青海不同產區羌活抗菌活性比較

李美雎，劉 葉，尚 軍，陳海娟

(青海師范大學生命科學學院，青海 西寧 810008)

羌活為傘形科植物羌活(Notopterygiumincisum)或寬葉羌活(Notopterygiumforbesii)的干燥根莖和根。性味與歸經：辛、苦，溫，歸膀胱、腎經。功能與主治：散寒、驅風除濕、止痛。用于風寒感冒，頭痛項強，風濕痹痛，肩背酸痛[1]。羌活化學成分復雜，主要含有香豆素、揮發油、甾醇、氨基酸、有機酸等[2～7]。其中羌活含有2個活性成分falcarindiol(鐮葉芹二醇)和phenethyl ferulate(苯乙基阿魏酸酯)，對金黃色葡萄球菌有明顯的抗菌活性[8，9]。

實驗通過天然藥物體外抗菌活性篩選方法，篩選出羌活抗菌活性部位，并以金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、產氣桿菌(Enterobacteraerogenes)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、變形桿菌(Proteusvulgaris)、陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)評價不同產地羌活抗菌活性，以期為羌活抗菌活性藥物開發提供基礎數據。

1 研究方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 隔水恒溫培養箱、可調微量移液器(1 000 μL、200 μL、50 μL)、超聲波清洗器 (SB-5200TDT)、立式壓力蒸汽滅菌鍋(LS-35HD)、無菌操作臺、臺式低速離心機(TD5A)。

1.1.2 藥品與藥材 取采挖于青海省紅軍溝、松多、久治、大通、互助等地的羌活藥材，將其粉碎后過60目篩，密閉保存，備用。陽性藥物青霉素鈉購買于中諾藥業(石家莊)有限公司。

1.1.3 實驗菌株 金黃色葡萄球菌、產氣桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌這7株用于羌活活性部位篩選和抗菌活性比較的指示菌均來自于中國普通微生物菌種保藏中心，于-20 ℃低溫冰箱凍存，實驗前3～4 h復活使用。

1.2 方法

1.2.1 羌活抑菌活性部位制備 將羌活藥材粉碎，過60目篩，以料液比1∶8，用無水乙醇超聲提取2 h，共3次，過濾，合并濾液，減壓濃縮，得羌活粗提取物浸膏。加水將其制成混懸液，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮，干燥，備用。

1.2.2 供試品溶液的制備 精密稱定各羌活提取物，加入1 mLDMSO超聲溶解，搖勻，精密量取0.2 mL樣品液于10 mL容量瓶中，加25%的DMSO定容至刻度，即供試品溶液。

1.2.3 陽性藥溶液的制備 將青霉素鈉(80萬單位)用25%DMSO稀釋至5萬單位；空白組設為25%DMSO溶液。

1.2.4 菌懸液的配置 將實驗菌活化后，加入無菌水輕輕刮下菌苔并按1∶9的比率稀釋成1×104倍，即菌懸液，備用。

1.2.5 抑菌活性考察

1.2.5.1 給藥方案及分組 空白組加入240 μL25%DMSO溶液；陽性組加入240 μL5萬單位青霉素鈉；實驗組加入240 μL羌活不同部位供試品溶液，每組設3個平行組，重復3次。

1.2.5.2 抑菌活性部位篩選及比較 在無菌條件下，用營養瓊脂培養基制備不同產地的羌活抑菌活性部位，運用牛津杯法考察羌活不同提取部位的抗菌活性，用游標卡尺測量抑菌圈直徑并記錄數據。

1.2.6 數據處理 數據分析采用SPSS17.0進行方差分析，數據以x±s(此公式表示數值偏差平均數的變動范圍，其中x表示平均數，s表示方差)表示。

2 結果與分析

2.1 羌活不同部位的抑菌作用

由表1可知，羌活5個活性部位對糞腸球菌和大腸桿菌均表現出較強的抗菌效應，與空白對照組相比除了水層對糞腸球菌和大腸桿菌抗菌效應差異不顯著外，其它部位差異有統計學意義(P<0.01)。且不同部位間的抗菌效應強弱不同，其中石油醚、水層及正丁醇3個部位對糞球菌抑菌效應差異不顯著，無統計學意義(P<0.05)；水層部位對大腸桿菌抑菌效應差異不顯著，無統計學意義(P<0.05)；氯仿部位與其它4個部位相比，對兩種菌的抑菌效應均較強，差異極顯著(P<0.01)，故選取氯仿部位作為寬葉羌活抑菌活性部位。

表1 羌活不同部位間的抑菌作用

2.2 不同產地羌活的抑菌作用

由表2可知，不同產地羌活對受試菌均表現出一定的抗菌活性。與空白組相比紅軍溝、互助、大通產地羌活均有統計學意義(P<0.05或0.01)；松多、久治產地羌活除對銅綠假單胞菌的抑菌效應無統計學意義之外，對其它菌的抑菌效應均具有統計學意義(P<0.05或0.01)。其中，對陰溝腸桿菌抗菌效應最強的是紅軍溝產地的羌活，顯著高于其它產地羌活，差別有統計學意義(P<0.05或0.01)；對大腸桿菌抗菌效應最強的是松多產的羌活，顯著高于其它產地羌活，差別具有統計學意義(P<0.05或0.01)；對產氣桿菌抗菌效應最強的是松多產的羌活，顯著高于久治產的羌活，差別具有統計學意義(P<0.05或0.01)，與其它產地羌活差別不顯著；對變形桿菌抗菌效應最強的是紅軍溝產地的羌活，與其它產地羌活差別不顯著；對糞腸球菌抗菌效應最強的是紅軍溝產地的羌活，顯著高于其它產地羌活，差別具有統計學意義(P<0.05或0.01)；對銅綠假單胞菌抗菌效應較弱，整體效果不佳；對金黃色葡萄球菌抗菌效應最強的是久治產的羌活，與互助產羌活相比差異顯著(P<0.05或0.01)，與其它地區產羌活差異不顯著。

表2 不同產地羌活抑菌作用比較

3 討論

自從磺胺類藥物和青霉素應用于臨床上，抗菌藥物得到廣泛使用，但是細菌對抗菌藥物產生耐藥性的問題也日益突出，嚴重威脅人類健康，中藥發展幾千年的實踐經驗證明不少中藥具有抗菌活性、副作用小、很少產生耐藥性等特點，現在人們更傾向于選擇中藥進行抗菌研究[10]。有研究報道，復方川紫方具有抗菌消炎、通絡止痛、行氣活血散瘀等功能，由川芎、紫草、羌活等十余味藥組成[11]。

不同產地羌活對受試菌均表現出一定的抗菌活性，但對每一種菌的抗菌活性表現出一定的選擇性，提示羌活氯仿活性部位具有廣譜抗菌效應，可作為羌活抗菌藥物開發物質基礎。經過體外抗菌活性篩選實驗結果表明，羌活的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水層、正丁醇5個活性部位，具有不同的抗菌效應，其中氯仿部位較其它部位抗菌效應更強(P<0.05)；不同產地羌活抗菌活性體現不一樣，對7個膽囊炎相關菌的作用不同，與空白組相比，紅軍溝、互助、大通產地的羌活抗菌活性顯著高于對照(P<0.05或0.01)，松多、久治產地的羌活除對銅綠假單胞菌的抑菌效應無差異，對其它菌的抑菌效應顯著增加(P<0.05或0.01)。由于本實驗將人體給藥最大劑量換算為體外給藥劑量，所以關于羌活氯仿活性部位量效關系還有待于進一步研究。