取物的萃取率和對蚜蟲的毒殺效果，認為乙酸乙酯更適合作為透骨草提取物的萃取劑來防治蚜蟲。