馬齒莧對(duì)離體心臟藥理作用研究*

李 蓉，朱 疆，付 圍，張荷蘭，高 垚

（楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校，云南 楚雄 675005）

充血性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是由多種原因?qū)е滦呐K結(jié)構(gòu)和（或）功能的異常改變，從而使心室收縮和（或）舒張功能發(fā)生障礙，進(jìn)而引起的一組復(fù)雜臨床綜合征[1]。據(jù)《2018年中國心血管病報(bào)告》報(bào)道，目前心力衰竭患病人數(shù)約500萬，且患病率還在逐年攀升[2]。目前治療心力衰竭的藥物不多且毒副作用較大，因此，預(yù)防和治療心力衰竭是臨床與科研急需解決的一大問題。

馬齒莧（Portulaca oleracea L.）是一種古老的野生植物，分布區(qū)域廣泛，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗氧化等作用[3]。馬齒莧民間俗稱“長壽菜”，作為藥食已有上千年的歷史，應(yīng)用相當(dāng)廣泛[4-6]。另外，馬齒莧被世界衛(wèi)生組織評(píng)價(jià)為最常用的藥用植物之一，有“全球的靈丹妙藥”之稱[7]。XIE J H[8]等研究發(fā)現(xiàn)，在阿拉伯半島采集的馬齒莧可作為口腔潰瘍和泌尿紊亂方面的抗菌劑。MOHAMED A I等[9]研究發(fā)現(xiàn)馬齒莧可作為肌肉松弛劑。馬齒莧水煎液能降低異位性皮炎患者血清總IgE，減緩皮膚炎癥[10]。馬齒莧水提取物能通過增加β-細(xì)胞因子，改善葡萄糖代謝[11]。馬齒莧生物堿能有效抑制乳腺癌細(xì)胞的生長，調(diào)控腫瘤細(xì)胞代謝，對(duì)腫瘤的血管內(nèi)皮生長因子有顯著的抑制作用[12]。馬齒莧水提取物對(duì)氨水誘發(fā)的咳嗽有顯著的抑制作用，能減少咳嗽次數(shù)，具有鎮(zhèn)咳作用[13]。因此，馬齒莧的藥理作用十分廣泛，對(duì)其進(jìn)行深入的研究是十分有意義的。本研究擬探討馬齒莧與西地蘭對(duì)牛蛙離體心臟心肌收縮力、毒性等作用，為臨床研究開發(fā)強(qiáng)心新藥提供資料。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康牛蛙100只，雌雄不限，體質(zhì)量（260±50）g，購于本地水產(chǎn)品市場(chǎng)，并由本校生物學(xué)錢興勇教授鑒定為健康合格牛蛙，課題組成員均已參加云南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員專業(yè)培訓(xùn)，并獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究資格，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范。

1.2 藥物與試劑 馬齒莧全草，采于云南省楚雄市東瓜鎮(zhèn)唐家村田邊，經(jīng)本校中藥鑒定室鑒定為中藥材馬齒莧（Portulaca oleracea L.）；去乙酰毛花苷注射液（西地蘭，成都倍特藥業(yè)有限公司，批號(hào)：181001，規(guī)格：2 mL∶0.4 mg）；鹽酸普萘洛爾片（心得安，江蘇亞邦愛普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：E200102，規(guī)格：10 mg）；鹽酸腎上腺素注射液（遂成藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：62003161，規(guī)格：1 mg∶1 mL）；所用試劑均為分析純；純化水由楚雄州人民醫(yī)院制劑室提供。

1.3 主要儀器 啟天B4550-B031計(jì)算機(jī)（聯(lián)想有限公司）；肌張力傳感器、BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟公司）；Scout SE型電子天平（奧豪斯儀器有限公司）；MC-HI8SO11庭新牌多功能紅外爐（中山市家福來電器有限公司）；JK-23李時(shí)珍全自動(dòng)保健壺（深圳市福田區(qū)博佳不銹鋼制品廠）；蛙心夾、蛙心套管（成都泰盟公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物制備

2.1.1 10%的馬齒莧水煎液（母液）的制備 取馬齒莧全草，洗凈曬干后，剪成小段，稱取10 g，加適量純化水浸泡30 min，武火煎煮至沸騰后改為文火煎煮30 min，濾過；藥渣再加適量純化水繼續(xù)煎煮15 min，濾過；合并兩次濾液，于水浴上濃縮并配制成100 mL即得，用時(shí)純化水稀釋為0.2%的溶液。

2.1.2 任氏液的配制 參考《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[14]配方配制，配方：NaCl 6.5 g/L，KCl 0.14 g/L，NaHCO30.2 g/L，NaH2PO40.01 g/L，葡萄糖2 g/L，CaCl20.12 g/L。

2.1.3 缺鈣任氏液 除去CaCl2，其他同任氏液的配制。

2.1.4 200 mg/L心得安的制備 取鹽酸普萘洛爾1片（10 mg）研細(xì)，用注射用水稀釋至50 mL即可。

2.1.5 200 mg/L腎上腺素溶液的制備 取鹽酸腎上腺素注射液1支（1 mg∶1 mL），用注射用水稀釋為5 mL即可。

2.2 馬齒莧、西地蘭對(duì)離體衰竭心臟的作用 取牛蛙40只隨機(jī)分為對(duì)照組、缺鈣組、馬齒莧組和西地蘭組，每組10只。所有牛蛙均將脊髓破壞針于枕骨大孔處插入破壞蛙的腦和脊髓，采用斯氏（Straub）離體蛙心法[14]制備離體蛙心，在蛙心套管內(nèi)灌注0.5 mL任氏液，再用蛙心夾夾住心尖，連于BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的張力傳感器上，即可打開計(jì)算機(jī)和機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄蛙心的正常收縮張力曲線。對(duì)照組待作用穩(wěn)定后再灌注0.2 mL任氏液并記錄其收縮活動(dòng)曲線。缺鈣組同樣方法制備離體蛙心標(biāo)本后換入0.7 mL缺鈣任氏液反復(fù)沖洗致心衰[15]，記錄其收縮活動(dòng)曲線作為缺鈣后心臟衰竭指標(biāo)。馬齒莧組和西地蘭組則是將制備好的正常蛙心用缺鈣任氏液處理為衰竭心臟后，吸出0.2 mL缺鈣任氏液，再分別向蛙心套管內(nèi)灌注0.2%馬齒莧水煎液0.2 mL和0.02%西地蘭0.2 mL，觀察并記錄心臟的收縮活動(dòng)的變化。實(shí)驗(yàn)中蛙心活動(dòng)均采用BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄，用TM-WAVE軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，區(qū)間測(cè)量和圖形剪輯等導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析對(duì)比。

2.3 心得安及腎上腺素對(duì)馬齒莧作用的影響 隨機(jī)取10只牛蛙，制備離體蛙心，方法同“2.2”。實(shí)驗(yàn)前，先灌注0.5 mL任氏液觀察離體蛙心正常收縮活動(dòng)，待作用穩(wěn)定后再灌注0.2 mL任氏液，記錄蛙心收縮活動(dòng)曲線，作為正常對(duì)照。蛙心套管內(nèi)保留0.5 mL任氏液心臟活動(dòng)穩(wěn)定后，再灌注200 mg/L心得安溶液0.2 mL，待收縮曲線變化并穩(wěn)定后吸出液體；用任氏液沖洗3次后灌注0.5 mL任氏液穩(wěn)定后再灌注0.2%馬齒莧0.2 mL；同樣方法再次沖洗后灌注200 mg/L腎上腺素0.2 mL和0.2%馬齒莧0.2 mL。每更換一種藥液，迅速用任氏液沖洗3次，并保留套管內(nèi)0.5 mL任氏液待心臟收縮穩(wěn)定后，再進(jìn)行灌注，實(shí)驗(yàn)過程中始終保持蛙心套管內(nèi)液面高度一致，以保證給藥前后心肌負(fù)荷一致，并且在幾組藥的比較中均用同一只蛙心，共重復(fù)了10只，其重復(fù)性和穩(wěn)定性均能達(dá)到理想效果。

2.4 馬齒莧、西地蘭對(duì)正常離體心臟的作用 取20只牛蛙隨機(jī)分為馬齒莧組和西地蘭組，每組10只，兩組同“2.2”方法制備離體蛙心標(biāo)本后，保持蛙心套管內(nèi)任氏液0.5 mL，連接BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄蛙心的正常收縮曲線，待心臟收縮活動(dòng)穩(wěn)定后，向蛙心套管內(nèi)灌注0.2 mL任氏液作為正常對(duì)照，待作用穩(wěn)定后吸出蛙心管內(nèi)任氏液0.2 mL，記錄蛙心的正常收縮張力曲線。馬齒莧組待作用穩(wěn)定后灌注0.2%馬齒莧0.2 mL，西地蘭組同樣方法灌注0.02%西地蘭0.2 mL，觀察記錄各組給藥前后心臟收縮活動(dòng)的變化。

2.5 各組牛蛙離體心臟存活時(shí)間比較 取30只牛蛙隨機(jī)分為對(duì)照組、馬齒莧組和西地蘭組，每組10只，按文獻(xiàn)[14]方法制備離體蛙心標(biāo)本，按文獻(xiàn)[15]方法制備心力衰竭心臟，對(duì)照組灌注任氏液0.5 mL，馬齒莧組灌注0.2%馬齒莧0.5 mL，西地蘭組灌注0.02%西地蘭0.5 mL，并在同室溫條件下放置觀察記錄心臟停止正?；顒?dòng)出現(xiàn)的時(shí)間。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（）表示，組內(nèi)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，組間整體比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 各組牛蛙離體衰竭心臟收縮力比較 缺鈣組牛蛙離體衰竭心臟收縮力明顯低于對(duì)照組（P<0.01），表明缺鈣使心臟收縮力減弱；馬齒莧組和西地蘭組牛蛙離體衰竭心臟收縮力明顯高于缺鈣組（P<0.01），表明馬齒莧和西地蘭有增強(qiáng)心肌收縮力的作用；馬齒莧組牛蛙離體衰竭心臟收縮力與西地蘭組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組離體蛙心表現(xiàn)出相似的作用規(guī)律，可以判定馬齒莧水煎液具有明確的強(qiáng)心作用。（見圖1～2、表1）

表1 各組牛蛙離體衰竭心臟收縮力比較（，n=10）

表1 各組牛蛙離體衰竭心臟收縮力比較（，n=10）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.01；與缺鈣組比較，bP<0.01

圖1 馬齒莧對(duì)離體衰竭心臟的作用

圖2 西地蘭對(duì)離體衰竭心臟的作用

3.2 各組藥物對(duì)馬齒莧作用的影響 正常離體牛蛙心臟灌注心得安后，心臟收縮幅度大幅度下降，當(dāng)灌注馬齒莧后收縮幅度出現(xiàn)明顯上升，但與正常離體蛙心比較，心臟收縮幅度有所下降，表明心得安可抑制馬齒莧對(duì)心臟收縮力度的增強(qiáng)作用。而灌注腎上腺素后心臟收縮幅度明顯增大，此后再灌注馬齒莧后心臟收縮幅度仍強(qiáng)于正常離體蛙心，表明馬齒莧與腎上腺素均能增強(qiáng)離體心臟的心肌收縮力。（見圖3、表2）

圖3 離體心臟收縮力變化趨勢(shì)圖

表2 心得安及腎上腺素對(duì)馬齒莧作用的影響（，n=10）

表2 心得安及腎上腺素對(duì)馬齒莧作用的影響（，n=10）

3.3 各組藥物對(duì)正常離體心臟的作用比較 馬齒莧組正常心臟收縮力增強(qiáng)，而西地蘭組正常心臟收縮力減弱且停止于舒張期，表明馬齒莧的安全范圍遠(yuǎn)大于西地蘭。（見圖4～5、表3）

圖4 馬齒莧對(duì)正常離體心臟的作用

圖5 西地蘭對(duì)正常離體心臟的作用

表3 馬齒莧和西地蘭對(duì)正常心臟活動(dòng)的影響（，n=6）

表3 馬齒莧和西地蘭對(duì)正常心臟活動(dòng)的影響（，n=6）

3.4 各組藥物對(duì)離體心臟存活時(shí)間比較 馬齒莧組存活時(shí)間明顯長于西地蘭組（P<0.01），表明馬齒莧對(duì)心臟有保護(hù)作用；西地蘭組存活時(shí)間明顯低于對(duì)照組（P<0.01），表明此用藥劑量下西地蘭對(duì)心臟有毒性反應(yīng)；馬齒莧組存活時(shí)間與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明馬齒莧對(duì)心臟無毒性而且有一定的保護(hù)作用。（見表4）

表4 馬齒莧對(duì)離體心臟存活時(shí)間的影響（，n=10）

表4 馬齒莧對(duì)離體心臟存活時(shí)間的影響（，n=10）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.01；與西地蘭比較，bP<0.01

4 討 論

馬齒莧在臨床上主要用于治療糖尿病、炎癥、瘙癢癥、腸胃疾病、鼻疔等疾病[16]。而心力衰竭是冠心病、肺心病等持續(xù)進(jìn)展后的終末階段，會(huì)導(dǎo)致患者心臟功能水平下降，生活質(zhì)量下滑。臨床上主要通過增強(qiáng)心肌收縮力、排除多余體液及促進(jìn)血液循環(huán)等方法治療。近年來，中醫(yī)在治療心力衰竭上的作用越來越受到重視，可有效提高患者生存質(zhì)量[17]。本研究發(fā)現(xiàn)馬齒莧對(duì)正常離體心臟和離體衰竭心臟心肌收縮力均有明確的增強(qiáng)作用，并且強(qiáng)于西地蘭，而毒性反應(yīng)則低于西地蘭，可以延緩心臟的衰竭。臨床常用的強(qiáng)心苷治療的安全范圍較小，一般治療量已接近中毒量的60%[18]。故馬齒莧非常值得進(jìn)一步開發(fā)與研究，為臨床開發(fā)治療心力衰竭的新藥提供理論支撐資料。但現(xiàn)代藥理研究表明，目前對(duì)馬齒莧有效成分的研究尚停留在混合物層面，其藥理作用機(jī)制研究還不夠深入，很多藥理活性作用機(jī)制還不夠明確[19]。本研究表明馬齒莧水煎液對(duì)離體心肌收縮力的增強(qiáng)可被心得安抑制，這與通過β受體介導(dǎo)的腎上腺素作用相似，提示馬齒莧對(duì)離體蛙心心肌收縮力的增強(qiáng)作用可能通過β受體途徑而實(shí)現(xiàn)，還有待進(jìn)一步驗(yàn)證，本課題組將致力于進(jìn)一步探討其有效成分及其藥理作用和其作用機(jī)制，進(jìn)而拓展馬齒莧的應(yīng)用前景。