透骨草不同溶劑提取物對蚜蟲的殺蟲效果研究

□文/邢浩春 魏娜 李同慶 葉嘉 楊明建 昝立峰 李偉偉 丁岐峰

透骨草（Phryma leptostachya L.）是我國傳統(tǒng)中藥材，有鎮(zhèn)痛抗菌、抗過敏、抗搔癢等作用，且有一定毒性，據(jù)記載透骨草全株煎水去渣后噴灑菜青蟲、蛆等害蟲，殺蟲率可達100%。在我國分布廣泛，河北是產(chǎn)地之一（別名為藥曲草）。近年來，國內(nèi)外學者陸續(xù)研究了透骨草全株、根、地上部分提取物對家蠅、黏蟲、淡色庫蚊、菇蠅、黏蟲和小菜蛾幼蟲等的殺蟲活性，表明透骨草對上述害蟲均有明顯的殺蟲活性，但對豆蚜、無翅成蚜、蘋果黃蚜、白粉虱、葉螨沒有明顯效果。本實驗通過超聲波提取、萃取透骨草，得到的有效成分進行蚜蟲體外殺蟲活性測定，為透骨草在新型植物源農(nóng)藥研制方面提供參考依據(jù)。

一、材料與方法

1.實驗材料

（1）植物：透骨草（Phryma leptostachya L.）干燥全草，購于藥店。

（2）設(shè)備：電子天平、AS系列超聲波清洗機、粉碎機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、循環(huán)水式多用真空泵、電熱恒溫鼓風干燥箱、冰箱、智能編程人工氣候箱。

（3）試蟲：桃蚜（Myzus persicae S.）采于校園未噴灑農(nóng)藥的桃樹樹葉上，為自然種群。

2.實驗方法

（1）透骨草提取物的制備

將全株透骨草干品打粉過60目篩。準確稱取透骨草干燥粉末與90%甲醇溶液混合冷漬1天，60℃條件下超聲波輔助提取，再抽濾，完成后收集濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸膏，干燥后收集稱重計算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即為透骨草甲醇提取物。

（2）三種溶劑對透骨草提取物的萃取

將透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解，加入等量石油醚溶液，超聲波輔助萃取，分離水相和石油醚相。繼續(xù)向水相中加入同等體積乙酸乙酯和正丁醇，進行萃取，分離得乙酸乙酯相和正丁醇相。分離后石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸膏，稱重計算得萃取率。

（3）透骨草甲醇提取物不同溶劑萃取相對蚜蟲生物活性測定

將得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，分別配成0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升、4毫克/毫升濃度進行蚜蟲的觸殺活性測定，比較不同溶劑萃取物對蚜蟲的生物活性效果。載毒葉片法：選取大小相同、新鮮程度一樣的樹葉浸入藥液中，20秒后取出風干，對照組以丙酮溶液做相同處理。于培養(yǎng)皿底部墊上濕潤濾紙，待葉片上溶劑揮發(fā)后將葉片放入培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿中接入20頭個體大小相同、健康活波的無翅蚜蟲，重復(fù)3次。放置于人工氣候箱中培養(yǎng)。24小時后觀察記錄中毒癥狀，計算死亡率與校正死亡率。

二、結(jié)果討論

1.甲醇對透骨草的提取率

300克透骨草得到提取物37.38克，可知甲醇對透骨草有效成分的提取率為12.46%。

2.三種有機溶劑對透骨草甲醇提取物的萃取率

石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后得到萃取物質(zhì)量分別為0.93克、2.34克、3.84克，萃取率分別為0.31%、0.78%、1.28%。可以看出，乙酸乙酯和正丁醇比較適合透骨草提取物的進一步萃取純化。

3.透骨草不同溶劑萃取物對蚜蟲的生物活性測定

（1）三種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺效果

結(jié)果表明：不同濃度3種萃取物對蚜蟲的毒殺活性有顯著差異（p＜0.05）。4毫克/毫升石油醚萃取物對蚜蟲的校正死亡率顯著高于其它處理組；4毫克/毫升、2毫克/毫升、1毫克/毫升的乙酸乙酯萃取物對蚜蟲的校正死亡率均顯著高于0.5毫克/毫升組；4毫克/毫升、2毫克/毫升的正丁醇萃取物對蚜蟲校正死亡率顯著高于1毫克/毫升、0.5毫克/毫升處理組。說明高濃度的溶劑萃取物毒殺蚜蟲活性明顯高于低濃度組，乙酸乙酯萃取物毒殺活性總體最好，在濃度為4毫克/毫升時矯正死亡率達85.07%，其次是石油醚萃取物。

（2）三種溶劑萃取物對蚜蟲毒殺作用的回歸分析

通過對比不同濃度3種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺活性回歸方程及LC50分析，在相同處理時間內(nèi)，不同提取物和萃取物處理濃度與毒殺蚜蟲的校正死亡率之間均呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。乙酸乙酯萃取物的致死中濃度（LC50）值最低，說明其對蚜蟲的毒殺活性最強，其次是石油醚萃取物和正丁醇萃取物。因此從這個角度分析可以說明，對蚜蟲的毒殺活性依次為乙酸乙酯萃取物＞石油醚萃取物＞正丁醇萃取物。

表1 三種溶劑萃取物對蚜蟲毒殺效果的方差分析和多重比較（S±M）

表2 三種溶劑萃取物對蚜蟲的毒殺作用回歸方程及LC50

三、結(jié)論

本試驗測定了不同濃度提取物和萃取物對蚜蟲的毒殺效果。結(jié)果顯示，乙酸乙酯對透骨草有效殺蟲成分萃取效果較好。在4毫克/毫升濃度處理下，各組分萃取物均有明顯的毒殺活性效果，但乙酸乙酯的毒殺活性效果最強達到85.07%，且在處理濃度為0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升時，乙酸乙酯的毒殺作用效果均比其它萃取物效果好。因此綜合不同溶劑對透骨草提取物的萃取率和對蚜蟲的毒殺效果，認為乙酸乙酯更適合作為透骨草提取物的萃取劑來防治蚜蟲。